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1、1.培养基中含有水、无机盐、碳源、氮源和生长因子等营养物质。2实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌等。3固体培养基的配制过程为：计算称量溶化灭菌倒平板。4平板划线法和稀释涂布平板法是微生物接种的常用方法。5消毒的目的是杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物；灭菌则是杀死物体内外所有的微生物，包括孢子和芽孢。课题1微生物的实验室培养培养基及无菌技术自读教材夯基础1培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养物质。 (3)营养成分：水、无机盐、碳源、氮源，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质及氧气的要求。2无菌技术(1)目的：获得纯净
2、培养物。(2)关键：防止外来杂菌的入侵。(3)不同对象的无菌操作方法连线：1下面是查氏培养基(培养霉菌所用)的主要成分，请根据下述培养基，回答下列问题：蔗糖15 gNaNO33 gK2HPO41 gKCl0.5 gMgSO47H2O0.5 gFeSO40.01 g琼脂1520 g水定容至1 000 mL(1)该培养基根据物理性质划分应是什么培养基？为什么？提示：固体培养基。因为该培养基加入了凝固剂琼脂。(2)该培养基包含微生物生长和繁殖所需要的几类营养物质？分别是什么？提示：4类物质。分别是碳源、氮源、无机盐和水。(3)蔗糖提供的是哪类营养物质？NaNO3提供的是哪类营养物质？提示：蔗糖提供的
3、是碳源。NaNO3提供的是氮源和无机盐。(4)在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物所需要的哪些条件？提示：满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需要。2探讨培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气和牛奶所采用的灭菌或消毒方法。提示：分别为高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法。3消毒与灭菌的相同点与区别分别是什么？提示：消毒是杀灭病原微生物和有害微生物，并不要求杀灭一切活的微生物；而灭菌则是杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。跟随名师解疑难1培养基的成分营养物质定义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代
4、谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO2、NaHCO3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高不仅是优良的溶剂而且可维持生物大分子结构的稳定外界摄入无机盐为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂无机化合物2.实验室常用的消毒和灭菌方法项目概念常用方法应用范围消毒使用较为温和的物
5、理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法：在100 煮沸56 min一般物品巴氏消毒法：在7075 煮30 min或在80 煮15 min一些不耐高温的液体，如牛奶化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等紫外线消毒法：紫外灯照射30 min接种室、操作台灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)灼烧灭菌：酒精灯火焰接种工具的灭菌和试管口的灭菌干热灭菌：在160170 下灭菌12 h玻璃器皿、金属工具的灭菌高压蒸汽灭菌：在压力为100 kPa，温度为121 的条件下，灭菌1530 min培养基及容器的灭菌大肠杆菌的纯化培养自读教材夯
6、基础1制备固体培养基 2纯化大肠杆菌(1)方法：平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。(2)鉴定：将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37_恒温箱中，培养12 h和24 h后，分别记录观察。(3)菌种保存：对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏法；对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏法。1培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板，你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸，感觉上以刚不烫手为准。2如果
7、需要调节培养基的pH，应在哪一步骤后进行？提示：溶化后，灭菌前。3在用平板划线法接种大肠杆菌时，第一次划线前、每次划线前及划线操作结束后，都要灼烧接种环，请分析其目的分别是什么。提示：第一次灼烧每次划线前灼烧划线结束灼烧目的避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次划线结束后接种环上残留的微生物，使每次划线的微生物来自上次划线末端杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者4在纯化大肠杆菌操作中，如何验证培养基灭菌是否彻底？提示：将接种后的培养基和一个未接种的培养基，都放在37 恒温箱中培养，观察并记录结果。跟随名师解疑难1微生物培养中有关实验操作的注意事项(1)倒平板操作：培养基
