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1、血型血清学若干问题 南方医科大学 南方医院兰炯采 一 标本 1 标本采集 1 采错被检者 换床 同名 检测未错 输血错 2 护士送检途中 掉包 3 大量输液处采样 4 抗凝管未混匀 只采干管凝块血红细胞有凝集 2 被检者特殊情况 1 新生儿 Ag不成熟 ABO抗体来自母亲 IgG 老年 Ag 输异型血 成份血 血浆置换 疾病 白血病 淋巴病 Ag 感染 多 全凝集 类B真红 多发性骨髓瘤 串钱状AIHA 自身免疫性溶血性贫血 干扰正 反定型冷凝集血浆蛋白紊乱 低丙球血症 造血干细胞移植后 罕见先天性无ABO抗体 ABO亚型 ABO外抗体 二 定型试剂 失效 使用不当 AHG最适稀释度 效价 抗
2、A 128 抗B 64 亲合力 3min 1mm2 特异性 A2B不漏检 抗体筛选 冷凝集素 染色 抗A B红 抗 A兰 抗 B蓝 未染色者标签脱落 试剂红细胞3 5 溶血洗3 5个混合 阴 阳对照 酶 聚凝胺 三 操作 1 血清1 2滴 50 100u 滴管450倾斜 2 先加血清 后加细胞 3 室温 血清 血浆 4 离心条件 玻片清洁抗 A 256 0 01ml NS0 49ml 取0 1ml 3 5 RBC0 1ml 1000rpm秒101520301 1 2 2 取离心时间为15秒5 结果观察 凝块大小 游离细胞mf 真 假凝集 镜下膜完整 ABO定型 正定反定吸收分抗A抗A1抗B抗A
3、B抗HA1A2BO放散泌A1 AA HAint W W AA HA2 1 AA HA3Mf Mf 20 AA HAbountuMf Mf AHAbend W AHAel AHAx w AA HAm w W AA HB BB HB5 MFMf BB HBx VW W BHBm VW BB HO HHOh ABO定型考虑的问题 1 正反定型不以谁为准 找出原因标本错误 细胞 血清不一个人 输液处采样输异型血新生儿 老年疾病移植ABO外抗体亚型 A2产生抗 A1 试剂2 抗 AB W 而抗 A 亚型 3 mf 亚型 输异型血 4 OC 买 ABO外抗体5 抗 A 抗 B W 吸收放散证实6 唾液 分
4、泌型唾液 隔水煮沸15 离心上清 倍比稀释 加量抗血清修正液 1 8 室温静置1hr 加对应红细胞 离心 结果 后留稀释管阳性 修正液 倍比稀释 4 最后一管稀释度7 抗 H参考价值必须同时作AB A B O对照比较8 B2 中国报道B2 对应A2 产生抗 B1 抗BW H弱于O强于B 1961 Jacobowic 一个家系母及2均B 但B抗原弱 类似A1与A2 称BK 1976 Bryant 提出B2 未被公认 Mollison Blood ransfusioninclinicalmedicine Mohn Humanbloodgroups Zmijawsk CBloodbankingsci
5、ences LawrenceCclinicalpracticesoftransfusionmedicine 肖星甫 输血技术手册 李昌林 免疫血液学 均未承认有B2 9 A2 抗A1 严重溶血性输血反应10 亚型与输血理论 29个血型系统 400多种血型抗原 一个人 有什么Ag 不产生什么Ab 缺什么Ag 接受该Ag 可能产生什么Ab 原则 供者Ag只能比受者少 不能比受者多 亚型病人 接受O型血亚型献血员 当A B型血用 ABO定型与疾病 1 白血病血型变异血型终生不变 基因未变 抗原减弱 阶段性 可恢复 只变 少 不变 多 A B O AB A B 不会反过来 2 血浆蛋白紊乱 凝集肝脏病
