《消化系统疾病动物模型ppt课件课件ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《消化系统疾病动物模型ppt课件课件ppt（98页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、2019 1 第八章消化系统疾病动物模型 Theanimalmodelsofdigestivessystemdiseases 讲授内容 胃炎动物模型消化性溃疡模型病毒性肝炎模型 乙型肝炎 脂肪肝 肝硬化模型胰腺炎模型 2019 2 2019 3 第一节急性胃炎动物模型 2019 4 Gastritis 胃黏膜层的炎症 上皮细胞 固有层 黏膜肌 胃炎模型的种类 2019 5 1 HP法2 药物 乙醇 应激法3 非甾体抗炎药法4 复合法5 酸制剂法 2019 6 HP法 Helicobacterpylori Spiral shapedGram negative oxidaseandcatalase
2、 positivemotilebacteriumwith4 6flagella Thrusterandanchor Microaerophilic i e itrequiresoxygenbutatlowerlevelsthanthosecontainedintheatmosphere 5 8 Withitsflagellaanditsspiralshape thebacteriumdrillsintothemucuslayerofthestomach andcaneitherbefoundsuspendedinthegastricmucosaorattachedtoepithelialcel
3、ls BarryJ MarshallandJ RobinWarrengottheNobelPrizein2005 2005诺贝尔医学奖 Warren和Marshall 2019 7 Producesadhesinswhichbindtomembrane associatedlipidsandcarbohydratesandhelpitsadhesiontoepithelialcellsBreaksdownurea NH2CONH2 toNH3andHCO 3Stomachacidity ChassaingB Gastroenterology 2011 140 6 1720 8 2019 8 实
4、验动物 小鼠 18 22g 蒙古沙鼠 55 60g 仔犬 仔猪 操作方法 HP标准菌株灌胃 109 1010CFU ml 法实验前12小时禁食禁水实验前1小时 0 1mol L碳酸氢钠0 5ml灌胃0 5ml 只 次每两天一次 隔天灌胃 8周时模型成功率90 保证HP活性及浓度 2019 9 NaumannM TrendsinMicrobiology 2004 12 1 29 36 H Pyloriinducesinflammation 2019 10 体重300g左右雄性Wistar大鼠 酸制剂法 急性胃炎动物模型 实验动物 大鼠禁食24h 在清醒状态下 用下述试剂或物质灌胃 1 水杨酸制剂
5、 如20mmol L阿司匹林或水杨酸溶液 按100mg kg体重灌胃 2 10mmol L的醋酸 3 不同浓度的盐酸 1 10 100mmol L 4 同种动物胆汁 5 2mmol L的牛磺胆酸 6 15 的乙醇 2 6 可单独或几种合用 2ml左右 灌胃 急性胃炎动物模型 操作方法 2019 11 2019 12 4h后处死动物 剖检可见胃内发生急性弥漫性炎症改变 胃黏膜表面有浅表糜烂 出血 粘膜层内见中性粒细胞浸润 急性胃炎动物模型 结果 病变 2019 13 2019 14 观察指标 组织 HE 免疫荧光 干湿重比等NOS PGE2等PCR 特定基因或炎症因子Western 特定激酶或信
