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1、 洁净厂间员工卫生及微生物知识培训 医疗器械生产质量管理规范植入性医疗器械实施细则 明确规定 生产企业应当确定出产品生产中须避免污染 在相应级别洁净室 区 内进行生产的过程 在洁净室区内的人员数量严格控制的基础上 洁净区内的工作人员 包括维修 辅助人员 应定期进行卫生和微生物学基础知识 洁净作业等方面的培训及考核 对进入洁净室区的临时外来人员应进行指导和监督 法规要求 我们所生活的环境中 到处都存在着大量的微生物 在一般空气中 微生物达800 3500个 m3 在土壤中达1 500 108个 g 在严重污染的水中可达107个 ml 饮用水要求细菌总数 100个 ml 大肠杆菌 3个 ml 经水
2、塔或贮水池贮存后 短期内可繁殖至105 106个 ml 人的头皮上有140万个 cm2 两手上约有4 40万个 1g指甲污垢有38亿个 1g粪便可达10 1000亿个 可以说微生物是无处不在 无处不有 许多以前被人们认为是极端 高温 高压 强酸 强碱 低温等 甚至是致死的环境 现在已发现生活着各种类型的微生物 称为极端微生物 事实说明 微生物有特别顽强的生存 繁殖和变异能力来适应环境 前言 微生物种类繁多 有的对人有益 有的有害 有的无益也无害 但在器械生产过程中 不可能对环境中的各种微生物加以区别对待 为保证器械的安全有效 需要对其进行控制 空气中的微生物多数附着在灰尘上 或以芽孢形式悬浮于
3、空气中 1 m以下者处于悬浮状态 10 m以上者会逐渐沉下来而形成菌尘 所以也要对尘粒进行控制 前言 人是洁净室最大的污染源 占90 左右 一般男性每人每分钟向周围排放1000个以上的含菌粒子 女性为750个以上 穿无菌服时 静止时的发菌量为10 300个 min 一般活动时发菌量为150 1000个 min 行走时发菌量为900 2500个 min 咳嗽一次发菌量为70 700个 min 喷嚏一次为4000 60000个 min 所以在洁净室中 人的数量和活动应有特别严格的限制 前言 医药工业洁净室 区 必须以尘粒和微生物为环境控制对象 二者相比 微生物更难以控制1 存在范围广 2 生长速度
4、快 3 生存能力强 控制对象 微生物是什么 一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物 形体微小 单细胞或个体结构简单的多细胞 甚或无细胞结构的低等生物 是生物的一大类 形体微小 构造简单 繁殖迅速 广泛分布在自然界中 是一群在化学显微镜或电子显微镜下放大几千倍 甚至上万倍才能看得到的微小生物 微生物按其结构 化学组成及生活习性等差异可分成三大类 1 真核细胞型细胞核的分化程度较高 有核膜 核仁和染色体 胞质内有完整的细胞器 如内质网 核糖体及线粒体等 真菌属于此类型微生物 2 原核细胞型细胞核分化程度低 仅有原始核质 没有核膜与核仁 细胞器不很完善 这类微生物种类众多 有细菌 支原体 衣原体 立克次
5、体 螺旋体和放线菌 3 非细胞型没有典型的细胞结构 亦无产生能量的酶系统 只能在活细胞内生长繁殖 体积微小 能通过除菌滤器 病毒属于此类型微生物 微生物分类 三大类 微生物五大共性 体积小 面积大 吸收多 转化快 生长旺 繁殖快 适应强 易变异 分布广 种类多 1 细菌 原核单细胞生物 细菌按形状可分为 球菌 0 5 2 m 杆菌 长1 5 m 宽0 3 1 m 和螺形菌 大小与杆菌相似 按革兰氏染色法染色的不同 分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌 革兰氏阳性菌的细胞壁表面含较多的磷壁酸 会产生外毒素 如金黄色葡萄球菌 革兰氏阴性菌的细胞壁表面多含脂蛋白和脂多糖 会产生内毒素 即热原 如大肠杆菌
