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1、2019 1 API系统 构成 试条由特別选择的生化反应小管API试条有多种类各有相应的数据库所有生化结果以同时间一并阅读 2019 2 API系统试条由10 20 50 测试组成不等结果 鉴定百分率基本单位 条目 Taxa 种 PseudomonasAeruginosa 生物型号 E Coli1 属 SalmonellaSpp 一群菌种 Aeromonashydrophilia cavicie 所引用的分类学跟国际认可的一样 InternationalJournalofSystematicBacteriology资料库 整个系统的心脏 2019 3 优点 标准化 简易化 在制造过程中 进行质
2、控 FDA标准 用家可用ATCC菌种进行质控 系统化 操作简易 快速报告 20年经验 拥有菌种资料 25000 鉴定系统的发源生化测试 750 1500文献 2019 4 选条的标准 2019 5 革兰氏阴性杆菌分类 氧化酶 氧化酶 2019 6 革兰氏阳性杆菌分类 触酶 触酶 短小脱色含有异染颗粒slightdiscoloration granulations 短球杆菌 延长状杆菌 细小不透光菌落 20 25 C有动力37 C无动力 大体积产芽孢杆菌 2019 7 定向试验 2019 8 革兰氏阳性球菌分类 触酶 触酶 金黄色萄葡球菌 溶血 2019 9 在细菌学里最普遍的染色方法 革兰氏染
3、色 步骤 G G 染色前 所有细胞是透明的 结晶紫着色後用碘增加染料与菌体结合 乙醇从G 菌体洗脱结晶紫 用番红液复染 革兰氏阴性菌呈粉红色 革兰氏阳性菌呈兰紫色 2019 10 接解酶试剂 原理 传统方法 H2O2 2H2O O2 接解酶 玻片法 试管法 2019 11 氧化酶试验 原理 TMPD 氧化TMPD 氧化酶 TMPD 2甲基一对一苯撑二胺 货号 55922纸片 浸泡饱和TMPD储存 2 8 C于暗处有效期 1年组成 2x30片小瓶装 纸片 货号 70460储存 2 30 C于暗处组成 1个小瓶 液体试剂 深紫色 透明 2019 12 氧化酶纸片法 2019 13 液体氧化酶试剂
4、试剂方法 用2个试管载1 2ml无菌水 第一管为阴性对照 加一滴OX试剂 第二管为测试管 加可疑菌落然后再加二滴OX试剂 比较二支管的颜色 阴性对照 透明 浅紫色 结果 OX 透明 浅紫色OX 紫色 深紫色 2019 14 生化鉴定 容易使用 2019 15 API结果原理 生化结果组合跟资料库內的典型条目 Taxa 作出比较 经计算後 鉴定百比率 Id 机会率 指示出不同菌类的比较T值 Tindex 指示出在同一個菌类的相似程度 2019 16 生化鉴定 可靠及具创意的选择 最典型生化普 菌种X T值 资料库 生化结果 菌种X 菌種X 2019 17 2020 5 19 18 可编辑 API
5、结果跟据T值及 Id的组合 作出评语 i ExcellentIdentification Id 99 9及T 0 75 ii VerygoodIdentification Id 99 9及T 0 75 iii GoodIdentification Id 90 9及T 0 25 iv AcceptableIdentification Id 80 0及T 0 v Doubtfulprofile其中一个生化反应出现严重违反典型生化结果 2019 19 API20E Rapid20E 肠道杆菌科细菌在环境中及动物产品中非常普遍 其中部份 沙门氏 耶尔森氏 是致病菌 API20E是常规鉴定中的标准 其他
6、新鉴定系统比较的金标准 方便使用 4或24小时出报告 2019 20 API20E试剂条接种要点 先做氧化酶试验 氧化酶为阴性时接种API20E 氧化酶为阳性时接种API20NE试剂条 塑料培养盒中加水5ml 放入试剂条 记录标本资料 取1个1mm大小 18 24hr菌龄的菌落 分散于5ml悬浮液 20150 中 使达0 5MacFarland浊度 小心沿内壁加菌悬液到微量生化杯中 其中 有U形框标记的项目 CIT VP GEL 将菌液加满 有下划线标记的 ADH LDH ODC H2S URE 加好菌悬液后 用无菌液体石蜡封口 剩余的菌液可用于涂玻片 染色 接种于非选择性平板做次代培养 盖好
7、孵育盒盖 放置几分钟 观察每个微量杯都应呈阴性反应的颜色 孵育盒放入37摄氏度温箱培养24小时 2019 21 API20E反应结果阅读要领 一 若GLU 葡萄糖 为阳性 则记录GLU的结果 在TDA IND VP孔中加入相应的附加试剂 1分钟内读取TDA IND的结果 5 10分钟内读取VP的结果 同时读并记录取其它反应的结果 用生化鉴定结果组成一个7位数编码 二 若GLU 葡萄糖 为阴性 但有多于2个的反应呈阳性 则按上述方法读取并记录结果 三 若GLU 葡萄糖 为阴性 非发酵菌 且其它呈阳性的反应不多于2个 则不要加试剂 放回温箱中再培养24hr后按第一条的方法读取结果 同时用次代培养物
