显微注射海藻糖对卵母细胞玻璃化冷冻效果影响的研究.docx

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1、安徽医科大学硕士毕业论文目录中英文缩略词对照表1中文摘要2英文摘要5第一部分海藻糖联合人工辅助激活在家兔成熟卵母细胞玻璃化冷冻中的应用前言10材料与方法12结讨结果16论20论23参考文献23第二部分海藻糖应用于人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻及安全性研究前言27材料与方法28结讨结果31论34论36参考文献36附致综录40谢42述43安徽医科大学硕士毕业论文中英文缩略词对照表缩写MICSI英文全称metaphase intracytoplasmic sperm injection中文全称第二次减数分裂中期单精子卵胞浆内注射IVF-ET in vitro fertilization and embr

2、yo transfer体外受精胚胎移植技术HMGPMSGFSHHCGOCCsGnRHaHTFPVPAOAPBSHSAhuman menopausal gonadotropinpregnant mares serum gonadotrophinfollicle stimulating hormonehuman chorionic gonadotrophinoocyte-cumulus complexgonadotrophin releasing hormone agonisthuman tubal fluidpolyvinyl pyrrolidoneartificial oocyte activ

3、ationphosphate buffer salinehuman serum albumin人绝经期促性腺激素孕马血清促性腺激素卵泡刺激素人绒毛膜促性腺激素卵丘-颗粒细胞复合体促性腺激素释放激素激动剂人输卵管培养液聚乙烯吡咯烷酮人工卵母细胞激活磷酸盐缓冲液人血清白蛋白HEPEs4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic 4-羟乙基哌嗪乙磺酸EMVMTMDMWMPROHEGFISHDAPISPSSequilibrium mediumvitrification mediumthawing mediumdilution mediumwashing m

4、edium1,2-propanediolethylene glycolfluorescent in situ hybridization4,6-diamidino-2-phenylindoleStatistical Product and Service Solution1平衡冷冻液玻璃化冷冻液融解液稀释液清洗液丙二醇乙二醇荧光原位杂交技术4,6-二脒基-2-苯基统计产品与服务解决安徽医科大学硕士毕业论文显微注射海藻糖对卵母细胞玻璃化冷冻效果影响的研究第一部分海藻糖联合人工辅助激活在家兔成熟卵母细胞玻璃化冷冻中的应用中文摘要目的(1)探讨家兔稳定高效的超促排卵方法,以获得充足的优质家兔卵母细胞

5、;(2)探讨海藻糖的应用能否提高家兔成熟卵母细胞的玻璃化冷冻效果;(3)探讨人工辅助激活技术能否提高冻融后家兔卵母细胞的发育潜能。方法(1)30 只新西兰大耳白兔,平均随机分成 3 组:人绝经期促性腺激素(HMG)+人绒毛膜促性腺激素(HCG)组;孕马血清促性腺激素(PMSG)+ HCG 组;卵泡刺激素(FSH)+ HCG 组,比较 3 组超排卵效果。(2)选择 HMG + HCG 组及 FSH +HCG 组超排卵后获取的 438 枚优质成熟卵母细胞随机分成四组:显微注射海藻糖组(n=143):将 0.15 mol/L 海藻糖显微注射进入卵母细胞后行玻璃化冷冻,其冷冻保护液含 0.5 mol/

6、L 海藻糖;细胞外海藻糖组(n=127):卵母细胞未注射海藻糖,其冷冻保护液含 0.5mol/L 海藻糖;常规蔗糖组(n=118):卵母细胞行常规玻璃化冷冻,冷冻保护液含 0.5mol/L 蔗糖;新鲜对照组(n=50):卵母细胞未行玻璃化冷冻。以 cryoleaf 为载体,联合使用乙二醇和丙二醇作为冷冻保护剂进行卵母细胞冷冻。(3)卵母细胞冷冻一个月后解冻,复苏后在分裂期培养液中孵育 2 小时后行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI),ICSI 后部分卵母细胞入 7%无水乙醇作用 6 分钟(即人工辅助激活)后移入分裂期培养液中培养(激活组),另一部卵母细胞 ICSI 后直接入分裂期培养液中培养(非

7、激活组);新鲜对照组直接行ICSI。观察各组卵母细胞冻融后存活率、受精率、卵裂率及囊胚率。结果(1)HMG+HCG 组的平均回收卵泡数显著高于 FSH+HCG 组和 PMSG+HCG 组,差2安徽医科大学硕士毕业论文异有统计学意义(P0.05);FSH+HCG 组与 PMSG+HCG 组平均回收卵泡数比较差异有统计学意义(P0.05);PMSG+HCG 组超排后的卵巢平均充血卵泡数、平均卵巢囊肿数显著高于 HMG+HCG 组和 FSH+HCG 组,差异有统计学意义(P0.05);三组冷冻组的卵母细胞受精率、卵裂率、囊胚率均显著低于新鲜对照组(P0.05),但均显著低于新鲜对照组(P0.05),但激活组受精率明显高于未激活组(P0.05),激活组受精率明显高于未激活组(P0.05),激活组受精率明显高于未激活组(P0.05),显微注射海藻糖组受精率、卵裂率、优质囊胚率高于细胞外海藻糖组和常规蔗糖组,差异均有统计学意义(P0.05),其中与细胞外海藻糖组受精率、卵裂率差异极显著(P0.01),与常规蔗糖组卵裂率差异极显著(P0.05);显微注射海藻糖组与新鲜对照组优质胚胎率、优质囊胚率差异有统计学意义(P0.05);细胞外海藻糖组及常规蔗糖组与新鲜对照组受精率、卵裂率、优质胚胎率、优质囊胚率差异极显著(P0.05)。结论(1)海藻

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