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1、 吉 林 农 业 科 技 学 院学 士 学 位 论 文论 文 题 目：吉 林 地 区 临 床 健 康 猪 群 链 球 菌 带 菌 情 况 调 查 年 级 专 业： 09 动 物 医 学 学 生 姓 名： 学 号： 指 导 教 师： 评 阅 教 师： 完 成 日 期： 吉林农业科技学院吉林地区临床健康猪群链球菌带菌情况调查吉林地区临床健康猪群链球菌带菌情况调查 摘 要本研究旨在调查吉林地区表观健康猪的猪链球菌带菌情况。随机采集吉林地区7个区县(市)定点屠宰场表观健康猪的腭扁桃体960份，进行增菌培养后采用PCR方法进行猪链球菌种型鉴定并用血清凝集试验复检，对采集的病料进行检测分析。结果：从吉林地
2、区9个区县(市)采集的900份猪扁桃体样品中共检出46株猪链球菌，检出率为5.11%，其中15株为猪链球菌2型(32.6%)，8株为猪链球菌7型（17.3%），3株为猪链球菌9型（6.5%），20株未定血清型（43.5%）。结论：吉林地区表观健康猪群平均带菌率为5.11%，猪链球菌2型为主要血清型。 关键词：临床健康猪；猪链球菌；流行病学调查；扁桃体- I -吉林地区临床健康猪群链球菌带菌情况调查Clinical investigations into healthy swine streptococcus pathogen in JiLin Area Name: Cui Shuhe Majo
3、r: Veterinary MedicineTutor: Hu XianshengAbstract This study aims to survey the apparent healthy swine streptococcus suis in jilin area study. Random collection of seven counties (cities) in jilin area designated slaughterhouses apparent healthy pigs palatine tonsil, 960 after enrichment culture usi
4、ng polymerase chain reaction (PCR) to streptococcus suis type of identification and serum agglutination test the re-inspection, the collection and analysis of the epidemic materials for testing. Results: from the nine districts in jilin area (city) acquisition of check out of a total of 900 samples
5、of pig tonsil 46 strains of streptococcus suis, detection rate was 5.11%, including 15 strains of streptococcus suis type 2 (32.6%), 8 strains of streptococcus suis type 7 (17.3%), 3 strains of streptococcus suis type 9 (6.5%), 20 strains of undetermined serotype (43.5%). Conclusion: the apparent in
6、 jilin area healthy swine pathogen rate was 5.11% on average, streptococcus suis type 2 as the main serotype.Key Words: Clinical healthy pigs; Streptococcus suis; Epidemiological investigation; The amygdala- III -目 录摘 要IAbstractII正 文1前言11 材料与方法21.1材料21.1.1 样品采集21.1.2 菌株与抗血清21.1.3 主要试剂21.2试验方法21.2.1
7、样品的细菌培养21.2.2 猪链球菌种型的鉴定21.2.3 血清凝集试验32 试验结果42.1不同地区猪链球菌分布情况42.2 血清凝集试验结果43 讨论与分析5结 论6参 考 文 献7致 谢8吉林地区临床健康猪群链球菌带菌情况调查正 文前言猪链球菌( Streptococcus suis)属链球菌属，按照荚膜抗原的差异，可分为35个血清型(1-34、1/2)1。其中猪链球菌2 型( Streptococcus suis serotype2，SS2) 在世界上流行最广，致病性最强，同时能引起人的感染，是一种重要的人畜共患病病原。近年在亚洲、欧洲和美洲多个国家出现暴发流行，不仅危及公共卫生安全，
