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1、专题十二 生物技术实践专题【专题知识网络】【高频考点汇编】考点一、微生物的培养与应用1.培养基 （1）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。（2）培养基类型 按培养基物理性质可分为固体培养基和液体培养基两种，其中固体培养基用于菌种分离、鉴定、菌落计数等。而液体培养基常用于科研或工业生产等。 按培养基的功能可分为选择培养基和鉴别培养基。按照人们对培养基中成分的了解程度可分为天然培养基和合成培养基两种。 说明代谢类型不同的微生物，对培养基营养成分的要求不同，如自养型微生物可以利用无机碳源，而异养型微生物则必须利用有机碳源。不
2、论代谢类型如何，微生物对营养物质的要求都包括碳源、氮源、水、无机盐、生长因子五类。2.关于无菌技术 （1）实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌；常用的消毒方法有煮沸消毒、巴氏消毒、化学药剂消毒。对不同的对象需采用不同的消毒或灭菌方法。（2）在微生物培养时，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵。无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括四方面的内容： 对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。 将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品
3、相接触。3.菌种的纯化（1）利用不同的菌体的菌落特征不同分离菌种，常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法两种： 平板划线法是同一接种环在固体培养基表面连续划线，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，以形成标准菌落。稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释程度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养，以形成标准菌落。（2）选择培养，利用不同微生物对营养需要的不同或对环境要求的不同，将不同微生物分开。考点二、果酒、果醋、腐乳、泡菜制作的注意事项1.果酒、果醋制作的注意事项 （1）材料的选择与处理 选择新鲜的葡萄，榨汁前应先冲洗，再除去枝梗，以避免去除枝梗时引起葡萄破损，增加
4、被杂菌污染的机会。（2）防止发酵液被污染需要从发酵制作的过程进行全面的考虑，因为操作的每一步都可能混入杂菌。为避免杂菌污染：榨汁机要洗净并晾干，发酵装置要洗净并用70%的酒精消毒；若用简易的发酵装置，每隔一定时间排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖等。（3）控制发酵条件 果酒 果醋温度20左右，最适合繁殖；1825，酒精发酵 3035，最适合生长 氧气 前期通O2，然后控制无O2 氧气充足其他时间：1012天；pH:5.06.0 时间：约78天 2.腐乳制作的注意事项 （1）影响腐乳品质的条件：水、盐、酒、温度、发酵时间等。 水的控制：含水量约70%，用含水量过高的豆腐制腐乳，不易成形。 盐的
5、控制：盐浓度过高，会影响腐乳的口味，浓度过低，腐乳易腐败变质。 酒的控制：酒精含量一般控制在12%左右。酒精含量过高，使腐乳成熟期延长。酒精含量过低，杂菌繁殖快，豆腐易腐败。 温度的控制：温度为1518,适合毛霉生长。发酵时间易控制在6个月左右。（2）防止杂菌污染 用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用沸水消毒。 装瓶时，操作要迅速小心。加放卤汤后，要用胶条将瓶口密封。封瓶时，最好将瓶口通过酒精灯的火焰，防止瓶口被污染。（2）腌制条件的控制：腌制过程中要注意控制腌制的时间、温度和食盐的用量。发酵时间受到温度的影响：1820，腌制15天左右。温度高，时间短一些。温度过高、食盐用量不足10%、腌制时
6、间过短，都容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。考点三、植物的组织培养技术1.植物组织培养原理 植物组织培养的原理是细胞的全能性。不同细胞的全能性不一样。生物体的所有细胞全能性大小比较如下： 受精卵生殖细胞体细胞；体细胞中：幼嫩植物组织（如芽尖）成熟组织细胞。2.植物组织培养技术和花药培养技术的异同植物组织培养技术 花药培养技术 相同点 理论依据植物细胞的全能性 基本过程无菌技术及接种操作基本相同 影响因素选材、营养、激素、pH、温度、光照等 不同点 选材体细胞生殖细胞（精子） 3.植物组织培养技术、微生物培养技术和无土栽培技术比较 植物组织培养技术 微生物培养技术 无土栽培技术 概念 在无
7、菌条件下，将离体的植物体器官或组织接种在适当的培养基上进行培养，最终发育成完整植株 在无菌条件下，在适宜的营养和环境条件下对微生物的培养 将植物生长发育过程中所需各种矿质元素按一定比例配成营养液，并利用这种营养液栽培植物 培养基成分 水、矿质元素、蔗糖、维生素、有机添加物和植物激素等 水、无机盐、碳源、氮源等 水、必需矿质元素 特殊操作要求 严格控制无菌操作，在培养过程中要更换培养基，调节细胞分裂素和生长素的比例 严格控制无菌操作，整个培养过程无需更换培养基 适宜的环境条件，基质垫底并固定幼苗，不需要保证无菌条件 考点四、探究不同种类加酶洗衣粉的洗涤效果实验应注意的事项1.实验原理酶的催化作用
