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1、广藿香对湿阻中焦证大鼠胃肠功能的影响摘要 ?榱颂教止戕较愣杂谑?阻中焦证大鼠胃肠功能的影响及其作用机制。通过对湿阻中焦证大鼠的胃内残留率、小肠推进率、胃液量、胃液酸度和胃蛋白酶的测定以及对胃肠组织形态的观察，评价广藿香对胃肠功能的影响；采用ELISA法检测湿阻中焦证大鼠血清中胃肠激素MTL，GAS，VIP及血清细胞因子TNF-，IL-10的浓度，实时荧光定量PCR技术检测大鼠胃和结肠组织中水通道蛋白AQP3，AQP4，AQP8的表达，探究广藿香对于胃肠功能产生影响的作用机制。结果表明，中、高剂量广藿香（3.24，6.48 g?kg-1）可以明显降低大鼠的胃内残留率，促进胃排空，增加小肠推进率（
2、P0.05），加快胃肠推进运动，增加胃液的分泌和酸度，提高胃蛋白酶的活性，改善胃肠道损伤；不同剂量的广藿香可以升高血清中MTL和GAS的浓度，降低 VIP，TNF-，IL-10 的浓度，下调胃和结肠AQP3的表达，上调结肠AQP4和AQP8的表达，中、高剂量的广藿香调节效果较好。所以广藿香可能通过调节胃肠激素、炎症细胞因子和水通道蛋白的水平达到保证胃肠功能正常的目的，该研究结果为阐明采用芳香化湿药治疗湿困中焦、运化失职适应证的作用机制奠定了基础。 /1/view-13013762.htm关键词 广藿香； 湿阻中焦证； 胃肠功能； 作用机制Abstract To investigate the
3、effects of Pogostemon cablin（patchouli） on gastrointestinal function of rats with the syndrome of damp retention in middle-jiao， and explore its therapeutic mechanism. In this study， gastrointestinal function of rats with the syndrome of damp retention in middle-jiao was evaluated by multiple assays
4、 including gastric remnant rate， small intestine propelling rate， gastric juice quantity， pepsin activity and gastrointestinal tissue morphology. ELISA was used to detect gastrointestinal hormones including MTL， GAS， VIP and cytokines including TNF- and interleukin 10 in rat serum. Real-time fluores
5、cent quantitative PCR technique was used to detect relative mRNA expression of AQP3， AQP4 and AQP8 in gastric and colonic tissues to explore the mechanism of P. cablin in treatment of gastrointestinal functions. The results showed that middle and high dose of P. cablin （3.24， 6.48 g?kg-1） could obvi
6、ously decrease the gastric remnant rate， promote gastric emptying， increase the small intestine propelling rate（P0.05）， speed up the propulsive movement of gastrointestinal tract， increase the secretion and acidity of gastric juice， increase the activity of pepsin， and improve the injury of gastroin
7、testinal tissue. All the doses of P. cablin could increase the concentration of MTL and GAS in serum， reduce the concentration of VIP， TNF- and IL-10 in serum， decrease the mRNA expression of AQP3 in gastric and colonic tissues， and increase the expression levels of AQP4 and AQP8 in colonic tissues.
