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1、第十八章羊水检验 KEYPOINTS 1 Alterationsofcolorandclarityandthesignificance 2 Evaluationindexesoffetalmaturityandthesignificance 3 Methodologyassessmentandqualitycontroloffoamstabilitytest 4 Examinationindexesoftoxoplasmagondii others rubellavirus cytomegalovirusandherpessimplexvirus TORCH infection 5 Evalu
2、ativeindexesoffetaldysplasiaandthesignificance 前言 羊水 amnioticfluid 胚胎发育期间羊膜腔内的液体 功能 保护母体和胎儿 水 98 99 组成 溶质 1 2 有机物 50 无机盐 50 细胞成分 极少量 一 标本采集羊膜穿刺多由妇产科医师进行 诊断遗传性疾病 妊娠16 20周时穿刺 诊断Rh溶血症 妊娠26 36周穿刺 评估胎儿成熟度 妊娠晚期 35周以后 穿刺 标本采集量 10 30ml 第一节标本采集与处理 第二节羊水理学检验 一 量 参考范围 妊娠8周 5ml 妊娠10周 30ml 妊娠20周 400ml 妊娠38周 1000
3、ml 足月妊娠 800ml 过期妊娠 300ml 临床应用 羊水过多 polyhydramnios 妊娠任何时期羊水量大于2000ml 羊水过少 oligohydramnios 妊娠足月时羊水量小于300ml 1 羊水过多的原因 常见于 胎儿畸形 多胎妊娠 孕妇和胎儿疾病 胎盘和脐带病变 胎儿畸形 fetalanomaly 过期妊娠 posttermpregnancy 胎儿宫内发育迟缓 intrauterinegrowthretardation 羊膜病变 2 羊水过少的原因 二 颜色与透明度 参考范围 妊娠早期 earlytrimesterofpregnancy 无色或淡黄色 清晰 透明 妊娠
4、晚期 latetrimesterofpregnancy 乳白色 清晰或稍混浊 临床应用 黄绿色 表示羊水中混有胎粪 为胎儿窘迫的现象 棕红色或褐色 多为胎儿已经死亡金黄色 可能为母儿血型不合所引起的羊水中胆红素过高 粘稠拉丝的黄色 羊水表示妊娠过期或胎盘功能减退 混浊脓性或带有臭味者 表示宫腔骨已有明显感染 检测原理 羊水中的肺泡表面活性物质饱和磷脂是既亲水又亲脂的两性界面物质 其在乙醇中振荡后形成的泡沫可维持数小时 并形成稳定泡沫层 而羊水中的蛋白质 胆盐 游离脂肪酸及不饱和磷脂也能形成泡沫 但乙醇能消除这些物质所形成的泡沫 用于诊断胎儿肺成熟程度 三 泡沫试验 方法学评价 参考范围 阳性
5、稀释度为1 1和1 2的两管液面均出现泡沫环 临床应用 临床上只进行稀释度为1 1和1 2的泡沫试验 若2管液面均出现泡沫环为阳性 则提示L S比值 2 0 表示胎儿肺成熟 若仅第1管液面出现泡沫环 为临界值 L S比值在1 5 2 0之间 若2管液面均未出现泡沫环为阴性 L S比值 1 49 提示胎儿肺未成熟 第三节羊水化学与免疫学检验 一 甲胎蛋白 fetalprotein AFP 检测原理 火箭免疫电泳法放射火箭免疫电泳法放射免疫法酶联免疫吸附法 参考范围 妊娠15周 40mg L 妊娠32周以后 25mg L 临床应用 1 AFP增高 开放性神经管缺陷的胎儿 如无脑儿 脊柱裂等 脐膨出
