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1、乙肝病毒DNA与乙型肝炎表面抗原含量关系的探讨 谢志贤1 董 莹2 艾桂萍1 高德琴1 1卫生部北京医院检验科 北京100730 2新疆伊犁州友谊医院检验科 摘 要 目的 通过对乙肝病毒DNA HBV2DNA 和乙型肝炎表面抗原 HBsA g 的定量检测 以鉴别 HBsA g阳性人群中的具有传染性的部分 对乙型肝炎的预防和治疗提供帮助 方法 测定443例不同人 群血清中的HBV2DNA的同时应用酶联免疫吸附法对该血清进行HBsA g定量检测 结果 HBsA g含量 在10 ng m l水平以下时 HBV2DNA阳性率为114 当HBsA g含量大于10 ng m l范围时 HBV2DNA 阳性
2、率随浓度的增加而增大 结论 HBsA g含量与HBV2DNA在一定范围有关系 当HBsA g大于1 ng m l时 体内就可能有病毒复制 关键词 乙型肝炎表面抗原 乙肝病毒DNA 核酸分子杂交 HBsA g的测定 是目前诊断乙型肝炎最主要的指标 对乙型肝炎的诊治和预防具有重要的意义 由于其操作简 便易行 已被广泛用于各级实验室中 但HBsA g阳性只能 说明已感染过乙肝病毒 并不能确定体内是否存在具有复 制活性的乙肝病毒 而HBV2DNA是乙肝病毒感染和复制 的特异性指标 表明其具有传染性的最有力的证据 2 本文 应用PCR扩增原理结合分子杂交技术检测HBV2DNA 并 同时测定其HBsA g
3、含量 以探讨二者之间的关系 希望能 对临床诊断及治疗提供帮助 1 材料和方法 111 标本来源 各种急慢性肝炎及其它样本共443例 分 离血清后 20 C保存备检 112 主要试剂 HBsA g检测试剂盒由美国雅培 ABBOTT 公司提供 HBV2DNA检测试剂盒 美国 LCC企业集团公司委托上海浩源生物制品发展有限公司 生产 乙型肝炎表面抗原标准 200 ng m l 由卫生部临 床检验中心提供 113 仪器 全自动酶联免疫检测系统为美国雅培 ABBOTT 公司提供 2400型PCR扩增仪 美国PE公 司 114 方法 11411 将HBsA g标准血清用20 小牛血清磷酸盐缓冲 液稀释至浓
4、度分别为200 100 50 20 10 5 2 1 015 012 ng m l 然后对系列标准进行HBsA g测定 以浓度为横轴 以吸光度为纵轴绘制标准曲线 曲线在012 200 ng m l范 围内 线性良好 将所有标本按上述方法进行定量检测 11412 HBV2DNA的检测 将标本用裂解法提取DNA 后 依此为模板进行PCR放大反应 为防止假阴性结果 我 们对每个标本都同时进行 内对照 测定 之后将扩增产物 加到已包被好链酶亲和素的反应板中进行分子杂交 检测 PCR扩增产物中被放大的DNA序列 PCR产物经探针捕 获后 经酶联反应判断结果 2 结果 443例标本HBsA g和HBV2D
5、NA检测结果见表 1 3 讨论 表1 443例标本HBsA g含量与HBV2DNA检测结果 HBsAg ng m l nHBV2DNA阳性数HBV2DNA阳性率 200 100 200 50 100 20 50 10 20 1 10 161 53 45 32 8 144 119 39 32 20 2 2 7319 7316 7111 6215 2510 114 311 PCR技术因其突出的敏感性和特异性 已成为国内 外病毒学 细菌学 病因病理学研究的重要工具 本研究采 用探针法避免了国内PCR方法中普遍采用凝胶电泳 肉眼 观察结果所带来的误差 提高了检测的准确性 312 目前普遍认为 HBV2
6、DNA的存在被视为病毒复制的 标志 且与肝病活动及传染性有关 1 HBV2DNA阳性 即 反映有复制完整的HBV2DNA颗粒 而乙型肝炎表面抗原 又是乙肝病毒核心颗粒的主要结构蛋白之一 其合成受乙 肝病毒遗传密码的控制 本实验结果表明 乙型肝炎表面抗 原含量在1 ng m l水平以上时 HBV2DNA即可出现阳性 313 表中显示乙型肝炎表面抗原含量在10 ng m l以上 时 HBV2DNA阳性率有所增高 在20 200 ng m l范围 内 HBV2DNA阳性率明显增高 并随乙型肝炎表面抗原含 量的增大而增高 说明在此范围内大量乙肝病毒复制 病毒 对机体具有一定的破坏性 并具有传染性 314 乙型肝炎表面抗原含量超过200 ng m l时 因本实验 条件有限 已超出标准曲线 故大于200 ng m l未再分组 对这个问题的解决还有待于我们进一步研究探讨 参考文献 1 刘重阳 1 血清HBV2DNA定量检测的研究近况 1 国外医学临 床生物化学与检验学分册 1996 17 5 38 2 严根宝et al1 聚合酶链反应直接检测HBV DNA方法改进 1 中华传染病杂志 1992 10 2 105 收稿 19992052 04 94陕西医学检验第15卷第2期2000年5月
