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1、1 植物离体培养 植物离体培养 在在无菌和人工控制环境条件下 利用适当培养基 对植物的组织 器 官 细胞及原生质体进行培养 诱发再生细胞 产生愈伤组织 丛生芽 使其产生进而 生成完整植株的过程或生产有效代谢产物的过程 园艺植物组织培养学 园艺植物组织培养学 研究果树 蔬菜 花卉等园艺植物离体培养的原理 方法技术和 应用的一门技术科学 外植体 外植体 由活体植物体上提取下来的进行无菌培养的各种植物体结构材料 园艺植物 园艺植物 果树 蔬菜 花卉观赏树木及药用和香料植物 胚胎培养 胚胎培养 指以子房或胚珠中的成熟或未成熟胚或胚乳为目标外植体的离体无菌培养 包括原胚 幼胚 成熟胚培养及试管受精 器官
2、培养 器官培养 指以植物的根 茎 叶 花 果器官及其原基的离体无菌培养 原生质体培 原生质体培 指以原生质体 原生质体融合体和原生质体的遗传转换体为外植体的离体 无菌培养 细胞培养 细胞培养 指体细胞以单个游离细胞 多细胞和细胞的遗传转化体为外植体的离体无菌 培养 组织培养组织培养 指以分离出植物各部位的组织或已诱导的愈伤组织等为外植体的离体无菌培 养 花药花粉培养 花药花粉培养 以花药或花粉为外植体诱导单倍体细胞系和单倍体植株的无菌培养 植物组织培养的分类 植物组织培养的分类 按按培养对象 组织培养 器官培养 胚胎培养 细胞培养 原生 质体培养等 据培养物培养过程 初代培养 继代培养 据培养
3、基的物理状态 固体培 养 液体培养 植物组织培养发展简史可有哪几个阶段 植物组织培养发展简史可有哪几个阶段 1 植物组织培养的开创 2 植物组织培养的奠 基 3 植物组织培养的建立 植物组织培养主要应用于植物组织培养主要应用于 园艺植物良种离体快繁 无病毒园艺种苗培育 培育和创制 新品种 植物种质资源的离体保存 生物制品工厂化生产 生产人工种子 2 消毒 消毒 指杀死 消除或充分抑制部分微生物 使之不再发生危害作用 灭菌 灭菌 指用物理或化学的方法 杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体 即把所 有生命体的物质全部杀死 无菌接种 无菌接种 植物材料经严格的表面灭菌处理 再经无菌操作手续接到培
4、养基上 无菌培养 无菌培养 指把培养材料放在培养室或培养箱里 在人工控制的光照 温度条件下 使 之生长 分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化成再生植株的过程 无菌操作无菌操作 在通过严格灭菌的操作空间里 使用无菌的器皿用具 在操作者的手不带任 何活着的微生物的条件下进行的操作 外植体褐变外植体褐变 指在接种后 由于植物组织中的多酚氧化酶被激活 而使细胞代谢发生变 化 产生棕褐色的醌类物质 使外植体表面开始褐变 甚至扩散到培养基 使整个培养 基褐变的现象 减轻减轻褐变褐变方法方法 1 选择合适的外植体 2 合适的培养条件 3 使用抗氧化 剂 4 连续转接 外植体玻璃化外植体玻璃化 指有些嫩茎 叶片
5、等外植体不断进行离体增殖时 往往会呈半透明水渍 状的现象减轻方法 减轻方法 在培养基中添加少量聚乙烯醇 增加培养基中的溶质水平 以降低 培养基的水势 减少培养基中含氮化合物的用量 增加光照 增加容器通风 最好进行 CO2 施肥 降低温度 进行变温培养 降低培养基中细胞分裂素含量 可以考虑添加适 量脱落酸 植物组培配制培养基母液植物组培配制培养基母液优点优点 可减少每次配制称量药品的麻烦 简便植物组织培养的 工作 减少极微量药品在称量中造成的误差 配制方法 配制方法 单配法 法 基本培养基混配法 注意事项 注意事项 药品称量及定容都要准确 配制母液的浓度适当 要用蒸馏水或重蒸馏水 妥善保存母液
