《粮油检验 大豆水溶性蛋白质含量的测定 2020-标准全文及编制说明》由会员分享，可在线阅读，更多相关《粮油检验 大豆水溶性蛋白质含量的测定 2020-标准全文及编制说明（17页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、国家市场监督管理局中国国家标准化管理委员会发布-实施-发布粮油检验 大豆水溶性蛋白质含量的测定Inspection of grain and oilsDetermination of water-soluble protein in soybean（征求意见稿）GB/T -201中华人民共和国国家标准ICS 67.050B 20GB/T -201前 言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由国家粮食局提出。本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。本标准起草单位：本标准主要起草人：GB/T -201粮油检验大豆水溶性蛋白质含量的测定1 范围本标准规定了大豆中水溶性蛋白质含量测定的
2、原理、试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、结果计算和精密度要求。本标准适用于大豆中水溶性蛋白质含量的测定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 601 化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB 5491 粮食、油料检验、扦样、分样法3 原理用水提取大豆中的水溶性蛋白质，含氮化合物在催化加热条件下被分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，加碱蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后用硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量计算含氮
3、量，再乘以换算系数，计算出大豆中水溶性蛋白质的含量。4 试剂和材料除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。4.1 试剂4.1.1 硫酸铜（CuSO45H2O）4.1.2 硫酸钾（K2SO4）4.1.3 硫酸（H2SO4）4.1.4 硼酸（H3BO3）4.1.5 甲基红指示剂（C15H15N3O2）4.1.6 溴甲酚绿指示剂（16H18Br4O5S）4.1.7 氢氧化钠（NaOH）4.1.8 95%乙醇（C2H5OH）4.2 试剂配制4.24.2.1 硼酸溶液（20g/L）：称取20g硼酸（4.1.4），加水溶解后稀释至1000mL。4.2.2 氢氧化钠溶液（
4、400g/L）：称取40g氢氧化钠（4.1.7）加水溶解后，放冷，稀释至100mL。4.2.3 硫酸标准滴定溶液c(12H2SO4)0.050 0mol/L或盐酸标准滴定溶液c(HCl)0.050 0mol/L：按GB/T 601进行。4.2.4 甲基红乙醇溶液（1 g/L）：称取0.1g甲基红（4.1.5），溶于95%乙醇（4.1.8），用95%乙醇（4.1.8）稀释至100mL。4.2.5 溴甲酚绿乙醇溶液（5g/L）：称取0.5g溴甲酚绿（4.1.6），溶于95%乙醇（4.1.8），用95%乙醇（4.1.8）稀释至100mL。4.2.6 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：1份甲基红乙醇溶液（4
5、.2.4）与1份溴甲酚绿乙醇溶液（4.2.5）1电炉；2水蒸气发生器（2L烧瓶）；3螺旋夹；4小玻杯及棒状玻塞；5反应室；6反应室外层；7橡皮管及螺旋夹；8冷凝管；9蒸馏液接收瓶。图1 定氮蒸馏装置图临用时混匀。5 仪器和设备5.1 分析天平，分度值0.001g。5.2 粉碎机：锤式粉碎磨。5.3 可控温往复式摇床：频率、温度可控制。5.4 消煮炉。5.5 离心机：转速4000r/min，可放置50mL离心管。5.6 采用凯氏定氮法为原理的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪，或常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式凯式蒸馏装置。6分析步骤6.1 扦样、分样按GB 5491扦取大豆样品。6.2 试样制
6、备取混合均匀的样品80g100g，用粉碎机（5.2）粉碎，粉碎后样品一次通过CQ24（相当于60目）筛的应达90%以上，粉碎样品（筛上、筛下的全部筛分范围的样品）经充分混匀后装入磨口瓶中备用。6.3 水溶性蛋白质提取称取粉碎试样1g（精确到0.001g）于50 mL离心管中，吸取40 mL蒸馏水于离心管中，摇混使样品均匀分散。将离心管固定于可控温往复式摇床上，温度控制在35 2，振荡2 h。取下离心管，用离心机（5.5）以3000 r/min的速度离心10 min，取出离心管。6.4 凯氏定氮法6.4.1消化准确吸取上清液10mL于250mL凯氏定氮瓶中，加入0.4g硫酸铜、6g硫酸钾及12m
7、L硫酸，充分混合。在瓶口放一小漏斗，将瓶以45角斜支于电炉上，于通风橱中加热消化。初始低温加热，控制瓶中泡沫不超过瓶管的2/3。待泡沫减少和烟雾变白后，再提高温度保持微沸加热至消化液呈透明的蓝绿色时，继续加热0.5h。取下放冷，小心加入20mL水，放冷后，移入100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。同时做试剂空白试验。6.4.2蒸馏吸收按图1所示连接好定氮蒸馏装置，向水蒸气发生器内装水至2/3处，加入数粒玻璃珠，加甲基红乙醇溶液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加热煮沸水蒸气发生器内的水并保持沸腾。向接受瓶内加入10.0mL硼酸溶液及1滴2滴混合指示剂