6、 传染病 TB 黑热病 多发性骨髓病 球蛋白 心肌梗塞 感染 外伤 肿瘤 纤维蛋白 办法 加盐水 散开洗涤红细胞至散开 定型例 顾 正定型时而B 时而AB 反定型抗 A分析 正定型抗 AB 抗 A 抗 B均小凝块 加盐水减弱 镜下串钱状 红细胞洗涤后正定型为B 血球蛋白紊乱引起 B型 例 薛 TB 正定似AB 但抗 A50 凝集 镜下串钱状 加盐水串钱状不完全消失 分析 洗涤3次红细胞抗 A 抗 B B型 3 类B G 杆菌感染 A AB O B 感染控制 B 消失 血清中抗 B 唾液无B物质 可吸收抗 B 吸收后抗 B效价不降低 放散出抗B 比正常B细胞 多 类B与抗B结合疏 加AB血清不凝
7、集 与全 多凝集正别 例 韩 52y 胆道手术 正定型B 但血清合抗 B 与A型血血主 次侧均凝集 与O配血次侧凝集 分析 抗 AB 抗 B 离细胞多 抗 A 血清中抗 B效价8 抗 A效价512 唾液中H 红细胞上H似O型 吸收抗 B效价只降1高度 放散点抗B64 O型 产生类B 4 多 全凝集 细菌污染 RBCT活化 出生6个月后产生抗 T 多凝集 与部份 10 AB型血清凝集全凝集 与 全部 10份 AB型血清凝集 真凝集 洗涤细胞不能去除 血清中抗T已被自己RBC吸收 无自身凝集 感染史 血污染 控制感染后消失 mf 凝集4 强 37 弱全 多凝集 正定型 吸收 放散 全 多凝集RBC
8、 吸收抗 A 抗 B RBC吸 放 ABO抗体 抗 T 试剂 ABORBCCT未溶化 避开抗T干扰 测定ABO抗体吸收情况 判定全 多凝集RBCABO血型 对照 反定型 唾液血型物质 制定ABO血型 例 苏 女 8M 肺炎 正定型AB 但配血血清凝集AB红细胞 分析 正定型抗 AB 抗 A 抗 B均凝集 游离C50 10份AB型血清 室温强 37 消失 RBC不吸收抗 A 抗 B 反定型AC BC 自身 O型 全凝集 输ORBC 或ORBC 代血浆 无抗体 5 冷凝集素 AIHA 肺炎 冷凝集素 甚至30 凝集自身 他人RBC 递增温度 37 45 盐水洗RBC例 赵 贫血 正定型 AB 洗涤
9、RBC后定 O 与O型配血全侧轻凝集 分析 37 盐水洗2次 正定型O型 血清中冷凝集寿效价64 宜37 配血 并作自身对照 6 AIHA LE RBC粘自身抗体 干扰正定型 蛋白介质ABO抗血清中非特异凝集 血清中自身抗体 干扰反定型 递增温度盐水 22 37 45 反复洗涤RBC 正定型氯喹放散法 正定型 兰炯采 中华血液学杂志1988 9 10 624 二磷酸氯喹以NS配20 加20 AB血清 PH6 0 压积RBC0 2ml 20 氯喹液0 8ml 37 震荡5分钟 洗3次 定型 自身吸收 氯喹放散 反定型 O C吸收 反定型 同种抗体漏检 例 兰炯采 中华医学检验杂志1990 13
10、5 311 6 21AIHAABO正反定型不合直抗间抗放散前放散后正反正反 4ABBBB 4ABBBB 16ABBBB 4AB BB 16ABOOO ABOOO 例 韩 1y Hb2g 正定型 RBC盐水洗涤 A 反定型 OC AC BC 37 试管 法 OC AC BC 朱 34y LE 正定型 A 反定型 6 20 凝集AC 37 减弱 37 试管 法 AC 张 伊文氏综合症正定型 抗 A 抗 B 自身 盐水洗涤不消失 反定型 OC AC BC 45 盐水洗3次 定O型 与O型血主侧凝集 选择凝集不强于自身对照者输血 无反应 ABO亚型 常规用抗 AB 例 张 胆囊炎 初定O 配血次侧 与
11、O型献血员血清 凝集 主侧 与O型RBC 不凝集 复查 抗 A B 抗 A 抗 B 初定血型未用抗 AB而误定O RBC吸收放散抗 A 唾液有H 无A物质 血清有抗 B 不凝集A2 AX例 王 抗 A 抗 B 初定O 作O型献血 配血凝集 7份O型人血清 EC 3份15份凝 4份30分凝 王清 AC BC 唾液有H 无A B物质 王C吸收抗 B 排除 血袋 污染 BX 新生 婴儿ABO定型 胡利亚 兰炯采 中华医学检验杂志 1992 15 4 23127例 6月婴儿 正 反定型不一致22例 低离子法正反定型一致 且输血无反应 方法 测定管中加2滴低离子溶液 NaCl75g 甘氨酸18g 加PB