6、号分子 特定基因等 2019 15 第二节急性胃溃疡动物模型 2019 16 溃疡病的病因 致溃疡因素 胃酸 胃蛋白酶 非甾体抗炎药不合理应用 幽门螺杆菌感染等 防御因素 粘液 碳酸氢盐屏障 粘膜屏障 粘膜血流量 胃上皮细胞的更新 表皮生长因子和内生性前列腺素等 溃疡的形成主要由于防御因素和致溃疡因素的平衡失调所致 2019 17 应激法 幽门结扎法 药物法 醋酸法 常用的方法 急性胃溃疡动物模型 在抗溃疡药物药效学试验中 应激法 幽门结扎法和醋酸法制备的胃溃疡模型为必做实验 利血平法和乙醇法可任选其一 乙醇组胺促胃液素肾上腺类固醇水杨酸盐血清素利血平保泰松 2019 18 应激法 幽门结扎法
7、 药物法 醋酸法 常用的方法 急性胃溃疡动物模型 治疗性给药 醋酸法复制的模型预防性给药 其他模型 乙醇组胺促胃液素肾上腺类固醇水杨酸盐血清素利血平保泰松 2019 19 应激法 幽门结扎法 药物法 醋酸法 常用的方法 急性胃溃疡动物模型 阳性对照药 H2受体拮抗药 西咪替丁 雷尼替丁 法莫替丁等加强胃黏膜防御功能 甘珀酸 果胶铋 硫糖铝 乙醇组胺促胃液素肾上腺类固醇水杨酸盐血清素利血平保泰松 2019 20 研究抗胃溃疡药物 胃黏膜形态观察胃分泌试验胃黏膜血流量测量胃粘液测定抗炎镇痛试验抑制幽门螺杆菌试验等 2019 21 幽门结扎法胃溃疡模型 2019 22 幽门结扎后 可刺激胃液分泌并使
8、高酸度胃液在胃中潴留 损伤胃黏膜造成胃溃疡 成年大鼠 雄雌均可 幽门结扎法胃溃疡模型 造模机制 实验动物 2019 23 1 给药3天 实验前大鼠禁食 24h 不禁水 2 自胸骨剑突下沿腹中线切开腹壁 切口约2 3cm 在左侧肋缘部位用手指轻轻上推暴露胃 3 在胃幽门与十二指肠连接处用结扎线将幽门结扎 注意勿将邻近的其他器官 血管结扎 同时经十二指肠给予受试药 缝合腹壁切口 用纱布包扎切口 幽门结扎法胃溃疡模型 操作方法 2019 24 4 幽门结扎后 停止供水供食 术后18h处死大鼠 取胃固定 剖检 5 沿胃大弯剪开胃壁 洗净胃内容物 将胃壁展开 胃黏膜面向上用大头钉固定在蜡板上 6 用肉眼
9、或放大镜观察胃黏膜面 记录每只动物产生的溃疡数 溃疡程度 溃疡面积 或溃疡指数 及病变的情况 幽门结扎法胃溃疡模型 2019 25 病变程度的评价1 溃疡面积 通过溃疡中心量取的最大纵径和横径S d1 2 d2 2 式中S为溃疡面积 d1为通过溃疡中心量取的最大纵径 d2为通过溃疡中心量取的最大横径 幽门结扎法胃溃疡模型 2019 26 病变程度的评价2 溃疡指数 可计数前胃部溃疡面积 以其总和作为溃疡指数 幽门结扎法胃溃疡模型 2019 27 病变程度的评价3 溃疡程度 Okabe法 在解剖显微镜下测量溃疡面积 将每只鼠溃疡面积的总合分为5个等级作为溃疡指数 溃疡面积 mm2 1 1213
10、2526 3738 50 50mm2或穿孔溃疡指数 1级2级3级4级5级 幽门结扎法胃溃疡模型 2019 28 模型组溃疡指数 给药组溃疡指数溃疡抑制百分率 100 模型组溃疡指数 发生溃疡的动物数溃疡发生百分率 100 实验动物数 病变程度的评价3 溃疡程度 Okabe法 幽门结扎法胃溃疡模型 2019 29 形成的溃疡主要发生在对胃液抵抗力较弱的前胃部 瘤胃 多为圆形或椭圆形 但病变较表浅 属于胃黏膜急性出血性糜烂 与人类胃溃疡的典型病变差距较大 结果 幽门结扎法胃溃疡模型 2019 30 1 该模型是Shay等创立的模型 方法简单 溃疡发生快 发生率达97 主要用于观察药物对溃疡形成的预
11、防作用 幽门结扎法胃溃疡模型 模型评价与注意事项 2 原法规定大鼠禁食48 72h 一般经验是 体重小于180g 禁食24 48h 这样动物可以耐受手术 体重超过180g 禁食48 72h 可提高溃疡发生率 3 对笼具的要求 2019 31 4 术中要求 幽门结扎法胃溃疡模型 模型评价与注意事项 5 观察药物对溃疡的影响时 动物应预先给药或同时给药 若粗制剂可采用灌胃给药 应确认胃内已排空后方能结扎幽门 粗制剂可在幽门结扎的同时采用十二指肠内注入给药较好 6 阳性对照药 灌胃给予西咪替丁 甲氰咪胍 1 0g kg体重雷尼替丁0 135g kg体重 2019 32 大鼠胃的解剖及幽门结扎法所致胃