6、细菌一般有细胞壁 细胞膜 细胞质 细胞核 有的还有荚膜 鞭毛 菌毛和芽胞等特殊结构 细菌一般为无性繁殖 以二分法繁殖 几十分钟或1 2小时分裂一次 微生物的形态结构 2 霉菌 丝状真菌的通称 真核多细胞生物 霉菌是真菌的一部分 在培养基上长成绒毛状或棉絮状的菌丝体的真菌统称为霉菌 霉菌细胞呈狭长的管状 称为菌丝 菌丝直径比细菌 放线菌大 约2 10 m 菌丝分枝连接 交错集合在一起的总体称为菌丝体 霉菌大多数是多细胞微生物 菌丝细胞由细胞壁 细胞膜 细胞质 细胞核和各种细胞器组成 细胞壁很薄 往往在表面产生色素 使菌落出现各种颜色 霉菌靠孢子繁殖 有无性繁殖和有性繁殖两种方式 以无性繁殖为主
7、有些真菌可用酿酒造酱 或用于发酵生产柠檬酸 葡萄糖酸 酶 抗生素 如青霉素 头孢菌素 少数真菌能引起各种真菌病 真菌产生的真菌毒素 如黄曲霉素 有毒 微生物的形态结构 3 酵母菌 真核单细胞生物 属真菌 酵母菌以单细胞存在 呈圆形 卵圆形和香肠形 比细菌大 细胞长5 30 m 宽1 5 m 细胞结构有细胞壁 细胞膜 细胞质 细胞核和各种细胞器等 酵母菌的增殖分无性繁殖和有性繁殖两个阶段 有三种方式 芽殖 裂殖 孢子生殖 酵母菌是重要的工业微生物 用于酿酒 生产单细胞蛋白 B族维生素 核酸 辅酶A 细胞色素C等 一般对人体无害 微生物的形态结构 4 放线菌 原核单细胞生物 放线菌有生长发育良好的
8、菌丝体 呈分枝状 菌丝宽为0 2 1 2 m 革兰氏阳性 其内部构造与细菌相似 无完整的细胞核 菌落常呈幅射状 因此称放线菌 繁殖方式为无性孢子繁殖 最适pH6 7 7 5 温度25 30 放线菌可用于生产抗生素 维生素和酶类 少数可引起人畜放线菌病 微生物的形态结构 5 病毒病毒是一类体积十分微小 结构简单 只含一种核酸 DNA或RNA 没有产生能量的酶系统 只能在活细胞内以复制方式增殖的非细胞型微生物 病毒在自然界分布非常广泛 在所有其它生物中都有病毒寄居 病毒是最常见的致病微生物 人类传染病中大约75 是由病毒引起的 病毒体主要由核酸和蛋白质组成 病毒体积微小 最大直径300nm 如牛痘
9、病毒 最小直径20nm 如口蹄疫病毒 绝大多数在150nm以下 能通过细菌滤器 用普通光学显微镜看不见 必须用电子显微镜放大数千至数万倍才能看见 形态多呈球形 少数为杆状或砖形 噬菌体 细菌病毒 有呈蝌蚪状的 微生物的形态结构 1 水分 水占细胞浆的70 90 是细胞的重要组成成分 较普遍的观点认为 只有在含水的环境中微生物才能存活 但也有人发现在无水碳氢化合物中微生物可长期存活 2 碳源 碳源是构成细胞的重要物质 有些微生物的碳源必须来自有机碳化合物如糖 蛋白质 脂肪 有机酸等 同时利用其化学能 属异养型 有些微生物不需有机碳化合物 以CO2为碳源 属自养型 分为光能自养型和化能自养型 3
10、氮源 氮是组成蛋白质和核酸的重要元素 4 无机盐类 细菌所需无机盐包括磷 硫 镁 铁 钾 钠 钙 氯 锰 锌 钴 铜等 其中磷 硫 镁 钾 钠 铁需要量较多 其他只需微量 5 生长因子 生长因子是某些微生物生长发育所必需 而其自身又不能合成的一类营养物质 包括维生素 嘌呤和嘧啶等 微生物的养分 1 营养物2 pH值 各种微生物都有其最适宜的pH值 大多数细菌最适pH为6 8 7 4 但一般有较大的容忍度 在4 9也可存活和生长 少数细菌能在极端pH值范围内生长 真菌适于pH值3 6的微酸性环境 但在2 10也可生长 微生物生长的影响因素 3 温度 微生物适于生长繁殖要有适宜的温度 当超过其最低
11、或最高可耐受的温度时 即停止生长或死亡 一般细菌最适温度为30 40 真菌为20 30 4 氧气 大多数细菌和所有霉菌都是需氧菌 在有氧环境中才能生长 少数细菌是厌氧菌 在无氧环境中才能生长 有些细菌和酵母菌是兼性需氧厌氧的 在有氧或无氧环境中都能生长繁殖 微生物生长的影响因素 5 渗透压 微生物细胞膜和所有生物膜一样是一种半透膜 可让水自由通过 对溶质则有选择性 由于细胞壁的保护 微生物能存活在低渗透压的水中 而在高渗溶液 如高浓度的盐溶液或糖溶液 40 甘油 中 细胞会脱水并停止生长繁殖 但也有一些专性耐高盐细菌只有在高盐 10 15 条件下才生长 微生物生长的影响因素 6 表面张力 表面
