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1、安徽省地方标准DB 34/T 2019染井吉野樱组培育苗技术规程Technical specification for tissue culture of Prunus yedoensis（征求意见稿）2019 - - 发布2019 - - 实施安徽省质量技术监督局发布ICSDB34前 言本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由安徽省林业高科技开发中心提出。本标准由安徽省林业标准化委员会归口。本标准起草单位：安徽省林业高科技开发中心。本标准参与单位：界首市佳祺农业开发有限公司；安徽天润建筑工程集团有限公司；芜湖市雨田润农业科技股份有限公司；皖西盐肤木研究所。本标准主要起草
2、人：许早时、朱谦、沈国良、汪耀、纪坤、殷勇、熊翠林、刘若森、李春生、孙刚、孟可、孔伶俐、李媛、张作坊、胡仲华、江鸿超、雷经洋。19染井吉野樱组培育苗技术规程1 范围本标准规定了良种染井吉野樱（Prunus yedoensis）组培育苗中的普通术语、组培育苗过程中外植体材料的选择、消毒灭菌、初代培养、继代培养、生根培养、炼苗移栽、管护、运输等方法及技术档案管理。本标准适用于染井吉野樱在全国范围内的工厂化组织培养育苗生产作业。2 规范性引用文件下列文件对于本标准的应用是必不可少的。GB/T 14071-1993林木良种审定规范NY/T 2306-2013 花卉种苗组培快繁技术规程GB3095 环境
3、质量标准LY/T 2289 林木种苗生产经营管理档案中华人民共和国国务院令第645号 危险化学品安全管理条例3 普通术语下列术语适用于本文件。3.1 植物组培 plant tissue culture将从植物体分离出的符合需要的组织、器官或细胞及原生质体等材料，通过无菌操作接种在含有各种营养物质及植物激素的培养基上进行培养以获得再生的完整植株的技术。3.2 接种 inoculation将消毒后的外植体或干净培养材料在无菌条件下接入培养容器内培养基中的过程。3.3 消毒 disinfection通过物理、化学方法去除物体表面大部分有害病原微生物（孢子除外）的过程。3.4 灭菌 steriliza
4、tion通过物、化学及一些理化方法杀灭一切微生物（包括孢子等）的过程。3.5 外植体 explant从自然生长的活体植物上获取的用于建立植物组培快繁体系的起始材料。3.6 初代培养 primary culture指直接从机体取下的细胞、组织和器官等材料的培养。3.7 继代培养 subculture 将培养材料从老培养基中转接入新鲜培养基中继续培养的过程。3.8 生根培养 rooting culture 将继代增殖后的无根芽苗转接至生根培养上诱导生根培养得到完整的植株的过程。3.9 组培工厂 plant tissue culture production laboratory利用植物组织培养技术
5、大规模生产植物组培苗的工厂。3.10 炼苗 acclimatization炼苗是在保护地育苗的情况下，采取放风、降温、适当控 水等措施对幼苗强行锻炼的过程。4 组培4.1 外植体材料选择 从健壮母树上截取半木质化的单芽茎段或顶芽作为外植体材料。4.2 消毒灭菌先用洗衣粉水浸泡20-30 min，再轻轻清洗外植体表面将其表面的尘土和部分有害病原微生物去除，然后用流动的自来水冲洗2-4 h后置于超净工作台中；在鼓风状态下于超净工作台上先用质量分数70-75% 乙醇消毒8-15 s后用无菌水清洗3-6次，再用质量分数15%次氯酸钠溶液消毒8-15 min后用无菌水洗4-6次，最后用无菌纱布或无菌滤纸
6、吸干外植体表面水珠后待用。所用消毒剂遵照GB3095执行。4.3 初代培养将经过消毒处理后的染井吉野樱单芽茎段或顶芽切成1.5-2.5 cm小段并接种到芽诱导培养基（MS+BA0.5-1.0 mg/L+NAA0.02 mg/L+TDZ2.03.0 mg/L+蔗糖2030 g/L+琼脂5.5-6.5 mg/L）中，先在22-25 条件下全暗培养5-7 d，然后置于每天光照10-12 h，光照强度15002000 lx的培养室中培养，25d 左右继代一次，直至诱导形成丛生芽。4.4 继代培养将经过芽初代诱导培养获得的丛生芽分切成芽块至增殖壮苗培养基（1/2MS+BA0.50.8 mg/L+NAA0
7、.05-0.08 mg/L）上进行继代培养，接种后置于每天光照10-12 h，光照强度为2000 lx，培养温度22-25的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，得到健壮丛生芽。4.5 生根培养将增殖壮苗培养获得的高度约为2.5-3.5 cm的健壮芽分切接种到生根培养基（1/2MS+NAA0.01-0.02 mg/L）中进行生根培养，接种后先在22-25左右条件下暗培养0-5 d，然后置于光照10-12 h，光照强度2000 lx，温度为22-25左右的培养室中培养30-35 d即可出瓶。5 炼苗5.1 生根苗移栽标准在培养容器中生长的根、茎、叶俱全的完整植株，苗高3.5-5.5 cm，基部长