6、 消化道畸形胎儿 先天性肾病 先天性食管闭锁 胰腺纤维囊性变 双胎 宫内死胎等 染色体异常 糖尿病 先兆子痫 母婴Rh血型不合等 羊膜穿刺所致的胎血污染 2 AFP减低见于葡萄胎 唐氏综合征 二 胆碱酯酶 检测原理 ChE测定 丙酰硫代胆碱或乙酰胆碱作为底物 2 硝基苯甲酸为显色剂的速率法或终点法 AChE测定 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析法 参考范围 AChE 10 43U L 临床应用 羊水中AChE活性增高与胎儿开放性神经管畸形有高度的相关性 AChE PChE比值 0 27者可诊断为神经管缺损 1 0者则可诊断为开放性腹壁缺陷胎儿 AChE活性测定 可纠正羊水AFP的假阳性 三 卵磷脂与鞘磷
7、脂 检测原理 薄层层析色谱法 thin layerchromatography TLC 参考范围 L S比值 2 0 临床应用 L S 1 49 表示肺脏不成熟 IRDS 特发性呼吸窘迫综合征 严重 L S为1 50 1 99 表示肺脏发育不够成熟 有IRDS可能 L S为2 0 3 4 表示肺脏已成熟 L S为3 5 3 9 表示肺脏肯定成熟 L S 4 0 表示过熟儿 四 肌酐 检测原理 肌酐与苦味酸反应 生成橘红色的苦味酸肌酐复合物 肌酐测定方法有去蛋白终点法和速率法 参考范围 妊娠37周 176 8 mol L 临床应用 判断胎儿肾脏成熟度 其准确率达90 妊娠37周时 羊水肌酐 大于
8、176 8 mol L提示胎儿肾脏成熟 为132 6 176 7 mol L为临界值 小于132 5 mol L提示胎儿肾脏未成熟 五 睾酮 检测原理 ELISA法或放射免疫法 参考范围 男性胎儿 224 11 g L 女性胎儿 39 2 g L 临床应用 预测胎儿性别 妊娠合并糖尿病 母婴Rh血型不合 无脑儿羊水睾酮水平可降低 结合染色体检查 诊断胎儿性疾病 六 雌三醇 检测原理 ELISA法或放射免疫法 参考范围 妊娠末期 0 8 1 2mg L 临床应用 直接反映胎儿 胎盘功能 间接的反映胎儿在宫内发育的情况 雌三醇低于1 0mg L 提示胎儿预后不良 雌三醇水平突然下降 可能为先兆流产
9、 雌三醇减低 多见于母婴Rh血型不合 妊娠合并糖尿病 重度妊娠高血压综合征时的宫内死胎 雌三醇持续性处于低值者 可见于胎盘性硫酸酯酶缺乏症 七 胆红素 检测原理 光谱分析法 改良J G法 胆红素氧化酶法和二甲亚砜 DMSO 法 参考范围 1 71 mol L A450 0 02 临床应用 判断胎儿安危 观察胎儿肝脏成熟程度和监测胎儿溶血情况 以决定分娩时机 判断胎儿安危 观察胎儿肝脏成熟程度的胆红素水平 监测胎儿溶血程度 八 葡萄糖 检测原理 葡萄糖氧化酶 GOD 法 己糖激酶 HK 法 邻甲苯胺 o TB 法 参考范围 0 56mmol L 临床应用 判断胎儿肾脏成熟程度的指标 小于0 56
10、mmol L 提示胎儿肾脏发育成熟 大于0 80mmol L 提示胎儿肾脏不成熟 但AFG判断肾脏成熟程度的精确度不如羊水肌酐 九 淀粉酶 检测原理 碘 淀粉酶比色法 对 硝基苯麦芽庚糖苷 4NP G7 法 参考范围 300SomogyiU L 临床应用 活性高低主要用于判断胎儿唾液腺成熟程度 300SomogyiU L 提示胎儿唾液腺成熟 200 300SomogyiU L为临界值 200SomogyiU L为胎儿唾液腺不成熟 十 反三碘甲状腺原氨酸 检测原理 RIA法 参考范围 2 62 8 31nmol L 临床应用 用于诊断胎儿甲状腺疾病 水平降低见于胎儿甲状腺功能减退 十一 血型物质
11、 1 ABH分泌型血型的预测 检测原理 羊水中分泌的血型物质可将相应抗血清中抗体中和 参考范围 结果判断见下表 2 ABH O 血型酶的测定 检测原理 非分泌型胎儿的血型无法用羊水ABH血型物质的测定预测 由A基因产生的N 乙酰氨基半乳糖转移酶能将N 乙酰氨基半乳联接在H物质末端的半乳糖上 形成A血型物质 同理 B基因可形成B血型物质 当有糖供体 Mn 与O型红细胞共同孵育时 羊水中的转移酶可在红细胞膜上合成A或B物质 利用血型测定的方法可检测埋分泌型胎儿的血型 临床应用 为有严重ABO同种免疫史的孕妇非分泌型的胎儿血型鉴定提供了可能 为在位于ABO基因部位的遗传性疾病的产前诊断提供了可能 第