12、活性剂可降低表面张力 它是影响细菌生长的因素之一 很多革兰氏阴性菌 特别是大肠菌群可很好地在表面活性剂包围的介质中生长 而大多数革兰氏阳性菌在表面张力低时 0 05N m 不能很好生长 阳离子表面活性剂对很多有机体有毒性 阴离子表面活性剂毒性很小 非离子表面活性剂几乎没有毒性 并可成为某些微生物的营养物 微生物生长的影响因素 消毒与灭菌是微生物实验技术中最基本的操作 从事器械生产和检验的人员都应当了解消毒与灭菌的方法及其意义 严格遵守操作规程 否则会影响产品质量 危害患者安全 消毒与灭菌 无菌 不存在活的生物 GMP指南 无菌 从定义上来说是一个绝对的概念 但遗憾的是 在科学和技术高度发展的今
13、天 器械的绝对无菌即做不到 也无法加以证实 然而 器械的安全性要求人们设定无菌的相对标准 FDA 欧洲制药工业界曾将百万分之一微生物污染率作为灭菌产品 无菌 的相对标准 它和蒸汽灭菌后产品中微生物存活的概率为10 6 这一标准如今已为世界各国普遍接受和采用 消毒与灭菌 慨念 灭菌 使达到无菌状态的方法 GMP指南 用物理或化学方法杀灭传播媒介上所有的微生物 使其达到无菌 通常是指杀灭或除去全部活的微生物 包括繁殖体和芽孢 消毒 用物理或化学方法杀灭或清除传播媒介上的病原微生物 使其达到无害化 通常是指杀死病原微生物的繁殖体 但不能破坏其芽孢 所以消毒是不彻底的 不能代替灭菌 消毒与灭菌 慨念
14、消毒与灭菌 常用消毒剂 1 干热灭菌法常见的有火焰 烧灼 干烤和红外线灭菌等 火焰 烧灼 通常用于实验室无菌操作中金属或其它耐火材料制成的器具的灭菌 干烤和红外线 利用干热空气或热辐射进行灭菌 一般135 145 需3 5h 160 170 需2h以上 170 180 需1h以上 180 200 需0 5 1h 除热原则需250 30min 或200 45min 180 2h 空气传热慢 穿透力不强 故干热灭菌时间长 干热灭菌时烤箱内装入物品应留有空隙 以利空气流动 否则使箱内温度不均 部分物品灭菌不彻底 消毒与灭菌 常用灭菌法 2 湿热灭菌法通过热蒸汽或沸水使蛋白质变性而杀灭微生物的方法 湿
15、热穿透力强 灭菌效果较干热好 煮沸或流通蒸汽灭菌 常压下沸水和蒸汽的温度是100 一般处理30 60min可杀死细菌繁殖体 但不能完全杀灭芽孢 此法适用于不能高压蒸汽灭菌的物品 低温间隙灭菌 巴斯德灭菌法 将物品先用60 80 加热 或煮沸 1h 然后置20 25 保存24h 或常温过夜 使其中残存的芽孢萌发成繁殖体 再用以上条件灭菌 如此反复三次 本法适用于不耐高温或高温下易变质的物品 但很费时 高压蒸汽灭菌 热压灭菌法 超过一个大气压时 水的沸点高于100 反之亦然 高压蒸汽灭菌就是通过加压提高蒸汽温度 灭菌效果最好 它简便 经济 可靠 无毒 是最可靠 应用最广泛的灭菌法 此法适用于耐高温
16、和潮湿的物品 常用条件为 115 5 30min121 5 20min126 5 15min 消毒与灭菌 常用灭菌法 3 化学灭菌法利用化学试剂形成的气体来杀灭微生物的方法 常用的灭菌剂为环氧乙烷 又称氧化乙烯 环氧乙烷是广谱杀菌剂 能杀灭细菌 芽孢和多种病毒 还能杀死昆虫及虫卵 但由于环氧乙烷易燃易爆且有毒 有致变异性 用于药品方面极有限 多用于医疗器械 塑料制品等灭菌 不能用于橡胶和乳胶手套 能将其溶解 消毒与灭菌 常用灭菌法 4 辐射灭菌法辐射有两种类型 一种是电磁波辐射 如紫外线 红外线 微波 一种是电离辐射 如可引起被照射物电离的X射线 射线 消毒与灭菌 常用灭菌法 紫外线 紫外光波长在136 390nm之间 其中260nm左右能破坏核酸 杀菌作用最强 另外 空气中的氧受紫外线照射后 可微量转变为臭氧共同起杀菌作用 紫外线消毒的效果与光源的功率 光源与被照射物的距离 照射时间 温度和湿度等因素有关 我国规定紫外灯照射强度在距离1m处不低于70 W cm2 以紫外线测强仪测定 在操作面上要求强度40 W cm2以上 一般每10m2装30W灯管1支 工作前30 60min 紫外线
