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1、绵羊胚胎移植技术报告钱建共1，吴文忠1，孙炜1，刘怡雯1，陈玲2（1.苏州市畜牧兽医局，江苏苏州215128；2.苏州市城区检疫事务所，江苏苏州215128）在影响养羊生产效益的要素中，品种是首要因素。应用优良的肉羊品种是提高养羊生产水平、促进肉羊产业发展的基础。国外一些优秀的绵羊品种生长性能和产肉性能均优于国内地方品种，它们引进与地方品种杂交后，杂一代在肉用性能方面提高了20%以上。但由于种羊引种昂贵，繁殖率不高，繁殖周期也较长，不能迅速推广。湖羊以其多胎、早熟、宜舍饲、耐粗饲、高繁殖力等特性著称，是国内绵羊优良地方品种之一，为了更好地开发利用好地方品种资源，苏州市种羊场与苏州市畜牧兽医站共
2、同开展了湖羊杂交育肥试验，试验结果表明湖羊的杂种优势明显。其中，湖羊杂一代羔羊8月龄体重比湖羊提高30%左右，屠宰率比湖羊提高3个百分点左右。本项目拟运用苏州市种羊场已引进的特克塞尔、陶赛特两个国外优秀的肉用绵羊作供体，湖羊母羊作受体，开展胚胎移植应用技术的研究，旨在摸索成套的绵羊胚胎移植技术，迅速增加优秀绵羊群体，进行推广。同时进行湖羊本品种选育提高，进一步提高湖羊的肉用性能和配套的饲养管理技术。1项目研究材料和方法1.1研究材料1.1.1仪器设备体视显微镜、水浴锅、家用冰箱、烘箱、保定架（操作台）、手术推车以及手术器械等。1.1.2药品促卵泡素（FSH）（宁波生物激素有限公司所产，规格为1
3、00单位/支，批号为030903）、氯前列烯醇（PG）（宁波生物激素有限公司所产，规格为0.1mg/支，批号为040702）、人用绒毛膜促性腺激素(HCG)(丽宝生化制药有限公司生产，规格为1000单位/支，批号为国药准字H44020674)、速眠新(长春农牧大学兽医研究所生产，规格为1.5mL/支，批号为20020917)、苏醒灵(长春军需大学兽医研究所生产，规格为1.5mL/支，批号为20020428)、冲卵液和营养液（北京比威克责任有限公司生产）、青霉素、生理盐水等。1.1.3种羊特克塞尔和陶赛特种羊、湖羊母羊。1.1.4饲料种羊场种植的青绿饲料和收购的青干草、青贮玉米以及自配的配合饲料
4、。1.2研究内容和方法1.2.1绵羊的同期发情技术运用注射前列腺素（PG）促使供体和受体母羊达到同期发情。1.2.2超数排卵技术在母羊发情的前3d开始给供体母羊注射促卵泡激素（FSH），每天2次，间隔12h，连续注射3d。发情周期以种羊场记录统计结果为准。1.2.3配种技术在供体母羊注射前列腺素（PG）前3天开始早晚用试情公羊试情，待母羊发情接受爬跨后用选定的种羊进行配种（自然交配）。母羊在配种前30min静脉注射人绒毛膜促性腺激素。公羊在配种利用前按要求加强饲养管理和保持适量运动，并检查精液质量。1.2.4冲胚、移胚技术在母羊配种66h后，利用外科手术方法从供体羊子宫角内用冲卵液冲出胚胎，在
5、体视显微镜下进行鉴别和分类，然后将发育正常、发育期相同的胚胎移植到受体羊的输卵管内。1.3试验地点湖羊及外种羊饲养管理和胚胎移植等整个试验均在苏州市种羊场内进行。1.4关键技术1.4.1根据苏州市种羊场母羊发情记录，统计母羊发情周期，然后查阅有关文献，确定绵羊同期发情和超排程序，供体羊与受体羊数量之比按1:81:10选定。1.4.2本项目是采用鲜胚进行移植，对手术要求相对较高，从胚胎冲出子宫到再次移植到子宫间隔时间要控制在2h以内，因此要求手术参与者不光动作熟练快捷，而且分工负责，这样才不至于混乱出错。1.4.3在整个采胚、移植过程中，环境温度必须保持在恒温，同时接胚、移胚用的器械，包括营养液
6、、冲胚液必须保持在36，避免胚胎因遭受冷、热打击而损伤或死亡，影响试验结果。1.4.4保持手术过程中的无菌操作，并加强供体和受体母羊的术后护理，确保手术羊尽恢复和无后遗症。2研究结果2.1绵羊同期发情技术经过对种羊场近几年母羊发情情况的记录统计，绵羊（湖羊、外种羊）的发情周期为1617d之间，发情持续11.5d。供体母羊在肌肉注射PG0.1mg两天后开始发情，第一次发情不给予配种，在下一个发情期的前两天再次肌肉注射PG0.1mg，若母羊为自然发情则只在下一个发情期前两天肌肉注射PG0.1mg。受体母羊分别在供体母羊从第一次发情后的第6d和第14d分两次肌肉注射PG，每次每只0.1mg。经过上述
