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1、基因工程的产物 生物体外 DNA重组和转基因 基因 DNA分子水平 符合人类需要的生物类型和生物产品 DNA重组技术 已经分离出大约4000种 1 识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列 2 使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开 产生黏性末端或平末端 蛋白质 主要从原核生物中分离纯化出来 一 限制性核酸内切酶 分子手术刀 H OH H H H OH H H CH2 OH P O O O 碱基 H2O 磷酸二酯键 你还记得他们吗 重新认识磷酸二酯键 O 以中轴线双侧的DNA上碱基呈反向对称 重复排列 GAATTC CCCGGG 限制酶识别序列的特点 EcoRI限制酶识别的序列为G
2、AATTC SmaI限制酶识别的序列为CCCGGG GGG CCC 限制酶切割DNA分子的两种形式 黏性末端 黏性末端 平末端 平末端 EcoRI 在G与A之间切割 SmaI 在G与C之间切割 CTTAA G AATTC G G AATTC CTTAA G 限制酶切割目的基因 EcoRI 在G与A之间切割 荧光基因 目的基因 二 DNA连接酶 分子缝合针 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 连接黏性末端 连接黏性末端和平末端 效率低 大肠杆菌 T4噬菌体 DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 都能催化形成磷酸二酯键 都是蛋白质 不需要 需要 形成完整的重组DNA分子 形成DNA的一条链
3、基因工程 DNA复制 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上 形成磷酸二酯键 DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 CTTAA G G AATTC 目的基因插入DNA分子中情况分析 荧光基因 目的基因 重组DNA分子 EcoRI 在G与A之间切割 CTTAA G G AATTC 荧光基因 目的基因 重组DNA分子2 重组DNA分子1 目的基因插入DNA分子中情况分析 CTTAA CTAG G CTTAA G CTTAA G AATTC G GATC Sau3A 切割位点 GATC 目的基因插入DNA分子中情况分析 EcoRI 在G与A之间切割 EcoRI 在G与A之间切割 三 基因进入受体细胞的载体 分子运输车 作为运载工具 将目的基因导入受体细胞中 在受体细胞内对目的基因进行大量复制 具有某些标记基因 便于进行鉴定和选择 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存 具多个限制酶切点 以便与外源基因连接 细菌的质粒 病毒 噬菌体衍生物 动植物病毒等 EcoRI Sau3A 氨苄青霉素抗性基因 质粒