8、具有专一性，复合酶洗衣粉加入的酶制剂种类较多，与单一加酶洗衣粉相比，对各种污渍都有较好的洗涤效果。2.实验变量(1)自变量：加酶洗衣粉。(2)无关变量：其他条件相同且适宜（如温度、 pH等）。3.实验步骤步骤烧杯编号注入自来水500 mL500 mL500 mL加入物质（等量）奶渍布奶渍布奶渍布控制水温373737加入洗衣粉（等量）蛋白酶洗衣粉复合酶洗衣粉脂肪酶洗衣粉用玻璃捧搅拌5 min5 min5 min观察实验现象4.实验时注意事项（1）在比较普通洗衣粉和加酶洗衣粉的洗涤效果的实验中，自变量为洗衣粉的种类，设计时应遵循单一变量原则、对照原则，有效控制其他变量，如水的用量、污染物的量、所用
9、实验的布的质地和大小、两种洗衣粉的用量、搅拌及洗涤时间等。（2）在使用加酶洗衣粉时不但要考虑最佳洗涤效果的条件，如最适温度、pH，还要考虑衣物的承受力，如蛋白酶洗衣粉不能洗涤丝绸类衣物；也要考虑洗涤成本问题，因污渍的成分比较复杂，一般选择复合加酶洗衣粉，以减少用量。（3）该实验探究多种加酶洗衣粉对同一污渍的洗涤效果，也可以探究同一种加酶洗衣粉对于不同污渍的洗涤效果。考点五、固定化酶与固定化细胞1.固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术。2.将酶或细胞固定化的方法（1）包埋法：将酶或细胞包埋在不溶于水的多孔性载体中。（2）化学结合法：将酶分子或细胞相互结合，或将
10、其结合到载体上。（3）物理吸附法：将酶分子吸附在载体的表面上。注：酶更适合采用化学结合法和物理吸附法固定，而细胞多采用包埋法固定。这是因为细胞个大，而酶分子很小，个大的细胞难以被吸附或结合，而个小的酶容易从包埋材料中漏出。3.固定化细胞常用的载体材料 常用的载体有明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。4.固定化酶的优点：（1）易接触；（2）易分离；（3）反复利用。考点六、DNA的粗提取与鉴定1.原理、方法和目的基本原理方法目的DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低溶于NaCl溶液中并稀释NaCl溶液为2 mol/L时，DNA
11、溶解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质当NaCl溶液稀释至0.14 mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl中的部分蛋白质和其他杂质DNA不被蛋白酶所水解加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质DNA不溶于酒精溶液加入冷却酒精（95%）DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质DNA可被二苯胺染成蓝色加入二苯胺，并沸水浴鉴定DNA2.实验材料（1）动物（2）植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。 人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核,也没有DNA，不适于作DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。 3.鉴定 比较加入物质结果图示实验组均加入：4
12、mL二苯胺试剂2 mol/LNaCl溶液5 mL丝状物(DNA)溶液逐渐变蓝对照组不变蓝 4.注意事项制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠，静置后上层是血清，下层为所需要的血细胞。两次加蒸馏水的目的不同。鉴定DNA时需沸水浴加热。 考点七 PCR扩增技术和DNA复制的比较 DNA复制PCR扩增技术场所细胞核内生物体外原理碱基互补配对碱基互补配对酶DNA聚合酶、解旋酶耐热的DNA聚合酶（Taq酶）条件模板、ATP、引物链（RNA）、常温模板、ATP、引物链（DNA及RNA片段）、温度变化（909555607075）原料四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸特点形成的是整个DNA分子，一个细胞周期
13、只复制一次短时间内形成大量目的基因DNA片段，呈指数增长2n 考点八、血红蛋白的提取和分离1.蛋白质分离的依据 蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等，可以用来提取和分离不同种类的蛋白质。 2.方法及原理（1）凝胶色谱法原理 蛋白质比较相对分子质量大相对分子质量小凝胶内部不能进入能进入运动方式垂直向下垂直向下和无规则扩散运动经过路程较短较长洗脱次序先流出后流出 凝胶色谱柱的直径大小不影响分离效果，但直径过大造成洗脱液体积大，样品稀释度大；凝胶色谱柱的高度与分离度有关。（2）凝胶电泳法原理凝胶电泳法的原理是不同蛋白质的带电性质、电量
14、、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。 考点九、蒸馏、压榨和萃取三种方法的比较提取方法水蒸气蒸馏压榨法有机溶剂萃取实验原理利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来通过机械加压,压榨出果皮中的芳香油使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发溶剂后就可获得芳香油方法步骤（1）水蒸气蒸馏（2）分离油层（3）除水过滤（1）石灰水浸泡、漂洗（2）压榨、过滤、静置（3）再次过滤（1）粉碎、干燥（2）萃取、过滤（3）浓缩适用范围适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取适用范围广，要求原料的颗粒要尽可能细小，能充分浸泡在有机溶液中优点简单易行，便于分离生产成本低，易保持原料原有的结构和功能出油率高，易分离局限性水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题分离较为困难，出油率相对较低使用的
