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1、非发酵菌及检验 华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科曾吉 2019 1 非发酵菌 nonfermenters 是指一群不利用或仅以氧化形式利用糖类的革兰阴性无芽胞杆菌 需氧或兼性厌氧 基本特点 1 大多数为机会致病菌 2 存在于自然环境 3 多为正常菌群的一部分 4 对很多抗生素有天然的抗药性 一 概论 2019 2 近几年 从临床标本中分离的非发酵菌的比例逐年上升 目前已经约占分离的阴性菌的40 非发酵菌的耐药性一般情况下都比肠杆菌科细菌明显 常常表现为多重耐药性 并且耐药性发展很快 2019 3 非发酵菌菌病原学分类 假单胞菌属 代表菌为铜绿假单胞菌 不动杆菌属 代表菌为鲍曼不动杆菌
2、窄食单胞菌属 嗜麦芽窄食单胞菌 伯克霍尔德菌属 洋葱伯克霍尔德菌 产碱杆菌属 木榶氧化其他菌属等 2019 4 2019 5 2019 6 2019 7 2019 8 非发酵菌与其他细菌的区别 1 与其他阴性杆菌的区别 肠杆菌 弧菌科等2 与易脱色的革兰阳性菌区别 2019 9 辨认非发酵菌的基本方法 1 在克氏铁琼脂 KIA 上为K K 2 大多数氧化酶阳性 3 细菌多不能在麦康凯平板上生长或生长不良 2019 10 非发酵菌的初步分群 1 葡萄糖的利用 2 麦康凯平板上生长能力 3 氧化酶 4 动力 2019 11 非发酵菌各菌属间的鉴别 2019 12 常见不发酵菌的鉴定双岐索引 201
3、9 13 第一节假单胞菌属 Pseudomonas 一 概述1 分类2 临床意义3 微生物特性4 微生物检验 1 检验程序 2 鉴定 3 药物敏感性试验 AntibacterialSusceptibilityTest 2019 14 1 分类 假单菌属按rRNA同源性分为5群及未确定rRNA同源群有关的种一群需氧 不发酵葡萄糖无芽胞 有鞭毛氧化酶阳性的革兰阴性杆菌多为条件致病菌 2019 15 2 临床意义 假单胞菌属分布广泛 人类不发酵菌感染中 假单胞菌超过50 其中主要为铜绿假单胞菌 2019 16 3 微生物特性 革兰阴性 无芽胞 专性需氧有端鞭毛或丛鞭毛生长温度范围广 最适生长温度为3
4、5 产生各种水溶性色素 绿脓素 脓玉红素 荧光素 脓褐素对理化因素耐受性较强 对多种抗生素耐药 2019 17 二 铜绿假单胞菌 生物学特征 1 形态和染色 革兰阴性 长短不一单鞭毛生长温度25 42 2019 18 菌落形态 常见有5种菌落形态 典型菌落 菌落呈灰绿色 扁平湿润 边缘不规则 表面常可见金属光泽 大肠菌样型 圆形凸起 灰白色半透明 粘液型 菌落光滑呈粘液状侏儒型 细小 无光泽的半透明状菌落 粗糙型 中央凸起 边缘扁平 表面粗糙 有生姜味可产生多种色素 荧光素与绿脓素 2019 19 2019 20 毒力因子 致病机制 结构成分 粘附素 粘附 荚膜多糖 抗呑噬 毒素 内毒素 LP
5、S 外毒素 A阻止真核细胞蛋白质合成S干扰吞噬杀菌作用 绿脓素 具有氧化还原活性 催化超氧化物和过氧化氢产生有毒基团 酶类 弹性蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 Las A 降解弹性锌金属蛋白酶 Las B 蛋白 磷脂酶C 分解脂质和卵磷脂 损伤组织细胞 2019 21 1 分离培养与鉴定 标本可接种于血琼脂平板培养基和选择性培养基鉴定根据镜下特征 菌落形态 生化反应等 3 微生物检验 2019 22 OF试验 O氧化酶 精氨酸水解 葡萄糖酸氧化 氮气 铜绿假单胞菌的鉴定程序 2019 23 铜绿假单胞菌的最低鉴定特征 2019 24 2 抗原检测 血清学分型 噬菌体分型 3 核酸检测 质粒指纹图分析 脉
6、冲场凝胶电泳分析 PFGEpulsedfieldgelelectrophoresis 基因芯片 PCR技术 16SrDNA分型鉴定技术 2019 25 铜绿假单胞菌的耐药性耐药机制 产酶 金属酶 OXA酶 外膜蛋白的改变 Outermembraneproteins OMP 主动泵出机制 对喹诺酮类 MexA MexB OprM及MecC MexD Oprj 整合子 1类 3类 2019 26 其他假单胞菌 1 荧光假单胞菌 特点 4 生长2 恶臭假单胞菌 特点 产荧光素 4 和42 不生长 不产绿脓素3 斯氏假单胞 特点 42 生长 精氨酸双水解酶阴性 2019 27 不动杆菌属 共同特征 氧
