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1、实验一 药理实验基础知识一、 目的1. 掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力；2. 更好地掌握药理学基本理论知识；3. 培养科学思维二、 基本要求1. 实验前：预习实验内容并复习相关理论知识；2. 实验时 实验器材要妥善保管； 实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录； 注意节约实验药品； 维持良好的课堂纪律。3. 实验后 各组同学将实验动物处死，实验台擦干净，将实验方盘送回准备室； 值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所； 书写实验报告。三、 实验报告的书写1. 题目2. 目的3. 原理4. 材料：实验动物，器材，药品5. 方法：用自己的语言简单扼要描述出来；6.
2、结果：要求真实、清楚；7. 讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因；8. 结论：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。四、 实验设计基本原则1. 随机原则使每一实验对象都有同等的机会抽到实验组或对照组中，除处理因素外其他因素尽可能均衡一致，从而抵消非实验因素的影响。2. 对照原则 组间对照：阴性对照，阳性对照，同因素不同水平对照； 自身前后对照3. 重复原则五、 实验动物1. 动物的选择 小白鼠：适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。 大白鼠：比较适用
3、于抗炎药物实验，血压测定、利胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。 豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。也常用于离体心脏、心房、肠管实验。又因它对结核敏感，常用于抗结核病药的实验。 家兔：常用于观察研究脑电生理作用，药物对小肠的作用。由于家兔体温变化敏感，也常用于体温实验，用于热原检查。 狗：狗是记录血压，呼吸最常用的大动物。还可利用狗做成胃瘘、肠瘘，以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。2. 实验动物的编号狗、兔等较大的动物可用特制的铝质号码牌固定在颈部或耳上。大鼠、小鼠如为白色可用黄色苦味酸在不同的体表标
4、志上标记。3. 麻醉药的选择 局部麻醉：常采用2普鲁卡因做皮下浸润注射，可用于局部手术。 全身麻醉： 吸入麻醉：可将乙醚蘸在棉球上放入玻璃罩内，利用乙醚挥发的性质，经肺泡吸收，作用较快，适用于小鼠、大鼠短时间麻醉。 注射麻醉：常用戌巴比妥钠和乌拉坦。4. 动物捉拿及固定方法 小白鼠右手抓住其尾部放在鼠笼盖铁纱网上，用左手拇指及食指沿其背部向前抓起颈背部皮肤，并以左手的小指、无名指固定其尾部，便可将小鼠固定在手上。 大白鼠用右手提起尾部，放在粗糙面上，左手的拇指和食指捉其头部，其余三指夹住背腹部即可固定。 豚鼠豚鼠性情温和不咬人，用手握住躯干即可。、 家兔可用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另
5、一手托其臀部，使兔呈坐位姿势。在进行仰位手术操作时，可用绳带将其四肢仰位捆绑在兔手术台上。头部用兔头固定夹固定。5. 动物的给药方法 小白鼠 灌胃法(i.g.)：以左手固定小鼠后，使其腹部朝上，颈部伸直。右手持配有灌胃针头的注射器，自口角插入口腔，再从舌面沿上腭进入食道。小鼠灌胃容量一般为0.10.3m110g。 腹腔注射(i.p.)：以左手固定小鼠，方法同灌胃，右手持注射器，取30度角将针头从下腹部向头端刺入腹腔。进针部位不宜过高，刺入不宜太深，以免伤及内脏。小鼠腹腔注射量一般为0.10.3mll0g。 皮下注射(s.c.)：用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起的皮肤处进针即可。
6、静脉注射(i.v.)：将小鼠置于特制的固定筒内或倒置的大漏斗下，让其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部，或将鼠尾在50C热水中浸泡半分钟使血管扩张。左手拉尾端，右手持注射器将针头刺入尾静脉，推入药液。 家兔 灌胃：需两人合作进行。一人取坐位用两腿夹持兔身，左手握家兔双耳，右手抓住两前肢。另一人将木制开口器横插家兔口内，压住舌头并固定之。取8号导尿管从开口器中部小孔插入食道。插管时如误入气管会出现动物的挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外端浸入水中，如有气泡吹出，表示插在气管内，此时应拔管重插。当判明导尿管在食道以内后，用注射器接通导尿管将药液推入。 皮下、腹腔注射：给药方法基本上同小鼠，唯针头可稍大
7、，给药量可稍多。皮下与肌内为0.51.0/mg，腹腔为1.05.0ml/mg。 静脉注射：将家兔置固定箱内，拨去耳壳外缘的毛，选择一条比较明显的耳缘静脉，用酒精棉球涂擦皮肤，使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指垫在兔耳注射处的下面，右手持注射器，将针头从近耳尖处刺入，当确认针头在血管中后，将药液推入。1. 动物的处死：大、小鼠通常用颈椎脱臼法处死。实验二 硝酸士的宁LD50的测定【目的和原理】掌握药物半数致死量（LD50）的测定方法；掌握简化机率单位法的计算方法。了解急性毒性实验的相关内容及新药安全性评价的内容。药物的急性毒性常以LD50来表示，即能够引起试验动物半死亡的剂量。在实