12、溃疡图 2019 33 大鼠慢性胃溃疡模型 2019 34 2019 35 2019 36 第三节急性和慢性肝损伤动物模型 2019 37 常用的肝损伤物质 四氯化碳D 半乳糖胺硫代乙酰胺刀豆蛋白A 2019 38 一 四氯化碳急性肝损伤模型 CCl4在肝内经NADPH和肝微粒体细胞色素P450混合功能氧化酶的作用 生成活泼的三氯甲基自由基 CCl3 和氯自由基 Cl3 这些自由基能与细胞内和细胞膜上大分子发生共价结合 引起富含不饱和脂肪酸的生物膜发生脂质过氧化 导致膜结构和功能完整性的破坏 肝细胞损伤坏死 三氯甲基自由基还能抑制细胞膜和微粒体膜上钙泵的活性 使Ca2 内流增加 从而引起细胞中
13、毒死亡 三氯甲基自由基能与蛋白质形成共价键 损害线粒体使NADH及ATP在肝内生成减少 脂肪酸氧化受抑制 影响肝脏能量生成障碍 并使三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积 造模机制 CCl4急性肝损伤模型 2019 39 常用实验动物CCl4致急性肝损伤所需剂量和用法 动物 CCl4 剂量用法形成肝损伤 ml kg体重 所需时间0 5 10颈背部皮下注射1次约24h小鼠0 1 10腹腔注射1次约24h0 2 10于1 4 7日各灌胃1次末次后12 24h25 5皮下注射1次1 8d大鼠25 5皮下注射2次 间隔4日1 8d15 1每隔3日灌胃1次 共3次末次后16h家兔50 0 5皮下注射1次 共3次
14、4 7d33 1 5隔日灌胃1次 共2次7d CCl4急性肝损伤模型 2019 40 2019 41 1 根据所用CCl4剂量和时间的不同 肝脏的损伤程度不同 2 一般在给予CCl4后16 24h血清丙氨酸氨基转移酶 ALT 和天门冬氨酸氨基转移酶 AST 活性升高 并能反映肝损伤的程度 3 形态学上表现为肝小叶中央区坏死和脂肪变性 结果 CCl4急性肝损伤模型 2019 42 1 根据所用CCl4剂量和时间的不同 肝脏的损伤程度不同 2 一般在给予CCl4后16 24h血清丙氨酸氨基转移酶 ALT 和天门冬氨酸氨基转移酶 AST 活性升高 并能反映肝损伤的程度 3 形态学上表现为肝小叶中央区
15、坏死和脂肪变性 结果 CCl4急性肝损伤模型 2019 43 2019 44 2019 45 CCl4急性肝损伤模型 2019 46 1 CCl4肝损伤模型是最常用的急性肝损伤模型 造模方法简单 成功率高 重复性好 价格低廉 2 CCl4剂量不宜过大 以免造成动物中毒死亡 3 CCl4是无色澄清的有毒液体 难溶于水 一般用花生油 橄榄油 豆油等植物油混合成所需浓度 模型评价与注意事项 CCl4急性肝损伤模型 2019 47 四氯化碳的配制CCl4常配成乳剂使用 如需配成10 乳剂 可取5ml植物油和5g阿拉伯胶 放在乳钵中研匀 再加纯CCl410ml研匀 然后加蒸馏水10 15ml调成乳状 最
16、后加蒸馏水使体积至100ml 用前摇匀 2019 48 4 用CCl4复制肝损伤模型的主要缺点是 不同动物个体肝损伤的程度差异较大 小鼠接受CCl4后肝脏病理学改变与血清ALT等生化指标改变的相关性不如大鼠好 5 CCl4可从呼吸道 皮肤吸收 对人体有毒性 注意防护 模型评价与注意事项 CCl4急性肝损伤模型 2020 5 19 49 可编辑 病毒性肝炎模型 HBV 2019 50 全球因乙肝死亡100万 年 居第7位 我国30万 2019 51 乙肝病毒 HBV 的特性 2019 52 1 HBV具有顽强的抵抗力 对热 对低温 对干燥 对紫外线及一般浓度的化学消毒剂 都能耐受 在零下20度时可存活20年 在37度时可存活7天 2 HBV的嗜肝性 PreS1和S2特异识别肝细胞表面受体 3 严格的种属特性 到目前为止 只有人 黑猩猩 长臂猿 狒狒对HBV易于感染 2019 53 structuralmaintenanceofchromosomes Smc5 6 Decorsi reAetal Nature 2016Mar17 531 7594 386 9 HepatitisBvirus