6、药品应选取等级较高的化学纯或分析纯 方法正确 简述配制植物组培培养基的具体操作步骤简述配制植物组培培养基的具体操作步骤 母液量取和各营养成分混合 琼脂和蔗糖的 称量及蒸制 培养基混合 PH 值调节及定容 培养基分装 灭菌 简述植物组培中的常用灭菌方法及其使用范围简述植物组培中的常用灭菌方法及其使用范围物理 干热 湿热 射线 和化学 升 汞 甲醛 双氧水 高锰酸钾 来苏儿 漂白粉 3 喷雾灭菌 4 过滤灭菌 5 灭菌 6 消毒 剂灭菌 7 简述植物初代培养时植物材料简述植物初代培养时植物材料的的无菌接种技术 无菌接种技术 在超净工作台上 材料用消毒剂灭菌和 无菌水冲洗后 取出放置在灭过菌的培养皿
7、或接种盘的滤纸或多层纱布上 材料的水分 被吸干后 一手拿镊子 一手拿剪子或解剖刀 对材料进行适当的切割 用无菌器械将 切割好的外植体插值或放置到培养基上 组培苗移栽基质组培苗移栽基质 具备通气性保湿性和一定的肥力 容易灭菌处理 常见的移栽基质常见的移栽基质 河 砂 草炭土 腐殖土 3 培养基培养基 植物外植体生长和维持用人工配制的营养基质 它能固定外植体和为外植体 生长发育提供通气及所需营养物质 大量元素 大量元素 一般指在培养基中的浓度大于 0 5mol l 的元素 包括 N P S K Ca Mg 微量元素 微量元素 一般指在培养基中的浓度指小于 0 5mol l 的元素 包括 Fe Mn
8、 Cu Cl B Mo Co 等 植物组培实验室的组成植物组培实验室的组成 化学药品贮藏室 准备室 灭菌室 无菌操作室 培养室 细 胞学实验室 根据凝固剂的有无和培养基组成水平不同植物组织培养基有哪些类型 根据凝固剂的有无和培养基组成水平不同植物组织培养基有哪些类型 凝固剂有无 液体培养基 固体培养基组成水平 基本培养基 完全培养基 简述植物组培常用基本培养基及其特点简述植物组培常用基本培养基及其特点 MS 培养基 B5 培养基 White 培养基 KM 8P 培养基 植物组培培养基的组成成分植物组培培养基的组成成分 水 无机盐 有机物 植物生长调节剂 天然复合物 培养 体的支持材料及其它添加
9、物 在植物组培中细胞分裂素和生长素主要作用 在植物组培中细胞分裂素和生长素主要作用 1 有利于根和愈伤组织的形成 2 有利于根 芽的分化 3 有利于芽的形成 简述植物组培中的激素配比模式简述植物组培中的激素配比模式 决定着外植体的发育方向 是愈伤组织长根还是长芽 高 有利于根的形成和愈伤组织 的形成 低 有利于芽的形成 活性炭在植物组培中的作用有哪些 活性炭在植物组培中的作用有哪些 1 防褐变 2 促进新梢的形成和伸长 3 促进生根 4 减轻玻璃化苗 植物组培需要考虑的培养条件主要有哪些 植物组培需要考虑的培养条件主要有哪些 1 温度 2 光照 3 湿度 4 渗透压 5 氧气 6 PH 值 花
10、药花粉花药花粉离体离体培养培养 在人工合成培养基上 接种无菌花药或花粉 改变发育途径 使其 不形成胚子而如体细胞一样分裂分化 最终发育为完整植物 小孢子离体培养可能的发育途径小孢子离体培养可能的发育途径 A 途径 营养细胞的发育 A V 途径 B 途径 生殖细 胞的发育 A G 途径 C 途径 生殖细胞和营养细胞同时发育 A VG 途径 花粉花粉离体离体培养培养法法 悬滴 液体浅层 花药看护 平板 条件培养 论述影响花粉花药离体培养效率的因素 论述影响花粉花药离体培养效率的因素 基因型 品种和种类 花药花粉生理状态 花 粉发育期 花粉二型性 药壁因子 培养前的低温预处理 培养基 培养温度光照条
11、件 花粉密度 花丝花药的切割 花药离体培养前怎样预处理 花药离体培养前怎样预处理 花蕾在 3 5 摄氏度低温下处理 3 19 天 预处理原因 预处理原因 改善 花粉的生理水平 延缓花粉退化 提高内圆激素水平 启动雄核发育 显著提高花药诱 导率 花药与花粉培养 花药与花粉培养 指在人工合成培养基上 接种无菌花药或花粉 改变花粉发育途径 使其不形成配子 而如体细胞一样分裂 分化 最终发育成完整植株 花药与花粉培养应用花药与花粉培养应用 1 远缘杂交新类型的培育和稳定 2 有利于隐性突变体筛选 提高选 择效率 3 花粉原生质体与二倍体细胞融合 成为体配杂种 在园艺植物上更具有利用价 值 4 花粉原生