7、化酶阴性 不发酵糖类 无动力 硝酸盐试验阴性 生物学性状 1 形态 革兰阴性杆菌 多为球杆状 常见成对排列无芽胞 无鞭毛 2 培养特性 专性需氧菌 最适生长温度为35 营养要求不高 麦康凯 血平板均生长 2019 28 2019 29 不动杆菌属主要菌种系列生化特征 2019 30 鲍曼不动杆菌 临床意义 鲍曼不动杆菌分布广泛 特别是在医院环境中广泛存在 极易引起医院感染的发生 最近几年 在国内很多大型医院ICU病房 鲍曼不动杆菌的分离率已经占到第一位 2019 31 抵抗力强 耐药性强容易引起院内传播 消毒隔离 洗手感染危险因素 长期住院 入住ICU高龄 伴基础疾病移植 免疫抑制插管 人工通
8、气事先用过抗生素 2019 32 生物学性状 1 形态 革兰阴性杆菌 球杆状 无鞭毛 2 培养特性 专性需氧菌 最适生长温度为35 42 能生长 营养要求不高 麦康凯 血平板均生长 3 血平板 菌落圆形 灰白色 光滑 边缘整齐 直径2 3mm 2019 33 耐药特性 对全部氨基青霉素 一代二代头孢菌素 氨曲南天然耐药 获得性耐药 1 产生 内酰胺酶 2019 34 OMP通透性外排泵整合子 基因盒 2019 35 临床对策 增加药敏试验药物Tigecycline多粘菌素B 粘菌素联合药敏试验 2019 36 嗜麦芽窄食单胞菌 生物学性状 1 形态 革兰阴性杆菌 有端鞭毛 无芽胞 无荚膜 2
9、培养特征 营养要求不高 最适温度35 4 不生长 在血平板上24h可形成中等偏小的湿润菌落 48h形成中等大小 不溶血的带黄色色素的菌落 2019 37 嗜麦芽窄食单胞菌 鉴定 氧化酶 动力 明胶 42 C 七叶苷 赖氨酸 麦芽糖O 2019 38 2019 39 耐药性 对亚胺培南天然耐药 主要是产金属酶 经验用药首选磺胺类 但目前磺胺类抗生素的耐药率已经开始上升 K B法可选用的药物有SXT LEV和MNO 2019 40 洋葱伯克霍尔德菌 一般不引起人致病 但易从纤维囊肿病人中分离 在一些免疫力低下的患者中也可能分离到 生物学特性 氧化酶 90 阳性 赖氨酸阳性 多鞭毛 2019 41
10、洋葱伯克霍尔德菌鉴定要点 葡萄糖O F O赖氨酸 枸橼酸 硝酸盐还原 精氨酸水解 甘露醇 依此可以与Pma鉴别 2019 42 軍团菌 生物学性状 1 形态与染色 革兰阴性杆菌 不易着色 端生或侧生鞭毛 2 培养特征 需氧菌 在2 5 5 的CO2环境下生长良好 营养要求苛刻 生长缓慢 生长需要L 半胱氨酸和铁离子 最适的培养基为活性炭酵母浸出液琼脂 BCYE 培养基 2019 43 3生化反应 OX弱阳性或阴性 H2O2阳性 能水解明胶 不发酵糖 4抗原结构 有O抗原和H抗原 O抗原有特异性 5 抵抗力 抵抗力强 在水中可存活数月 对化学消毒剂敏感 2019 44 致病性 可引起肺炎型 重症
11、类型 流感样型 轻症类型 和肺外感染三种类型 肺炎型死亡率高感染后对该菌有一定的抵抗力 2019 45 微生物学检验 临床标本 痰 气管分泌物 胸水和血液为主 病理组织标本 必须制成悬液 再进行涂片和分离培养 环境污染标本 应先浓缩再接种 2019 46 分离培养 初次分离必须采用 BCYE 3 5天可形成1 2mm直径的光泽菌落 2019 47 核酸检测 是快速特异的方法 采用DNA探针及PCR扩增rRNA的方法均可用于军团菌的快速诊断抗体检测 是检测军团菌感染临床常用手段 常采用方法 IFA MAA TAT ELISA法等 2019 48 军团菌感染诊断试验 2019 49 后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用资料仅供参考 实际情况实际分析 感谢您的观看和下载 Theusercandemonstrateonaprojectororcomputer orprintthepresentationandmakeitintoafilmtobeusedinawiderfield 2019 52
