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1、生物技术实践专题三 植物的组织培养【考纲要求】植物组织培养（实验与探究能力）课题1菊花的组织培养一、基础知识 （一）植物组织培养的基本过程1.植物组织培养技术的理论基础是： 2、细胞全能性表达的基本条件是： 3、细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在_、_和_上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程就叫做细胞分化。4、在生物体内，细胞并不表现出全能性，而是分化为不同的组织、器官的原因是什么？ 5、植物组织培养的基本过程愈伤组织：通过 形成的，其细胞排列 ，高度 呈 状态的_细胞。（二）影响植物组织培养的因素1、选材：不同植物组织，同种植物材料，_，_等也会影响实验结果。2、培养基的成分：常用
2、的是_ 培养基，其主要成分包括： 大量元素，如_；微量元素 ，如_ ；有机物，如 等。 植物激素：关键性激素， 。_、_ 以及_ 等，都会影响实验结果。 3、其他因素： 常用的植物激素： 使用顺序使用顺序实验结果先生长素，后细胞分裂素先细胞分裂素，后生长素同时使用生长素/细胞分裂素生长素细胞分裂素比值与结果比值适中比值低时比值高时思考：1、MS培养基的各种营养物质的作用是什么？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？ 微量、大量元素提供： 蔗糖提供： 甘氨酸、维生素满足： 微生物培养基以： MS培养基则需提供大量： 2、菊花进行茎段组织培养时，培养基为什么要添加有机
3、物? 二、实验操作（一）制备MS固体培养基1、 ：避免每次配制培养基时都要称量几十种成分，将各种成分制成浓缩液2、 ：3、 ：采取的灭菌方法是 。（二）外植体消毒1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 2、消毒 菊花茎段用流水冲洗后用少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右 无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入70的酒精中摇动23次，持续67s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗 取出、无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入0.1的氯化汞溶液中12min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液（三）接种1.无菌操作：用 消毒工作台，在酒精灯火焰旁进行, 每次使用器械后，都需要用
4、 灭菌2、材料的切取和接种：插入时注意方向，不要 （四）培养 应该放在 中进行，并定期进行 ，温度控制在 ，并且每天用日光灯光照12h（五）移栽： （六）栽培：思考与讨论：1.在选取菊花茎段时，为什么要选取生长旺盛的嫩枝？ 2.你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？3.在植物组织培养的过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？三、结果分析与评价-思考与讨论：1.外植体被污染的原因2.从接种到长出愈伤组织需要经过多少天？愈伤组织培养成根和芽时，要注意什么？3.两周后观察茎段的分化情况，观察到什么现象？拓展延伸-植物组织培养特点： 培养条件可以人为控制 生长周期短，繁殖率高 管理
5、方便，利于工厂化生产和自动化控制课题2 月季的花药培养一、基础知识（一）被子植物的花粉发育1.花的结构: _2被子植物的花粉发育：小孢子母细胞 (花粉)单倍体的生殖细胞。（1）被子植物的花粉的发育经历的阶段 、 、 、 小孢子母细胞（2n）（ ）时期（n）单核（ ）期（n）双核期（ ）细胞核（n）（ ）细胞核（n）（ ）细胞（n）（ ）细胞（n）（ ）个精子(n)（ ）分裂（ ）分裂单核（ ）期（n）（ ）分裂（2）被子植物花粉发育过程中的小孢子四分体时期与减数分裂过程中的四分体时期相同吗？（3）两个精子与一个营养核的基因型和染色体数相同吗？ （4）在正常情况下，一个小孢子母细胞可以产生多少个
6、花粉和精子？在一枚花药中可以产生多少个花粉？（二）产生花粉植株的两种途径1两种途径： 花药中的花粉 丛芽 生根 生根 2.区别（1）主要取决于培养基中 的种类及其 的配比。（2) 胚状体的结构及其发育过程与种子相似，所以把 的过程称为分化，把从 的过称为再分化。（三）影响花药培养的因素 材料的选择和培养基的组成等1材料的选择：从花药、花粉、花蕾来看，各应选择什么时候？从花药来看，应当选择 的花药；从花粉来看，应当选择 的花粉；从花蕾来看，应当选择 的花蕾2.为什么选择合适的花粉发育期是诱导花药培养成功的重要因素？3.为什么不选单核期之前或之后的花粉？ 二实验操作（一）材料的选取 通过 确定花粉
7、是否处于适宜的发育期（单核期） 镜检中最常用的方法是_,将染色体染成红色 某些花粉细胞核不易着色的，用_ ，将细胞核染成 1.醋酸洋红法：醋酸洋红为碱性染料，将 染成红色 2.焙花青铬矾法：花药用 处理20min。取出放在载玻片上，加焙花青铬矾溶液染色，盖上盖玻片，显微镜下检查。（二）材料的消毒 1.酒精处理 花蕾用 浸泡30， 清洗 ， 无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分2.消毒液处理0.1%的氯化汞2 4分钟（也可用1%的次氯酸钙或饱和漂白粉，无菌水冲洗35次 （用于培养花药，外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾消毒即可。）（三）接种和培养1剥取花药：无菌条件用镊子取出花药。 注意：勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织。 要彻底去除花丝，因为 。2接种：每瓶接种 个。3培养：培养条件温度控制在 左右，不需光照。幼小植株形成后才需要光照。 培养： 2030d后 4.鉴定和筛选在花药培养中，会出现 的变化，（主要原因是营养核和生殖核融合造成的），因而需要鉴定和筛选。 思考：花药出现污染的原因有哪些？练习2.植物组织培养和花药培养技术的异同:不同:相同：应用：6