12、质体为良好的遗传受体 使目的基因易于表达 且不会有嵌合体干扰 5 利 用花培技术进行园艺植物基础理论研究 与花粉培养相比 花粉培养有何特殊性 与花粉培养相比 花粉培养有何特殊性 培养对象花粉 操作水平细胞培养 无混倍现 象 花粉培养难度更大 4 植物细胞全能性植物细胞全能性 具完整膜系统和细胞核的植物的每个活细胞都包含着该物种的全部 遗传信息 在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力 脱分化脱分化 已分化的细胞在人工诱导条件下 恢复分生能力 恢复到分生组织状态的过程 再分化 再分化 脱分化后具分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程 重新形成各类组织 器官的过程 胚状体 胚状体 离体培养条件
13、下 没有经过受精过程 但是经过了胚胎发育过程所形成的类似 合子胚的结构物 实现植物细胞全能性的条件有哪些 实现植物细胞全能性的条件有哪些 离体条件 切割损伤刺激 营养物质及激素的刺激 光照和温度等培养条件的影响 简述植物组织培养的特点简述植物组织培养的特点无菌 包括外植体 培养基及接种环境 外植体处于人工培 养基提供营养的异养状态 外植体离体状态 培养容器完封闭 培养目的可人工控制 植物离体胚胎培养 植物离体胚胎培养 指对植物的胚 子房 胚乳和胚珠进行立体培养 使其发育成完整 植株植物的技术 胚乳培养胚乳培养 采用人工方法把胚乳从种子 子房或胚珠中分离出来 于无菌培养基中培养 让其进一步生长
14、以至形成幼苗的过程 子房培养 子房培养 指将子房从母体上分离下来 放在人工配制的培养基上 使其进一步生长发 育成为幼苗的过程 植物胚胎培养类型 植物胚胎培养类型 幼体胚培养 成熟胚培养 植物胚胎培养的应用 植物胚胎培养的应用 促进发育不良或中途败育的胚的成熟 打破休眠期促进胚萌发 克服多胚品种珠心胚的干扰 繁育良种砧木 胚性愈伤组织 提高种子发芽率 探讨胚 胎发育机制 幼胚离体培养可能的发育途径 幼胚离体培养可能的发育途径 按正常胚胎发育途径形成植株 胚胎脱分化形成愈伤组 织 早熟萌发 影响植物胚胎培养因素 影响植物胚胎培养因素 培养基渗透压 生长调节剂及其他附加物 环境条件 胚柄 胚乳培养的
15、用途 胚乳培养的用途 替代原胚培养技术 救助中途败育的杂种胚 获得杂种后代 未授粉 胚珠的离体培养可诱导孤雌生殖 产生雌性单倍体 未授粉的胚珠用于离体授粉受精 客服孢子不亲和 获得远缘杂交种 离体授粉受精离体授粉受精 将未授粉的胚珠或子房从母体上切取离下来 进行无菌培养 并以一定 方式授以无菌花粉 使之在试管内实现授粉的技术 离体授粉受精的类型离体授粉受精的类型 离体子房授粉 离体柱头授粉 离体胚珠授粉 影响离体授粉受精因素影响离体授粉受精因素 胚珠和子房育龄 父本花粉的萌发 母体组织的保留 授粉方 式和培养条件 5 什么是无病毒苗什么是无病毒苗 指不含该种植物的主要危害病毒 即检测主要病毒在
16、植物内的存在 表现阴性的样本 植物病毒有哪些检测方法 植物病毒有哪些检测方法 1 直接检测法 2 指示植物法 3 抗血清鉴定法 4 电子显微镜检 查法 5 酶联免疫鉴定法 微茎尖培养脱毒时茎尖大小与脱毒效果和成活率呈何种关系 微茎尖培养脱毒时茎尖大小与脱毒效果和成活率呈何种关系 茎尖大小与脱毒效果成反 比 植物组培获得脱毒苗的脱毒方法有哪些 植物组培获得脱毒苗的脱毒方法有哪些 1 茎尖脱毒 2 热处理脱毒 3 低温脱毒 4 愈 伤组织脱毒 5 珠心胚培养 6 花药培养脱毒 7 微尖嫁接脱毒 8 综合脱毒法 9 化学疗 法脱毒 简述茎尖培养脱毒苗的脱毒原理简述茎尖培养脱毒苗的脱毒原理 病毒在植物组织中分布不均匀性 分生组织无病毒或 含极少病毒 方法 取样与消毒 取茎尖头与接种 培养 生根诱导 简述热处理培养脱毒苗的脱毒原理简述热处理培养脱毒苗的脱毒原理 钝化病毒酶活性 使其失去浸染能力 加速分生组 织细胞分裂获得无病毒植株 方法方法 温水浸渍或热空气处理 6 单细胞培养单细胞培养 也称单细胞克隆技术 指培养的为单离细胞的群体 这些单个细胞可不 断分裂增殖 被诱导再分化 直至形成完整植株