8、灭菌后，需冷却至50 左右时才能倒平板，原因是琼脂在44 以下凝固。培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开。整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。平板冷凝后要倒置的原因：防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基，造成污染。若倒平板时，培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，这个平板应丢弃。(2)平板划线操作：第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。灼烧接种环之后，要等其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。划线时最后一区域不要与第一区域相连。划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。2稀释涂布平板操作(1)稀释操作时：每支试管及其中9 mL水、移液管均需灭
9、菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰12 cm处。(2)涂布平板时：稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“无菌”，应特别注意：酒精灯与培养皿的距离要合适。吸管头不要接触任何其他物体。吸管要在酒精灯火焰周围使用。3平板划线法和稀释涂布平板法的比较项目优点缺点适用范围平板划线分离法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数适用于好氧菌稀释涂布平板法可以计数，可以观察菌落特征吸收量较少、较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延适用于厌氧菌和兼性厌氧菌4.两种菌种保存方法的比较项目临时保藏法甘油管藏法适用对象频繁使用的菌种长期保存的菌种培养基类型固体斜面培养基液体培养基温度4 20 方法菌落长成
10、后于冰箱中保存，每36个月将菌种从旧的培养基转移到新鲜培养基上将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后于冷冻箱内保存缺点菌种易被污染或产生变异培养基的成分例1 下列描述正确的是()A同一种物质不可能既作碳源又作氮源B除水以外的无机物仅提供无机盐C凡是碳源都能提供能量D有些无机氮源也能提供能量解析对异养型微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。如蛋白胨既是碳源又是氮源和能源，葡萄糖是碳源同时又是能源。除水以外的无机物种类繁多，如CO2和N2是无机物，但也是某些微生物的碳源和氮源。CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。NaHCO3可作为自养型微生物的碳源和无机盐。硝化细菌所
11、利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用于化能合成作用的能源。答案D归纳拓展几种微生物的营养能量来源微生物类型碳源氮源能源举例化能异养型糖类、蛋白质等有机物蛋白质等有机物大肠杆菌化能自养型CO2NH3NH3硝化细菌光能自养型CO2NH、NO等光能蓝藻共生固氮微生物糖类等有机物N2有机物根瘤菌自生固氮微生物CO2N2光能固氮蓝藻纯化大肠杆菌的方法例2下列有关平板划线的操作，正确的是()A使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划35条平行线即可D最后将平板倒置，放入培养箱中培养解析在培养基
12、上接种时，一定要做到无菌操作，以防止杂菌污染影响实验或研究的结果。微生物无处不在，包括空气中也充满了各种微生物，所以无菌操作显得很困难，但在酒精灯火焰附近约10 cm的四周为无菌区，因而菌种试管和待接种试管管口不能离开火焰附近，接种环、棉塞也不能离开火焰附近。接种完毕之后为了防止菌体污染，要在火焰上灼烧管口和接种环。为防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，应将平板倒置。答案D易错提醒要建立有菌观念，接种用具、器皿、空气中都充满了微生物，都有被污染的可能，必须严格地消毒灭菌。同时，在实验室中，不可吃东西、喝水，离开时一定要洗手，以防被微生物感染。使用过的培养基要经过高压蒸汽灭菌后才能丢弃，以免污染
13、环境。随堂基础巩固1下列叙述正确的是()A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌解析：选A培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。培养基的种类根据划分依据的不同而不同，如根据化学成分可分为天然培养基和合成培养基。固体培养基是液体培养基添加凝固剂形成的，其他成分均相同。单个的微生物形体微小，肉眼无法看到，必须借助仪器才能看到，在固体培养基上用肉眼观察到的是一个菌落。2下列操作错误的是()A用酒精擦拭双手B用氯气消毒水源C实
14、验室用紫外线进行消毒D玻璃器皿(吸管、培养皿)用酒精直接擦拭即可达到彻底灭菌的目的解析：选D玻璃器皿、金属用具等耐高温、需要保持干燥的物品，应采用干热灭菌法进行灭菌，而用酒精直接擦拭达不到彻底灭菌的目的。3下列关于牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备，叙述错误的是()A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C待培养基冷却至50 左右时进行倒平板D等平板冷却凝固约510 min后将平板倒过来放置解析：选A制备牛肉膏蛋白胨固体培养基时，其操作顺序为计算称量溶化灭菌倒平板；由于牛肉膏比较黏稠，称量时可连同称量纸一同放入烧杯；待培养基冷却至50 左右时，在酒精灯火焰附近倒平板；平板冷凝后，应将平板倒过来放置，以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。4某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()A培养基分装到培养皿后进行灭菌B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培