12、S20ml 加H2O至1000ML 侗PH6 7 ABO外抗体影响ABO定型 IgM抗体常见于 ABO P NM Lewis例 张 女 宫外孕 初定AB型 与AB型血配血 主侧凝集 分析 正定型抗 AB 抗 A 抗 B 抗 A1 A2B反定型 OC AIC A2C BC 合抗 A1 A2B 合抗 A1 输B或ORBC AB血浆 例 杨 B型 杨血清凝集2 4例BC 混合OC 分析 杨N P2型 血清介 IgM 抗P 凡P BC P OC均凝集 注意 混合OC作抗体筛选细胞缺陷 如3个OC均P2型 便漏检 操作技术影响ABO定型 1 责任心 标本弄错 试剂弄错 过期 污染 采血不规范 操作未正规
13、培训 先加血清后加细胞 2 RBC悬液过浓 过稀 3 反应温度过低 过高 4 离心条件强调 责任心 正定型 抗 AB 反定型 OC 正 反定型2人分开做 正 反定型不合 找原因 RH定型 1 国产试剂无统一标准 2 常规RHD定型的争论 3 初筛RHD 复检 弱D AHG法 部分D McAb 不同批号 真 假 抗 D 报弱D 氯仿 三氯乙烯吸收放散 RBC 抗 D 37 30分 洗 等体积盐水 等体积氯仿 三氯乙烯混合物 摇10秒 测量1分 敞口 37 水浴5分 混匀 1000rpm5分 取上层液 O D RBC AHG凡直抗 RBC 作Rh 聚凝胺 酶 AHG 均产生假阳性 解释 RhD R
14、BC IgG 自身抗体 不凝集 抗 D 并未粘上RBC 搭桥 剂 凝集 搭的 自身抗体桥 误制Rh血型 原则 血型有29个血型系统 400多种Ag 一个人有全部血型系统 但无全部血型Ag 有什么Ag 不会产生什么Ab 缺什么Ag 可能产生什么Ab 受者Ag只能比供者少 弱D 部分D 报弱D 供者 作Rh 血用受者 当作Rh 受血 自身抗体血型特异性 胡利亚 兰炯采 河南医科大学学报1990 25 2 2097例AIHA RBC乙醚放散 放散液1 21 41 81 161 321 641 28分析CCDee1 抗ccDEE3 3 3 2 2 1 Eccdee1 CCDee3 2 1 1 抗ccD
15、EE3 1 Cccdee1 自身抗体掩盖同种 Rh 抗体 自身抗体 凝集它人OC 干扰抗体筛选 同种抗体 常为Rh 漏检 随机OC 如D 吸收自身抗体 抗 D 同种抗体 抗 D 可能也被吸收而漏检 自身RBC 放散 自身Ab 吸收 血清中自身Ab 放散 吸收 至吸完自身Ab 直抗 抗体筛选 鉴定自身RBC不会吸收同种Ab 有什么Ag 不会产生什么Ab 无什么Ag 才可能产生什么Ab 胡利亚 兰炯采 河南医科大学学报1992 27 2 17821例AIHA 自身RBC 氯奎放散法吸收自身Ab 抗 E2例 抗 cE1例 自身抗体 直抗 干扰 血型 Rh 抗筛 交叉合血 解决方法 1 热盐水反复洗
16、直抗 2 放散 氯奎法 45 热盐水 甘氨酸法 直抗 3 选择凝集不强于自身对照的血液 4 自身抗体血型特异性 选择合血 影响血型鉴定的方法问题 抗血清 IgM 盐水法IgG 搭桥 酶 AHG 聚凝胺 低离子 白蛋白 搭桥法 没有一种100 可靠 酶 易出假 可发现 酶型Rh抗体 方便聚凝胺 假 AHG 可靠 但操作麻烦 试剂标准化 最近稀释度 前带 后节现象 单价 多价 配血卡 原理为AHG 假 重要技术 吸收放散 原理 1 Ag Ab结合系可逆反应 条件 2 弱抗原吸收能力不弱 放散强 方法 热放散 氯仿 三氯乙烯 氯喹 乙醚 二甲苯 泽比盐皂甙 超声波 酒精 用途 1 证实弱抗原 2 证实全 多凝集血型 3 分离抗体 4 特殊配血 AIHARBC放散液配血 避开自身Ab血型特异性 注意 选择最适合的放散方法 疑难血型鉴定的参考步骤 1 吸收放散 2 血型物质测定 3 家系分析 4 DNA 参考 对照实验凡 搭桥法 应设阴 阳 自身对照 科学设计对照实验 逐一检查反应体系中每个因素 抗体筛选 1 ABO外抗体多为IgG 搭桥法 检测 2 每个人都有IgMABO抗体 盐水凝集 3 用
