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1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 一、理论基础 1筛选菌株 (1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 或 其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。（3）配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养 微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养 ；的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。 2统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有 和 。（2）稀释涂布平板法统计样品中
2、活菌的数目的原理当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有 直接计数。 3设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养 的培养基作为空白对照。一、研究思路（一）筛选菌株1实验室中微生物的筛选主要是指人为提供有利于目的菌株生长的 ，同时抑制或阻止其他微生物的生长。2分解尿素的细菌主要有 ， ， 。3选择培养基是指 。加入 可以分离出 ， 。加入
3、可以分离出 。（二）统计菌落数目4统计菌落数目的方法主要有 ， ， 。5统计菌落数目的理论依据是当样品度足够高时， 。6为保证统计结果准确，通常将 涂布在平板上，培养后再选择 的平板进行计数。7在设计实验时，一定要涂布至少 个平板作为重复组，才能增强实验的说服力和准确性。（三）设置对照8设置对照的主要目的是 ， 。9土壤中分解尿素的细菌的分离与计数9土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的研究思路是 ， 。 二、实验设计 关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下： 1 取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 中。 2制备 ：准备牛肉膏蛋白胨培养基和
4、选择培养基 将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为 ，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。 3微生物的 与观察 将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液 ，转移至盛有 的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102 依次等比稀释至107稀释度，并按照由107103稀释度的顺序分别吸取 进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。 将涂布好的培养皿放在30温度下培养，及时观察和记录。 挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含 培养基的斜面中，观察能否产生如教材中图2-lO的颜色反应。 4细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。三：思考与讨论（1）如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？（2）为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 3
