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1、肺炎型支原体药敏检测培养基 陕西瑞凯生物科技有限公司 研发单位 第四军医大学生产商 瑞凯生物科技 资质 什么是支原体 支原体是一种介于细菌和病毒之间 无细胞壁的最小病原微生物 比细菌小 比病毒大 可通过滤菌器 显微镜下观察不到 支原体的大小为0 2 0 3um 无细胞壁 不能维持固定形态而呈多边形 没有细胞壁 因此对影响细胞壁合成的抗生素 如头孢类 青霉素类不敏感 对热抵抗力差 通常55摄氏度经15分钟处理可使之灭活 因此应严格控制培养温度在37摄氏度 繁殖所需物质特殊 所以许多培养基培养时间长 因此更适合支原体繁殖的物质及配合比例 就显得尤为重要 同时也是不同培养基的主要技术区别所在 支原体
2、的分类 1 自然界目前已经发现的150多种 2 与人有关的 人类能感染的 人型支原体 MH 解脲支原体 UU 肺炎支原体 MP 生殖支原体 MG 显微镜下观察肺炎支原体 肺炎支原体传播途径及发病率 1 通过呼吸道飞沫传染 2 可散发流行 3 全年均可发病 4 易感染的人群儿童 青少年 5 发病率 由支原体引起的感冒占整个感冒20 40 支原体肺炎的发病率可占所有肺炎病例的30 40 引起感冒的几种原因及检测与治疗 细菌感染 可通过检查血常规 测定白细胞 中性粒细胞高低来判断 小时出结果 头孢类 青霉素类抗生素 病毒感染 通过血常规 测定淋巴细胞高低来判断 小时出结果 无特效药 用解热镇痛来缓解
3、 靠免疫力 肺炎支原体感染 大环内酯类抗生素 破坏细胞中蛋白质合成 1血清学检测 也称抗体检测 检测患者血液中是否存在支原体抗体 小时出结果 目前普遍采用 2 检测 依靠大型设备 手段繁琐 无临床价值 目前只做科研使用 传统培养法直接查病原体 所需时间长 但准确率高 肺炎支原体几种检测方法对比 1 血清学检测 抗体检测 3小时出结果是指抗体产生后经3小时检验 但从人感染支原体到体内产生抗体需要5 天 且治愈后抗体在体内衰退仍需 月 所以说无论什么时间做抗体检测结果都不准确 传统培养法 直接查患者体内病原体 准确率高 但所需时间长 小时 瑞凯培养法 准确率高 直接提取患者咽部分泌物查病原体 发病
4、前2 3天就能查到 培养时间短 小时报结果 目前医院检查肺炎支原体常用手段及治疗 常用抗体检测 患者由于时间问题未产生抗体时 靠经验用药 天后 如无缓解再测抗体 产生后换药治疗 联合用药 增加患者负担 造成滥用抗生素 抽血检测患者痛苦 易造成交叉感染 操作时采样 血清离心繁杂费时费力 瑞凯培养法检测的临床意义 直接查病原体 发病前 天就可在呼吸道分泌物中发现肺炎支原体 实现早期发现 快速正确诊断 及时治疗 根据患者病情各异 指导正确用药 避免滥用抗生素 减少患者负担 无需采血 减少患者痛苦及恐怖心里 肺炎型支原体药敏检测培养基的作用机理 pH为碱性 红色 营养物质 葡萄糖 酚红 抑菌剂 肺炎支
5、原体 pH为酸性 黄色 37 培养 葡萄糖 分解 H 产品由培养基与药敏板组成 药敏板制备 药敏板内分别包备11种不同浓度的抗生素 为低浓度 为高浓度 两孔未包备 肺炎支原体药敏检测培养基的使用步骤 常温下使培养基解冻 滴加50ul到药敏板12号A孔 再加50ul石蜡油封盖以防挥发 用无菌棉拭子 或咽拭子 在口腔咽部捻转数次取出棉拭子置于培养瓶内 搅动数次 对着瓶壁尽量挤压出其中液体 然后取出棉拭子弃之 移液器将接种后的培养基分别滴加到药敏实验板除阴性对照孔外的23个小孔内 每孔50ul 然后每孔再加50ul的液体石蜡 将药敏板连同培养瓶内剩余培养基放置37 C恒温箱培养24小时 结果判断 阳
6、性判断 A 培养瓶和药敏板的12号A孔培养基应保持原来的红色 如果变黄操作过程可能出现问题 建议放弃本次试验 B 培养瓶和药敏板的12号B孔保持原来的红色为阴性 变黄判定为阳性 药敏判断 标本判定阳性后再分别观察1 11号孔 如果A B两孔均呈黄色说明肺炎支原体对该抗生素耐药 A孔呈黄色 B孔保持红色 则是中度敏感 如果A B两孔均保持原来的红色则肺炎支原体对该抗生素敏感 肺炎支原体 37 培养 50ul 孔 50ul 孔 敏感 中敏 耐药 注意事项 1 培养液 4 C至 15 C冷冻保存 不能反复解冻 2 取样位置准确 取样量足 3 取样后在10分钟内接种到培养基 4 37 C恒温 解答大家