8、，并使冷凝管的下端插入液面下，根据试样中氮含量，准确吸取10.00mL试样处理液由小玻杯注入反应室，以10mL水洗涤小玻杯并使之流入反应室内，随后塞紧棒状玻塞。将10.0mL氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并水封。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸馏10min后移动蒸馏液接收瓶，液面离开冷凝管下端，再蒸馏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下蒸馏液接收瓶。6.4.3 滴定尽快以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定至浅灰红色。同时做试剂空白。6.5 自动凯氏定氮仪法准确吸取上清液10mL于消化管中，再加入0.4g硫酸铜、6g硫酸钾及20mL硫酸于消化炉进行消化。当消化炉温
9、度达到420之后，继续消化1h，此时消化管中的液体呈绿色透明状，取出冷却后加入50mL水，于自动凯氏定氮仪（使用前加入氢氧化钠溶液，盐酸或硫酸标准溶液以及含有混合指示剂的硼酸溶液）上实现自动加液、蒸馏、滴定和记录滴定数据的过程。7 结果计算大豆水溶性蛋白质含量按式（1）计算；X=V1-V0c0.01406.25m100-wV2V3V4V56.2510000（1）式中：X每100g干基试样中水溶性蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100g）V1滴定样品液消耗硫酸或盐酸体积，mL；V0滴定空白液消耗硫酸或盐酸体积，mL；c硫酸或盐酸标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升（mol/L）0.0141.0 m
10、L硫酸c(1/2H2SO4)=1.000 mol/L或盐酸c(HCl)=1.000 mol/L 标准滴定溶液相当的氮的质量，单位为克（g）6.25大豆含氮量换算成蛋白质系数；V3吸收提取液进行消化的体积，mL；V2总提取液的体积，mL；V4总消化液的体积，mL；V5蒸馏时所取消化液的体积，mL；m样重量，g；w试样水分百分率，%。计算结果保留到小数点后一位。8 精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过其算术平均值的2%。粮油检验 大豆水溶性蛋白含量的测定编制说明大豆水溶性蛋白含量的测定标准起草组2018年10月粮油检验 大豆水溶性蛋白含量的测定编制说明1工作简况1.1 任务来
11、源 根据国家粮食局2015年粮油行业标准制修订计划的要求，由南京财经大学等单位负责粮油检验 大豆水溶性蛋白质含量的测定（计划号:20140342）制定工作。起草单位成立的标准起草组负责进行本标准的各项工作。1.2 制定本标准的意义大豆富含脂肪和蛋白质，是重要的油料作物，因其含有3050%的蛋白质，也是重要的植物蛋白资源，含有所有必需氨基酸，其加工功能，营养和风味特性在食品工业中发挥着重要作用，常用作来制作各种豆制品、酿造酱油、提取蛋白质及加工饲料。新收获大豆中所含蛋白质通常90%以上可溶于水，这部分蛋白称之为水溶性蛋白。只有能溶解的蛋白才能更好的被加工利用，所以大豆蛋白质的溶解性是豆制品加工和
12、大豆蛋白生产最重要的特性。大豆水溶性蛋白主要由大豆球蛋白和大豆清蛋白组成，随着储存时间延长，大豆蛋白的水溶性降低，因此，我国将大豆水溶性蛋白含量作为是否适宜储存的重要判定指标。另外，GB/T19541-2017 饲料原料 豆粕标准中也将氢氧化钾蛋白质溶解度作为豆粕质量的一项主要质量指标进行了规定。为规范统一、提高分析检测效率，有必要制定大豆水溶性蛋白质含标准检验方法。1.3标准主要工作过程为了更好的完成标准任务，查阅了国内外相关资料。目前，蛋白质含量测定的主要方法有凯氏定氮法、光谱法、比色法和近红外等。而大豆水溶性蛋白质含量测定主要采用凯氏定氮法，涉及到的标准有GB/T 5511-1985附录
13、、NY/T 1205-2006、GB/T 31785-2015附录和AOCS Officoal Method Ba 11-65，其中GB/T 31785-2015大豆储存品质判定规则中附录给出的水溶性蛋白质测定方法完全等同于GB/T 5511-1985附录。研究表明，水溶性蛋白的提取是大豆水溶性蛋白含量测定的关键，振荡方式、振荡频率、提取温度、样品细度等因素均能影响水溶性蛋白的提取。在比较现行的研究文献和相关标准基础上，确定了本方法标准制定方案和工作计划。2标准的编制原则和标准的主要内容2.1标准编制原则本标准是根据GB/T1.1-2009标准化工作导则第1部分：标准的结构与编写规则、GB/T
14、20001.4-2009标准编写规则第4部分：化学分析方法的规定进行编制的。2.2确定国家标准主要内容本标准的技术内容包括范围、规范性引用文件、原理、试剂和材料、仪器和设备、试样制备、分析步骤、结果计算及精密度等。2.3主要研究内容及试验结果2.3.1标准研究的内容及原理本标准规定了大豆中水溶性蛋白质含量测定的原理、试剂和材料、仪器和设备、试样制备、分析步骤、结果计算和精密度。测定原理：用水提取大豆中的水溶性蛋白，含氮化合物在催化加热条件下被分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，加碱蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后用硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量计算含氮量，再乘以换算系数，计算出大豆中水溶
15、性蛋白的含量。2.3.2 试验结果以国产东北大豆为原料，通过单因素试验及正交试验的结果，结合参加起草单位验证数据，并综合考虑各因素在实际中的简便、可行性，确定了大豆水溶性蛋白提取的最佳提取条件：料液比 140、提取时间 2 h、提取温度 30 、离心转速 3000 r/min。2.3.2.1 水溶性蛋白提取取混合均匀的样品80g100g，粉碎（一次通过CQ24筛的90%），称取粉碎试样1g（精确到0.001g）于50 mL离心管中，吸取40 mL蒸馏水于离心管中，摇混使样品均匀分散。在可控温往复式摇床上， 35 2温度下振荡2 h。取下离心管，以3000 r/min的速度离心10 min。2.3.2.2 凯氏定氮法消