8、出3-5根不定根时，即可进行炼苗。5.2 炼苗方法将培养瓶放置在有散射光的温室中，温度控制在（255），松盖封口3-5 d。6 移栽 6.1 移栽时间 为了提高成活率，建议生根瓶苗一般在春季和秋季炼苗移栽。6.2 栽培基质及准备 在保证组培穴盘苗正常生长的前提下，可因地制宜选择基质种类及配比，采用泥炭土：园土：珍珠岩5：3：2为最佳。将泥炭土、园土及珍珠岩按一定比例混配好，用800 ppm多菌灵或百菌清喷透混匀，装入穴盘中并稍压紧待用。6.3 洗苗 轻轻取出组培苗，放入清水中，轻轻漂洗干净组培苗表面培养基，并用500 ppm多菌灵或百菌清溶液浸泡20-30 min，最后冲洗一次。6.4移栽 用
9、小拇指粗细的树枝将事先装好的穴盘基质捣个洞，之后将洗净的组培苗塞入其中，并稍压实。覆盖基质以刚盖过组培苗基部为宜，以幼苗不倒即可。6.5摆放 穴盘苗分移栽日期，在苗床上整齐摆放。7 温室苗期管理 7.1 栽后15 d内管理栽后15天内要精心管护。温度一般控制在15-30；每天至少分5次给幼苗喷雾保湿，保持叶面湿度在75-90%；遮荫。7.2 15 d后管理待15 d 缓苗期即长出新叶、新根后便可以进入正常小苗期管理了，大棚相对湿度保持在60-80%即可。7.3 施肥移栽4至8周内，每隔7天可喷施高氮型叶面肥一次，稀释浓度为500-800 ppm。8周后视植株生长情况，调整施肥浓度及施肥次数。8
10、 质量标准8.1 组培苗质量标准 8.1.1 株形苗粗壮、挺直有活力，叶片大小协调、有层次感、色泽正常，叶色具原品种特性。8.1.2 根系有不定根长出（一般3条以上），根长适中，色白健壮，根基处基本无愈伤。8.1.3 苗高组培苗高度适中，一般3cm-8cm。8.1.4 叶片数展开的叶片具4片以上。 8.1.5 整齐度同一批次90%以上的苗高度一致。8.1.6 病虫害状况无污染及病虫害。8.2 组培穴盘苗的质量标准8.2.1 株形苗健壮、挺拔，株形饱满、完整，叶片大小协调，叶色具母本特性、有光泽。8.2.2 根系应具有完整而发达的根第，根系充满穴盘孔，能够易拔出而基质不变。8.2.3 苗高穴盘苗
11、矮壮墩实，一般1015 cm。8.2.4 整齐度同一批次95%以上的苗高度一致。8.2.5 纯度变异率低于5%。8.2.6 病虫害状况穴盘苗无检疫性病虫害，无其他侵染性和非侵染性病害及虫害的危害症状。9 包装、标签和运输9.1 包装9.1.1 组培苗产品应按照客户（或者订单）要求包装，同时保证组培苗成活率。9.1.2 琼脂苗包装：琼脂苗仍保留在培养瓶中，培养瓶放在泡沫箱里，箱外再用纸箱包装，高温季节泡沫箱最好加冰袋。为防止上下倒置，运输时可使用托盘。9.1.3 无琼脂苗包装：生根组培苗洗去琼脂后，先装入小塑料盒（袋），再放在泡沫箱里，箱外再用纸箱包装，高温季节泡沫箱里放冰块，运输时可不用托盘。
12、9.1.4 穴盘苗包装：穴盘装在小纸箱内，再将小纸箱装入大纸箱内，每箱装3-4个穴盘，运输时宜使用托盘。9.2 标签每箱应贴上标签，注明品种、等级、规格、数量、产地、出苗日期、目的地、联系人、注意事项等。9.3 运输装车时切勿倒置，用厢式货车运输以避免日晒、雨淋，运输途中温度保持10-25，应在5 d内到达目的地。10 档案管理执行林木种苗生产技术经营管理档案（LY/T 2289）。附录A（资料性附录）表A 组培工厂设计、所需面积及设计要求组培工厂功能区面积,m2设计要求/说明年产50万株年产100万株年产200万株组培车间200370700需配置自动检测和喷淋的消防系统洗涤间152040通风
13、、干燥;室内要有上、下水设施；地面防潮、防滑并便于清洗；内做大小水槽若干培养瓶晾干室52040通风、干燥，整洁，内置空调和通风装置试剂室 （称量室）202020清洁、干燥、通风;终年保持相对较低温度;避免阳光直射； 放置天平的台面要水平、稳固培养基配制室152040通风、干燥;配备大容量用电器专用线路;上下水道通畅培养基灭菌室52020地面与墙面必须能够耐受高湿状态;地面防滑，白瓷砖墙 面;配备大容量用电器专用线路培养基储存室102040低温、干燥、整洁;避免光照；配置空调，通风装置、紫外灯等更衣室101020通风、干燥、整洁;紧连接种室;配置衣橱、鞋柜、洗手盆等接种室（无菌操作室）20501
14、00控温（252）C；控湿（相对湿度70%75%）；整洁、通风、 光线好；内墙白色光滑;配置空调、超净工作台、紫外灯、移动 臭氧发生器等培养室60150300控温（252）C;控湿（相对湿度70%75%）；干净、整洁； 内墙白色光滑;配制空调、通风装置、日光灯、培养架、独立控 制紫外灯、自动定时设备等;设计时应考虑用电负荷,设置专 线和配电设备出苗室202040控温、通风、光线好;内墙白色光滑;上下水道畅通贮存室202040通风、干燥;存储组培用的洗涤用品、放蒸倦水、酒精等物品母本圃50100100控温、控湿、控光、防虫、能釆用自然光组培苗驯化区5050100控温、控湿、可调控光装置、防虫组培苗移栽圃6001 2502 700控温、控湿、控光、防虫、能釆用自然光辅助用房50100100包括控制间、物料间、包装间等办公室204080配置办公桌（椅）、电话、传真机、电脑、打印机、复印机、文 件柜等办公设备其他生活空间204060包括休息室、洗手间等;休息室可加装饮水机、冰箱、微波 炉、桌椅等附录B（资料性附录）表B 组培工厂所需主要设备及说明仪器设备名称年生产规模，万株规格型号用途说明50100
