《血红蛋白电泳的意义和判断(高级版)ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血红蛋白电泳的意义和判断(高级版)ppt课件（96页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 ADULTANDNEWBORNHemoglobinscreeningwithcapillarys 2 目的 血红蛋白结构和功能的回顾SebiaCAPILLARYS2 Minicap血红蛋白检测说明血红蛋白临床结果说明 3 血红蛋白的结构 血红蛋白分子是由4条多肽链 2对 和4个可以结合铁和氧气的血红素 Normalhemoglobins containalpha beta delta andgammaglobinchains 三维结构 4亚单位2alpha链2alphagenes3 非 alpha链 beta delta gamma1bgene 1dgene 2ggenes 正常结果 HbA
2、 a2b2 HbF a2g2 HbA2 a2d2 琼脂糖凝胶Hydrasys Sebia 碱性缓冲液 成人 新生儿 血红蛋白遗传病类型 HEMOGLOBINOPATHIES 血红蛋白疾病血红蛋白性质变化 血红蛋白分子病结构异常 一个或数个氨基酸变异或缺失 都将会导致血红蛋白分子的电性发生改变常见血红蛋白变异体b globin S C DPunjab E 血红蛋白含量变化 地中海贫血合成或合成调控异常 bglobin bThalassemiasaglobin aThalassemias合并型 血红蛋白分子病Hemoglobinopathies 地贫Thalassemias 血红蛋白遗传病 遗传性
3、疾病基因学图谱 正常基因 异常基因 异常血红蛋白类型 目前 已经证实的有超过1000种以上的变异体 a b gandd 大部分变异体出现频率较低 并且没有明显临床症状4种主要变异体 HbS HbC HbEandHbDPunjab 出现频率较高 特定人群 携带者会出现健康问题儿童可能在出生时即伴随有严重症状 血红蛋白疾病的区域分布图 Thalassemias 常见与地中海区域 意大利 西班牙 希腊 近东地区 非洲北部 同样常见于东南亚 泰国 印度 越南 中国 印尼 临床症状 Beta地贫重症型 严重贫血 需要长期输血治疗 Beta地贫中间型 Beta地贫轻微型 无临床症状 Beta地中海贫血 常
4、见区域 bo没有Beta链合成b 合成能力下降 Alpha地中海贫血 临床症状 根据Alpha基因的表达状态 有4个不同程度的Alpha地贫症状 1个基因表达沉默 静止型 非常难检测到 在出生会测到HbBart s1 2 2个基因表达沉默 轻型alpha地贫 在出生会测到Bart s2 10 3个基因表达沉默 血红蛋白HbH病 出生时出现2 30 Bart s 儿童 成人出现10 15 HbH 4个基因表达沉默 HbBart s胎儿水肿综合征 死胎 常见区域常见与远东地区 非洲和地中海区国家 镰刀型红细胞血症 变异体出现在6GAG 谷氨酸 GTG 缬氨酸 C型血红蛋白分子病 变异体位置 AA6
5、 GAG 谷氨酸 AAG Lys H t rozygotecomposite AC SC Chromosomes16 a2 a1 a2 a1 Homozygote Chromosomes11 H t rozygote d b d b A g A g G g G g d b d b A g A g G g G g Chromosomes16 a2 a1 a2 a1 SCheterozygotecompound Chromosomes11 Heterozygote d b d b A g A g G g G g d b d b A g A g G g G g D型血红蛋白分子病 常见区域 常见于印
6、度 特点 变异体位置b121Glu 谷氨酸 负电荷 Gln 谷氨酰胺 不带电荷 D LosAngeles D Punjab 6differentHbDaccordingtothepositionofthemutation 碱性缓冲液中 电荷下降 M电泳速度变度变慢 靠近HbS 临床症状 基因杂合体 无症状 仅在电泳中发现D区带 HbAfraction 65 70 HbDfraction 30 35 基因纯合体 轻微贫血HbAfraction absenceHbDfraction 100 E型血红蛋白分子病 常见区域 常见与东南亚地区 特点 变异位点b26Glu 谷氨酸 负电荷 Lys 赖氨酸
7、正电荷 碱性缓冲液 总体带电荷下降 凝胶电泳中 出现在HbC附近 临床症状 杂合体 无症状HbAfraction 65 70 HbEfraction 30 35 基因纯合体 轻微贫血HbAfraction absenceHbEfraction 100 下列情况下 需要进行血红蛋白检测 临床和遗传问题 产前诊断 贫血 小红细胞症新生儿筛查对来自地贫高发区人口 进行筛查 对诊断有帮助的其他信息患者临床症状 年龄 籍贯和其他相关的背景 输血记录 血液全套检测 网状细胞级别和进行细胞形态镜检Hb电泳 EDTA抗凝管 离子平衡和溶血情况 血红蛋白检测的几种方法 目前 血红蛋白检测步骤如下 电泳法对Hb进
8、行检测或者使用等电聚焦电泳法 使用HPLC法进行确认 20 凝胶电泳结果识别表 21 在pH梯度的凝胶片上 根据蛋白不同的等电点 对蛋白进行分离Hb电泳位置取决于缓冲液PH值蛋白电泳至其等电点位置后 停止泳动AtpI pH Hbdoesnothaveanetchargeandstopsmigrating电泳分离效果好 但时间长 需要经验丰富才能获得良好结果及进行结果判断 等电聚焦电泳法 介于普通电泳和等电聚焦电泳之间的新方法 通过毛细管电泳法 即可以获得与IEF方法一样的分辨率 同时检测结果量值HbA2 HbF同样精确 出现异常变异体后 使用下列方法确认 ITANOtest solubilit