12、四节羊水显微镜检验 一 羊水脂肪细胞计数 检测原理 脂肪细胞计数是反映胎儿皮肤成熟程度的指标 将羊水涂片用尼罗蓝水溶液染色后 显微镜下观察 计数200 500个细胞 计算脂肪细胞阳性率 参考范围 妊娠34周前羊水脂肪细胞 1 34 38周为1 10 38 40周为10 15 40周以后大于50 临床应用 大于20 为胎儿皮肤成熟的指标 10 20 为临界值 小于10 为皮肤不成熟 大于50 为皮肤过熟 二 羊水快速贴壁细胞计数 检测原理 正常羊水细胞需要经过4 5d才能贴壁生长 胎儿畸形 如神经管缺陷及脐疝畸形时 羊水细胞仅需20h即可贴壁生长 此种细胞称为快速贴壁细胞 rapidadheri
13、ngcell RAC 具有贴壁生长快 活细胞贴壁率高的特点 通过计算活细胞贴壁率 来判断有无畸形 参考范围 4 临床应用 RAC主要用于胎儿畸形的诊断 脐疝畸形的RAC为9 12 无脑儿的RAC为100 第五节羊水病原生物学检验 一 病毒1 风疹病毒检查 检测原理 病毒分离培养法 血凝抑制试验 风疹病毒特异性IgM测定 PCR 具有早期快速诊断的价值 临床应用 风疹病毒是引起胎儿畸形的病毒之一 妊娠1 2周感染风疹病毒者 胎儿严重畸形发生率为30 80 妊娠12 18周感染风疹病毒者 10 20 胎儿可有智力障碍和听力缺陷 妊娠18周以后感染风疹病毒的危害性很低 2 巨细胞病毒检查巨细胞病毒是
14、疱疹病毒的一种 WHO已将其列为引起新生儿出生缺陷的主要病原体 3 单纯疱疹病毒检查单纯疱疹病毒是疱疹病毒的一种 与胎儿和新生儿有关的主要是 型 二 弓形虫 检测原理 组织学 可直接寻找弓形虫的滋养体 包囊或卵囊等 血清学 有Sabin Feldman染色试验 补体结合试验 间接荧光抗体试验或间接血凝试验等 PCR 以B1基因 200 300重复序列 AF146527 或16SrDNA为目的基因 临床应用 弓形虫 toxoplasmagondii 感染人 畜引起的传染病称为弓形虫病 toxoplasmosis 此病为人畜共患疾病 孕妇感染弓形虫后 除了通过胎盘感染胎儿外 还可经过羊水进入消化道
15、而使胎儿感染 孕妇感染弓形虫后 可造成流产 早产 胎儿小头畸形 脑积水 视力障碍 智力发育缺陷等畸形 第六节羊水检验的质量控制与临床应用 一 质量控制 羊水AFP检测 母体血清AFP检测连续2次阳性时 再考虑是否决定行羊水AFP检查 羊水胆红素检测 要求避光 羊水泡沫试验 新鲜标本或4 冷藏 操作时需用力振荡 二 临床应用 产前诊断 一 产前诊断1 神经管缺陷性疾病 NTD 母体血清和羊水AFP增高 羊水AFP增高除了见于NTD以外 还可见于死胎 先天性食管闭锁及某些染色体病 RAC对诊断NTD具有高度的特异性和灵敏度 无脑儿的RAC贴壁率为100 脐疝畸形RAC贴壁率为9 12 2 遗传性代
16、谢病 羊水酶学检查 限制性片段长度多态性连续分析 羊水PCR检查 减少遗传性疾病的发生率 如脂代谢病 粘多糖沉积病 氨基酸代谢病 碳水化合物代谢病等 3 染色体病 常染色体异常 先天愚型 21 三体 性染色体异常 先天性卵巢发育不全症 45 X0 明确诊断 可终止妊娠 4 性连锁遗传病 常见的性连锁遗传病有血友病 原发性低丙种球蛋白血症 肌营养不良 黏多糖沉积病 型 糖原代谢病 型 红绿色盲 自毁面容综合征等 对X连锁隐性遗传病 如血友病 红绿色盲 假性肥大型肌营养不良症等家族史的胎儿 及早确定胎儿性别 男胎应终止妊娠 二 评估胎儿成熟度 评估胎儿成熟度 肺成熟度肾成熟度肝成熟度唾液腺成熟度皮酯腺成熟度 三 诊断TORCH感染 TORCH是一组病原生物的英文名称缩写 即弓形虫 toxoplasmagondii 其他病原微生物 others 风疹病毒 rubellavirus 巨细胞病毒 cytomegalovirus 单纯疱疹病毒 herpessimplexvirus 第一个英文字母的组合 这组病原生物常可通过胎盘传给胎儿 引起围产期感染 导致流产 死胎 早产 先天畸形和智力障碍等各种