7、处理的湖羊和外种母羊的发情症状明显。整个试验期间共处理试验母羊240只，其中接受试情公羊爬跨的为224只，比例达93.3%。手术结果也证实接受爬跨的受体母羊都有排卵点（红体）。2.2超数排卵技术在供体母羊发情周期的第12、13、14d分别肌肉注射不同剂量的FSH，每天早、晚各注射一次（其间间隔12h），递减注射（总剂量为150IU），并在第6次注射FSH的同时注射0.1mg/只PG，随后经处理过的供体羊会在1248h内发情。绵羊同期发情和超排程序时间时间供体受体-2天7am试情0天发情6天1pmPG0.1mg78试情、记录12天7:00amFSH35IU7:00pmFSH35IU137:00a
8、mFSH25IU7:00pmFSH25IUPG0.1mg147:00amFSH15IU，PG0.1mg试情、记录7:00pmFSH15IU157:00am试情、记录试情、记录7:00pm167:00am试情、配种（配种前30分钟静脉注射HCG700IU）7:00pm17停饮食24h停饮食24h18采胚移胚2.3手术采胚和鲜胚移植技术手术采胚关键在于手术时间选择上。从我们试验结果来看，在供体羊配种6672h后，胚胎移行位置大概在子宫角上端，采胚只要在子宫角中部下针冲胚即可，如在供体羊配种后。而移植只需移植到受体羊的输卵管即可。羊超排情况及受体羊移植情况表（表一）供体羊数/只平均冲胚时间/min胚
9、胎数/枚排卵点/个胚胎发育阶段受体羊/只平均移胚时间/min左右左右C4C8C16C30311501992432148454858121182.4生产胚胎移植羔羊本项目共采取30只供体羊的有效胚胎合计349枚，平均每只供体母羊采到有效胚胎11.63枚，移植受体母羊121只。胚胎移植母羊平均妊娠率约为50.8%。妊娠母羊累计产羔155头，受体母羊妊娠产羔率约为128%。胚胎移植羔羊的体重的生长发育情况表（表二）kg初生2月龄4月龄6月龄8月龄外种羊4.941.0625.073.6733.343.9538.553.4251.433.46优质湖羊4.10.817.63.926.13.433.22.1
10、41.53.3胚胎移植羔羊的体长的生长发育情况表（表三）cm初生2月龄4月龄6月龄8月龄外种羊33.433.464.572.4470.863.6773.573.9588.753.73优质湖羊333.1573.8663.1702.881.12.7胚胎移植羔羊的体高的生长发育情况表（表四）cm初生2月龄4月龄6月龄8月龄外种羊35.883.58561.7358.863.7260.715.3767.324.51优质湖羊363.4522.7572.2652.376.13.7胚胎移植羔羊的胸围的生长发育情况表（表五）cm初生2月龄4月龄6月龄8月龄外种羊37.433.4664.293.8269.433.
11、5571.431.1389.482.54优质湖羊363.4552.5633.0812.487.82.33小结与讨论3.1在制定湖羊同期发情和超排处理时，我们主要借鉴了山羊处理程序，经过多次摸索验证后，制定湖羊及外种羊的处理程序，再开始正式的试验。与山羊的比较，发情周期缩短了4d，FSH的总体剂量加大了50IU，增加了供体母羊配种前前30min静脉注射HCG700IU内容。试验结果表明，项目拟订的程序是可行的。3.2本试验过程中使用的FSH、PG、HCG均是国产的。据山羊胚胎移植部分资料报道，使用进口的FSH、PG处理，同期发情处理和超排效果还要明显，本项目没有对此进行比较。3.3目前常用的采胚时间分3648小时段和6672小时段两种，采胚部位分别在供体羊的子宫角和子宫颈。在项目正式立项前，我们试用了在子宫角冲胚的方法，正式试验则采用的是子宫颈冲胚的方法。两种采胚时段和部位优劣，在试验过程没有进行对比。3.4在手术过程中，冲出来的胚胎数量（349）明显低于排卵点（447）。是由于受冲胚熟练程度的影响，造成部分胚胎没有冲出来？还是受FSH大剂量促排的影响，造成相当一部分幼稚卵细胞提前释放而形成的红体？或者是一部分卵细胞没有受精，移行速度与胚胎不一致，造成无法冲出检测到？具体是什么原因，有待于进一步研究。