9、ytest HPLC液相色谱 Genotyping基因筛查 Capillarys2 Minicap 全自动毛细管电泳法进行血红蛋白检测Capillarys2 Minicap 毛细管电泳法原理 此时 电渗力 EOF 远远强于电场力 因此 蛋白被动从正极向负极端移动 正电极 EOF 负电极 Electromigration 蛋白电泳 DETECTION INJECTION Capillarys Minicap血红蛋白电泳 血红蛋白条带 在电渗力的作用下 8分钟即完成电泳过程 然后 在415nm紫外光下被检测并显示出来 正常质控品必须在每天检测前使用Capillarys 检测速度 40样品 小时试管
10、架1至7号位放置样品 8号位放4ml溶血素Minicap 检测速度 10样品 小时试管架1至26号位放置样品 27号位放溶血素 8个样品消耗5ml溶血素 Capillarys Minicap血红蛋白检测标本要求 抗凝管采血 EDTA heparin citrate 如果需要对输血患者采血 需要在输血前采集血液 使用去除血浆后的红细胞 隔夜或5000rpm 5分钟离心后样品 4 C以上 标本最多存放7天 需要长期存放 可以洗涤红细胞后 放置于 80 C 可存放至少3个月 CapillarysMinicap血红蛋白条带识别表 Capillarys Minicap区带识别表 Z15 HbHZ14 Z
11、13 Hb JRovigo HbN Baltimore J KaoshiungZ12 HbBart s HbProvidence HbJ Mexico HbJ Baltimore Z11 HbKaoshiung NewYork denaturatedHbAZ10 HbHope HbM IwateZ9 HbA HbCamperdown HbPhnomPenh Z8 AcetylatedHbF HbAltanta HbAthens GAZ7 HbF denaturatedHbS HbPorto Allegre Z6 HbD Punjab HbPhiladelphia HbKorle Bu HbLe
12、pore HbK ln denaturatedHbE Z5 HbS HbHasharon HbHandsworth denaturatedHbO Arab Z4 HbE denaturatedHbC HbK ln HbA2variants M IwateHbA2variantsZ3 HbA2 HbO ArabZ2 HbC HbConstantSpring SetifHbA2variantZ1 HbdA2HbaA2 HasharonHbA2variant WinnipegHbA2variant 30 正常HbA2质控品 条带结果可录为QC 31 HbAFSC质控品 可用来作为参照曲线 便于异常结
13、果的判断 32 HbsA F A2检测结果可通过颜色进行区分 异常区带显示为灰色 主要异常血红蛋白变异体 Z15 HbHZ12 HbBartZ10 HbHopeZ9 HbAZ7 HbFZ6 HbDPunjabZ5 HbSZ4 HbEZ3 HbA2Z2 HbC HbE HbS HbH 34 HbS变异体 HbA2正常值 6Glu Val HbA 2 2 HbS 2 S2 HbA2 2 2 Capillarys Minicap血红蛋白试剂优势 无需前处理 不需要洗血和溶血 直接检测血红蛋白C和E能从A2分离开根据S型和D型的细微电荷区别 进行区分 对于处于A和S之间的F给予个性化和聚焦的精确量化
14、对A2型血红蛋白有很好的分辨率和分离效果HbBarts和HbH可以很好的检测和量化糖化型血红蛋白电泳出现在主体峰内 不影响检测结果 36 异常结果分析 37 Case2 31YFemale 血红蛋白12 8 红细胞压积37 4 I A 84 1 F 1 5 A2 5 5 38 31YFemale Hgb12 8 Hematocrit37 4 II Alk Acid F S C A2 C S F thalassemia 轻型 A2 A A A A C P C P A 93 4 F 1 1 A2 5 5 HbA92 5 HbF2 6HbA24 9 HbF HbA HbA2 67Yfemalefro
15、mTunisia Hgb9 1 hematocrit28 MCV62 小红细胞症 betathalassemia轻型 HbH4 HbA94 7 HbA21 3 HbA HbA2 HbH Child9Y fromLaos Hgb8 hematocrit27 9 MCV54 1 严重小红细胞症 血红蛋白H病 需要基因筛查 41 HbHandBart s Alpha thalassemia HBarts 42 Case1 13YMale Hgb8 1 Hct24 0 I A2 6 1 S 82 8 43 Case1 13YMale Hgb8 1 Hematocrit24 0 II Alk Acid
16、F S C S A2 F C S F S HgbF S A2 4 6 betathalassemiaminor A2 A F A C P C P 44 Case2 65YMale Hgb9 4 Hematocrit27 3 I Co migrationwithA2 A 62 1 A2 31 7 45 Case2 HbEMigratesSeparatelyFromHbA2 26Glu Lys 21Y pregnantwoman Hgb13 1 hematocrit38 6 HbA95 HbF2 1 HbA22 9 Normalpattern HbFslightlyincreased pregnancy Baby2monthsold fatherfromMartinique motherfromCentralAfrica Hgb11 hematocrit29 8 HbF49 5 HbS25 9 HbA21 8 HbC22 8 HbF HbS HbA2 HbC SCcompoundheterozygoty Diabeticpatient 54Y Hgb14 5 hematocrit43 5