8、而且给世界养猪业造成巨大损失。猪链球菌可以在健康猪和病猪的腭扁桃体定居1年以上2，亚临床症状的带菌猪常会引起猪和人的发病。我国于1998年和2005年分别在我国江苏、四川和香港发生过严重的猪链球菌2型疫情以及人感染死亡事件，但健康猪带菌现象未得到重视。为了了解吉林地区临床健康猪群中猪链球菌的带菌情况，于2011年10月采集屠宰场临床健康猪的扁桃体进行链球菌的分离和检测，为吉林地区猪链球菌的诊断和防控工作提供数据支持。（批注：前言太少了，要有猪链球菌的危害，在国内主要流行情况，吉林地区的主要流行情况概述）1 材料与方法1.1材料1.1.1 样品采集 健康猪扁桃体的采集：从吉林市各县区屠宰场在10
9、d内随机采取本地区猪源的猪腭扁桃体样品共900头份。采集样品4保存。 1.1.2 菌株与抗血清 猪链球菌1型、2型、7型、9型、1/ 2 型和14型的标准抗血清和参考菌株由加拿大蒙特利尔大学引进。1.1.3 主要试剂rTaqDNA聚合酶( 5U/L)、DL2000DNAMarker、10PCRbuffer (含MgCL2) 、dNTPs ( 2.5mmol/ Leach)等购自宝生物工程有限公司，5%绵羊血平板，THB肉汤培养基购自美国BD公司。1.2试验方法1.2.1 样品的细菌培养无菌操作挑取样品接种于绵羊血平板，37 培养1820 h，挑取单个呈浅灰色针尖大小溶血菌落，经涂片进行革兰氏染
10、色、镜检，可见链状革兰氏阳性球菌，采用葡萄糖肉浸液肉汤液体培养基接种纯化增菌培养，37 培养1820 h 收取菌液备用。1.2.2 猪链球菌种型的鉴定用PCR方法对疑似猪链球菌的DNA进行猪链球菌种(gdh)鉴定3，阳性者再进行猪链球菌1型、2型或1/2型、7型、9型鉴定。依据GenBank中的猪链球cps1J( Gen-Bank登录号AF155804)、cps2J (GenBank登录号AF118389)、cps7H (GenBank登录号AF164515)、cps9G(GenBank登录号AF155805)、gdh(GenBank登录号AF229683) 5个基因设计了5 对引物, 引物由
11、上海生工生物工程技术服务公司合成4。由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。具体反应体系及反应程序参考文献5。以参考菌株的DNA模板为阳性对照，金黄色葡萄球菌的DNA模板为阴性对照，水为空白对照。1.2.3 血清凝集试验PCR 鉴定为猪链球菌1型的分别用猪链球菌14型和猪链球菌1/2型标准抗血清作进一步鉴定，PCR鉴定为猪链球菌2型的用猪链球菌1/2型标准抗血清作进一步鉴定。血清凝集试验具体方法为:将已知抗体的诊断血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀， 数分钟后若出现肉眼可见的凝集块，即为阳性反应。同时设生理盐水和菌体对照。2 试验结果2.1不同地区猪链球菌分布情况从吉林地区9个区县(市)采集的
12、900份猪扁桃体样品中共检出46株猪链球菌，检出率为5.11%，其中15株为猪链球菌2型，8株为猪链球菌7型，3株为猪链球菌9型，20株未定血清型。15个采样点中9个采样点检出猪链球菌，其他6个采样点未检出猪链球菌，如表1所示。表2-1吉林市屠宰犬压片镜检法检出情况地区Region腭扁桃体数量Palatinetonsil猪链球菌数量Streptococcus suis检出率/ %Detection rateS. suis 1 型S. suis type 1S. sui s 1/ 2 型S. suis type 1/2S. suis 2 型S. suis type 2S. suis 7 型S.
13、suis type 7S. sui s 9 型S. suis type 9未定型数量Untyped永吉120108.33003304舒兰12075.83002023桦甸1201310.83002209蛟河12000000000磐石18042.22003001昌邑6000000000船营60711.67003202丰满6000000000龙潭6058.33002111合计900465.11001583202.2 血清凝集试验结果 对6株定型分离株用玻片血清凝集试验复检发现: 猪链球菌2 型菌体只与猪链球菌2型抗血清发生凝集，不与猪链球菌1/ 2型抗血清发生凝集，因此判定为猪链球菌2型。猪链球菌7
14、型和9型菌体分别和猪链球菌7型、9型抗血清发生特异性凝集反应。所有结果与PCR 鉴定结果一致。3 讨论与分析本次调查采用屠宰场随机采样的方法对表观健康猪的猪链球菌带菌情况进行监测，并采取屠宰猪的扁桃体，该方法具有简易方便、易操作的优点，且本次所检测猪均为当地的普通育成猪，调查结果具有吉林地区特点。猪链球菌自然存在于上呼吸道，猪群中的感染，多是由腭扁桃体带有病原体的表观健康猪引起6，而存在于腭扁桃体上的猪链球菌的血清型也是多样的。从病猪分离的菌株的血清型主要是2型, 其余还有1/2、3、4、6、7、8 和9 型7；本文仅检测了PCR 方法能够定型的6 个血清型,部分分离株(43.5%)未定血清型,所得结果与已报道的健康猪带菌的优势血清型情况基本相符;而猪链球菌2型菌为15株(32.6%), 这一数据说明吉林地区为猪链球菌2型发病高危地区，应加强本病的重点防控。由于