7、关心比较多的问题 1 采样部位 咽喉部位 舌腭弓 悬雍垂 扁桃体 2 采样方法 A 棉拭子浸润生理盐水后并挤压出棉拭子液体采样更佳 B 捻转数次 粘取尽量多 没有具体量值 的分泌液 C 棉拭子压住舌根部 令患者咬住30秒左右取出 3 采样后 咽拭子能放置多久 我们建议采样后立即将咽拭子放入培养基内 据国外文献报道 MP离开宿主后会很快死亡 15分钟以内 另外这样也避免了感染其他杂菌的可能 门诊的使用 4 培养基能否快速解冻 可以 科室可以根据当天的大概用量 早上在恒温箱里快速解冻 5 当天解冻了 没有用完的培养基 能再冻起来吗 不能反复冻融 但是您可以把它冷藏起来 明天继续用 培养基在冷藏环境
8、下至少可以保存一周以上 6 如果培养结果偶尔出现浑浊 沉淀或者半红半黄的情况 应该如何判断 出现这样的情况全部判断为阴性 培养基内发生的这种变化不是由于存在MP引起的 而是因为患者口腔内的食物残留或者其他口腔杂菌引起的 培养基特异性极强 只有MP能在其中快速生长繁殖 而其他微生物的代谢和酸性物质不敏感 才会出现以上情况 7 试剂的准确率如何 经临床对比验证 我们的培养基检验结果的准确率达到了98 以上 菌株试验100 准确 8 标本量是否对结果有影响 从之前各医院的使用结果上看 标本量对培养时间有一定的影响 如果没有达到足够的标本量 即采取的咽部分泌物量 就可能无法在24小时内检出阳性 但24
9、小时后仍可能出现阳性 所以采集时尽可能取足标本 9 口内微量的支原体是否会导致结果阳性 不会 当咽部提取的分泌物内支原体量没有达到104 106时 也就是没有达到肺炎支原体的发病基数 24小时内结果不会呈现阳性 但是由于本试剂的敏感性达到10 8 延长培养时间也可能出现阳性 9 关于临床效果对比 培养法本身就是微生物检验的金标准 如果与其它检查抗体的检验方法对比 是没有什么可比性的 因为这是两种完全不同的检查方法 临床目的和意义也是完全不一样 MP培养更适合用于早期筛查和指导临床用药 如果比较应该在培养方法之间比较 也只有快速出结果的培养才能真正实现早确诊 早治疗 对指导临床用药意义更大 真正
10、具有意义的效果观察应该是根据试剂检验结果 结合临床医生对患者的诊断以及用抗MP药后结果来综合判断试剂的检验效果 10 关于临床试用由于肺炎支原体的发病率仅占肺炎患者的30 左右 如果仅仅观察10例20例 是不能真实反应检查效果的 也不能因此得出任何结论 所以也就不能真正观察出试剂的有效率 建议观察50 100例之间 结合临床诊断及用抗MP药后效果作出判断 同时鼓励临床医生多送较典型的肺炎支原体患者标本进行试验对比 相对较有实际意义 11 关于假阳性很多同类培养基假阳性率高的原因 试剂的抑菌剂失效 试剂本身特异性不高 目前一般试剂主要存在这个原因 由于产品存在出结果时间缺陷 但又想在短时间内出结
11、果 因此在产品中故意少加抗菌剂或只加抗菌谱小的抗菌剂 让其它细菌快速繁殖导致阳性结果 从而达到 表象 的快速 12 关于假阴性 产生假阴性原因 取样后没有及时进行培养 培养温度没有控制好 过低或过高 储存条件不足以及放置温度不符合要求致使试剂失效 取样部位不正确 取样量不足 取样前患者使用过抗MP药物 13 关于特异性 1 MP检测培养基的特异性是根据MP培养基的执行标准 通过陕西省医疗器械检测中心实验室数据合格的有效结果批复 是有合法临床依据的 2 MP的特异性检测依据主要是根据国家相关的检验标准规定 检验组 加入MP阳性标准株检验结果为阳性 对照组 加入呼吸道其它细菌检验结果为阴性 标准株组 检验组 的阳性率与其他细菌组 对照组 的阴性率的平均值就是特异性值 3 本试剂是选择性培养试剂 不适合其它支原体和其它细菌生长 通过本产品最适合MP快速生长的核心技术 同时加入不影响支原体繁殖的高效抑菌剂 将其它微生物抑制或者杀灭 4 各种微生物的生长环境要求不同 生长时间以及在培养过程中产生的分解产物也不同 所以产生的PH值环境也不同 谢谢观赏