8、验设计合理并严格掌握实验技术的条件下，药物致死量的对数大多在半数致死量的上下形成常态分布。通过计算可求出LD50。【实验对象】小白鼠(体重1822 g雌雄各半)【实验药品】0.008 %硝酸士的宁溶液、苦味酸溶液【实验器材】注射器、鼠笼、天平【实验步骤】简化机率单位法1、探索剂量范围：取小白鼠1215只，以3只为一组，分为4-5组，选择一系列剂量，分别按组腹腔注射士的宁溶液，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起10 %和90 %死亡率剂量的所在范围。2、正式实验在预备实验所获得的10 %和90 %致死量的范围内，选用几个等比级剂量，0.10 mL /10g、0.12 mL /10g、0.14
9、mL /10g，0.17 mL /10g、0.20 mL /10g、0.24 mL /10g (剂量间的比例一般用1：0.71：0.85)，使一半组数死亡率在10 %50 %，另一半组数死亡率在50 %90 %之间，各组的动物数应相等，一般每组可用1020只，动物的体重和性别要均匀分配。完成动物分组和剂量计算后按组腹腔注射给药。3、给药后观察并记录中毒症状，30分钟后清点各组动物的死亡数，计算硝酸士的宁的LD50、LD50的可信限和可信限率。【结果】组别剂量D对数剂量X死亡数死亡率机率单位Y权重系数Wc权重W12345用两个剂量时=log-1SLDK =用三个剂量时=log-1SLDK =用四
10、个剂量时=log-1+SLDK =用五个剂量时=log-1SLDK =LDK的可信限=LDK1.96SLDK (P =0.95) =LDK2.58 SLDK (P =0.99)LDK的可信限率= (P =0.95) = (P =0.99) X1、X2：剂量的对数，从小剂量到大剂量P1、P2：各剂量组的动物死亡率Y1、Y2：各剂量组的动物死亡率转换成机率单位Wc：权重系数W：权重 W = n Wc（各组动物数权重系数）n：各组动物数 N：组数I：剂量间比值的对数例：某批胆碱酯酶复活剂DMO4-Cl2腹腔注射给予小白鼠后，观察三天内的死亡率，试计算其半数致死量和可信限。剂量D对数剂量X死亡数死亡率
11、机率单位Y权重系数Wc权重W100 mg/kg125 mg/kg156 mg/kg2.00002.09692.19371/106/109/1010%60%90%3.725.256.280.3430.6210.3433.436.213.4315.2513.07I=log=2.0969-2.0000=0.0969=log-1= log-1= log-1(2.0969-0.0061) = log-12.0908 =123.2 mg / kgSLD50 = = = =8.3790.7096 = 5.946LD50的可信限=123.21.965.946 =123.211.6 mg / kg (P =0.
12、95)LDK的可信限率 = =0.094 =9.4% 【注意事项】给药剂量要准确；实验室尽量保持安静；注意观察给药后的各种反应。实验三、戊巴比妥钠的抗惊厥作用【目的和原理】学习制做动物惊厥模型及抗惊厥药的实验方法；观察戊巴比妥钠对士的宁惊厥的保护作用；学习X2检验；了解其它惊厥模型的制备。硝酸士的宁是脊髓抑制性神经元甘氨酸受体的拮抗剂，对脊髓有选择性兴奋作用。皮下注射可致小鼠全身强直性惊厥。戊巴比妥钠促进中枢GABA对GABAA受体的结合，产生超极化抑制性突触效应，从而具有抗惊厥作用。【实验对象】小白鼠，雌雄均可，体重1822g【实验药品】0.5 %戊巴比妥钠溶液、0.008 %硝酸士的宁溶液
13、、生理盐水【实验器材】天平、鼠笼，注射器【实验方法】1、 取小鼠8只，称重，标记，按体重随机分为两组。实验组腹腔注射戊巴比妥钠50 mg/kg (0.5 %溶液0.1 mL/10g)，对照组腹腔注射等容量生理盐水。2、 20分钟后依次给每只鼠皮下注射0.008 %硝酸士的宁0.2 mL/10g。观察30分钟，记录动物死亡数。【结果】全班实验结果汇总，进行差值的显著性检验X2检验，四格表资料x2检验公式：X2 =n：动物总例数四格表组别阳性阴性合计用药组aba+b对照组cdc+d合计a+cb+da+b+c+d = n自由度n=（行数-1）（列数-1）查X2表【注意事项】给药后应保持室内安静，避免
14、刺激实验动物。实验四、吗啡的镇痛作用1热板法【目的和原理】观察吗啡的镇痛作用；掌握用热板法测试镇痛药物的方法。将小鼠置于一定温度的热板上，热刺激小鼠足部产生痛反应，即舔后足反应。以小鼠出现舔后足的时间作为痛反应指标（痛阈值），判断药物是否具有镇痛作用。【实验对象】小白鼠，雌性，体重1822g， 【实验药品】0.1盐酸吗啡、生理盐水【实验器材】恒温水浴、鼠笼、天平、注射器、热板【实验方法】1取小白鼠10只，编号、称量体重。2将恒温水浴调节至550.5。将小鼠放于热板上，记录自放入热板至出现舔后足所需时间（秒）作为该鼠的痛阈值。凡痛阈值在1030秒之间为合格。取筛选合格的小鼠6只，随机分成两组，测定各小鼠的正常痛反应（舔后足）时间，各测2次，每次间隔5分钟，求平均值作为该鼠给药前痛阈值。3给药组小鼠腹腔注射盐酸吗
