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1、 丙型肝炎病毒抗体测定标准操作程序（SOP）【目的】指导免疫项目丙型肝炎病毒抗体的测定。【适用仪器】酶标仪ST-36O、洗板机ST-36W等。【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。【方法原理】ELISA法：用HCV特异性抗原包被酶联板，待检血清中的抗HCV抗体与包被抗原反应，再与酶标IgG结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，加底物（TMB）显色，在酶标仪上测定后根据OD值判定有无HCV抗体的存在。【标本要求】种类：血清、血浆。【试剂】试剂盒：样品稀释液、阴性和阳性对照、浓缩洗液、酶标抗体、底物液A、底物液B、终
2、止液。保存条件及有效期：2-8储存。自生产日期起，有效期半年。【质控品】试剂盒中的阴性和阳性对照、省临检中心下发的，依说明书48冷藏。【操作步骤】1 加生物素试剂：每次试验设空白对照1孔；阴性对照3孔，阳性对照2孔，分别加入HCV阴、阳性对照10微升。除空白孔外，其余孔加入50微升生物素试剂。2 加样：分别在相应孔中加入待测样本、阴性对照和阳性对照各50微升，空白孔除外。3 温育：振荡混匀，盖上封板膜，置371温育60分钟。4 洗涤：用洗板机洗板，重复洗5次后拍干。5 加酶:空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物100微升。6 温育：振荡混匀，盖上封板膜，置371温育30分钟。7 洗涤：用
3、洗板机洗板，重复洗5次后拍干。8 显色：每孔加入底物缓冲液50微升，再加入底物液50微升，振荡混匀，盖上封板膜，置371温育30分钟。9 终止：每孔加入终止液50微升，混匀。10.用酶标仪读值，零置酶标仪450nm或双波长450nm/630nm下测定OD值。结果判定1 阴、阳性对照和被检样品的OD值减去空白对照OD值即为计算值。2 试剂空白需=临界值应判为HCV抗体阳性反应，临界值为阴性反应。注意事项1各步加液均应使用加液器并经常校对其准确性，以避免实验误差。2封口胶只限一次性使用，以避免交叉污染。3洗涤时各孔均需加满洗液，防止因洗涤不充分造成非特异性反应。4HCV抗体试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。5微孔条从冷藏环境中取出应在室温平衡后再打开密封袋，未用完者须放入有干燥剂的密封袋中保存。6不同批试剂不能混用。7所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。8请严格按说明书操作。详见珠海丽珠试剂有限公司的试剂盒说明书第 2 页 共 2 页