8、接种2个APIOF培养基证实葡萄糖代谢类型 接种1个APIM培养基观察动力 划线接种MacConkey平板 培养24hr后将其结果记录到API20E报告单 与生化鉴定结果一起得到一个9位数编码 2019 22 API20E反应结果阅读要领 ONPG 淡黄色 黄色为阳性 无色为阴性 ADH LDC ODC URE以苯酚红为指示剂 橙色 红色为阳性 黄色为阴性 CIT 管口处出现兰色为阳性 黄色 绿色为阴性 H2S 黑色为阳性 无色 浅灰色为阴性 TDA IND VP加试剂后出现红色为阳性 不出现红色为阴性 GEL 黑色素扩散为阳性 不扩散为阴性 GLU ARA为糖类的酸化反应 指示剂溴百里香酚兰
9、显黄色为阳性 蓝 绿色为阴性 2019 23 GLU为阴性时 记录其结果 并在GLU孔中按先后顺序分别加一滴NIT1和NIT2试剂 出现红色时NO2为阳性 N2为阴性 不出现红色时 加少许Zn粉 此时出现红色 则NO2为阴性 N2为阳性 有动力 MOB为阳性 无动力则为阴性 麦康凯平板上生长 McC为阳性 不生长为阴性 OF培养管下部变色为发酵型 OF F为阳性 下部不变色OF F为阴性 OF培养管上部变色为发酵型 OF O为阳性 上部不变色OF O为阴性 API20E反应结果阅读要领 2019 24 API20NE 非发酵G 杆菌存在于空气 水及表面 部份细菌 如绿脓假单胞菌 为致病菌 试条
10、主要由传统生化反应及同化反应小管所组成 64条目 Taxa 非发酵G 杆菌的标准鉴定方法 2019 25 API20NE试剂条接种要点 1 先做氧化酶试验 阳性者接种API20NE 塑料培养盒中加水5ml 放入试剂条 记录标本资料 取18 24hr菌龄的菌落 分散于 ml盐水 20040 中 使达0 5MacFarland浊度 A液 取A液200ul 滴 加入AUX培养液中 小心混匀避免产生气泡 制成同化试验接种液 B液 用A液按API20E相同的方法接种生化试验杯孔 NO3 PNPG其中 GLU ADH URE用液体石蜡封口 2019 26 用B液接种同化试验杯孔 下面有三条红线者 使液面与
11、杯口平齐 B液黏度很大 特别注意不要使菌悬液堵住杯口 形成大的气泡 影响反应结果 严格无菌操作 避免空气中的杂菌污染同化试验 剩余的A液可用于涂玻片 染色 接种于非选择性平板做次代培养 盖好孵育盒盖 放置几分钟 观察每个微量杯都应呈阴性反应的颜色 孵育盒放入30摄氏度温箱培养24小时 API20NE试剂条接种要点 2 2019 27 API20NE技术要点 同化试验项目接种要求 接种液面与杯口平齐 太多或不足会造成错误结果 2019 28 API20NE反应结果阅读要领 一 生化试验 不要打开塑料培养盒盖 先读取从GLU到PNPG的生化试验结果并记录之 在NO3杯孔中按先后次序分别加入一滴NI
12、T1和NIT2试剂 出现红色NO3为阳性 不出现红色时 加少许Zn粉 此时出现红色 则NO3为阴性 分钟内不出现红色 则NO3阳性 TPR杯孔中加一滴James试剂 立即出现红色为阳性 不出现红色为阴性 二 同化试验 从杯口上方往下看 红线模糊或菌悬液变浑浊 表明有菌生长 为阳性 否则 为阴性 偶有弱生长者可记录为 或 2019 29 三 在报告单上做出一个 位数编码 查编码手册或APILAB软件 四 如果 查不到编码 或给出提示 IDENTIFICATIONNOTVALIDBEFORE48 HRINCUBATION 立即用液体石蜡将NO3和TRP封口 继续培养 小时 再读结果 而NO3和TR
13、P要记录培养24小时的结果 API20NE反应结果阅读要领 2019 30 APISTAPH 凝固酶阴性葡萄球菌于环境污染中常见 其中以金黃葡萄球菌为代表 以KloosandSchleiferClassification为基础 试条由传统方法及发酵反应小管组成 22个条目 葡萄球菌及微球菌 2019 31 后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用资料仅供参考 实际情况实际分析 感谢您的观看和下载 Theusercandemonstrateonaprojectororcomputer orprintthepresentationandmakeitintoafilmtobeusedinawiderfield APISTAPH技术要点 i 附加试验第21 溶葡萄球菌素 lysostaphin LSTR 用纸片法做目的 确认微球菌 经常抗药 其他葡萄球菌 LSTR ii 阅读结果 发酵试验 PH指示剂 PhenolRed 酚红 阳性 红变黄 阴性对照 小杯O 阳性对照 小杯GLU 葡萄球菌均阳性 橙色结果 在2个阳性中间 阴性结果 在2个阴性中间 阳性结果 在小管 红色 底部出现黄或橙 阳性结果 2019 34 2020 5 19 35 可编辑