8、 The regulatory effects were better in middle and high dose groups. In conclusion， regulation of the levels of gastrointestinal hormones， inflammatory cytokines and aquaporins may be the paths for P. cablin to maintain normal gastrointestinal function of rats with the syndrome of damp retention in m
9、iddle-jiao. The results of the study laid a foundation for clarifying the treatment mechanism of aromatic damp-resolving drugs for indications including damp retention in middle-jiao and transformation failure of spleen. Key words Pogostemon cablin； syndrome of damp retention in middle-jiao； gastroi
10、ntestinal function； action mechanism广藿香为芳香化湿药，是唇形科刺蕊草属广藿香Pogostemon cablin （Blanco） Benth.的干燥地上部分，味辛，性微温，归脾、胃、肺经，具有芳香化浊、和中止呕、发表解暑的作用，主治湿浊中阻，脘痞呕吐，暑湿表证，湿温初起，发热倦怠，胸闷不舒，寒湿闭暑，腹痛吐泻，鼻渊头痛等1。传统中药理论认为芳香化湿药气味芬芳，能化湿辟浊，振奋脾胃，鼓舞胃气，湿困中焦、运化失职是本类药物的主要适应证。为了探讨广藿香对于湿阻中焦证大鼠胃肠功能的影响及其药理学作用机制，本研究通过广藿香对湿阻中焦证大鼠的胃内残留率、小肠推进率、胃
11、液量、胃液酸度和胃蛋白酶以及胃肠组织形态的影响，研究其对胃肠功能的影响；采用酶联免疫吸附双抗体夹心法（ELISA）检测湿阻中焦证大鼠血清中胃肠激素：胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）、血管活性肠肽（VIP）及血清细胞因子TNF-（肿瘤坏死因子-）、IL-10（白细胞介素-10）的浓度，实时荧光定量PCR技术检测大鼠胃和结肠组织中水通道蛋白AQP3，AQP4，AQP8的表达，旨在探究广藿香对于胃肠功能产生影响的作用机制，为科学地指导中医临床用药奠定基础。1 材料1.1 仪器RM2235石蜡切片机（德国Leica公司）；Nikon E800u生物显微镜（日本Nikon公司）；MultiSkan F
12、C酶标仪（美国Thermo Scientific公司）；Centrifuge 5417R高速冷冻离心机（德国Eppendorf公司）；ABI7500实时荧光定量PCR仪（美国应用生物系统公司）；DU730分光光度计（美国Beckman公司）。1.2 药物与试剂广藿香（广东省肇庆市德庆县德鑫农业发展有限公司，批号20151128）；猪油、蜂蜜、伊利全脂奶粉（上海联华超市）；牛血红蛋白（大连美仑生物技术有限公司，批号J0413A）；苏木素伊红染色试剂盒、封片液（上海碧云天生物技术有限公司）；RNA 提取试剂盒、SuperScriptTM First-Strand Synthesis SuperMi
13、x for qRT-PCR逆转录试剂盒、SYBR GreenERTM qPCR SuperMix Universal（美国Invitrogen公司）；大鼠血清MTL，GAS，VIP，TNF-，IL-10测定用ELISA试剂盒（上海钰森生物技术有限公司）；其他试剂均为分析纯，购自上海国药集团化学试剂有限公司。1.3 动物SD大鼠，雌雄各半，体质量（20020） g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号SYXK（沪）2014-0008。2 方法2.1 药物的制备2.1.1 广藿香提取液的制备 称取广藿香饮片，置于圆底烧瓶中，加入10倍量水浸泡0.5 h，圆底烧瓶上面连接挥发油提取器，采用“
14、双提法”提取，至挥发油不再增加，收集挥发油，将水提取液滤过、浓缩，挥发油用聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯（吐温-80）分散，加入水提取液中，充分混合，摇匀，得生药0.648 g?mL-1提取液，加入等体积蒸馏水依次稀释，得到广藿香低、中、高质量浓度的提取液0.162，0.324，0.648 g?mL-1，备用。2.1.2 半固体营养米糊的制备 称取羧甲基纤维素钠10 g，溶于250 mL蒸馏水中，加入奶粉16 g、葡萄糖4 g、淀粉8 g、活性炭粉末4 g，搅拌均匀，制成约300 mL黑色半固体糊状物（约1 g?mL-1），4 冷藏备用。2.2 大鼠湿阻中焦证造模方法2-3取SD健康大鼠，雄雌各半
15、，?S机分为正常组、模型组、广藿香低、中、高剂量组。除正常组外，其余组的大鼠每日定时放入水深25 cm、水温2730 的水桶中游泳15 min，游泳完毕，立即按照25 mL?kg-1体质量，第1，3，5，7天灌胃猪油，第2，4，6天灌胃30%蜂蜜，造模大鼠置于每个装有150 g垫料用600 mL水洒湿并用塑料薄膜覆盖鼠盒中喂养，正常组在正常环境中喂养。从第8天开始，造模大鼠移至正常环境中喂养，给药组每天给予低、中、高剂量广藿香提取液（1.62，3.24，6.48 g?kg-1，相当于人临床等效剂量的2，4，8倍），正常组和模型组灌胃等容积蒸馏水，至12 d结束实验。在整个实验过程中，观察记录动
16、物的精神状态、活动、大便、进食与饮水量及体质量变化。2.3 对湿阻中焦证大鼠胃肠运动的影响取SD健康大鼠，随机分组，每组8只，按照2.2项下方法造模，第12天给药后禁食不禁水18 h，正常组和模型组灌胃等容积蒸馏水，给药组给予低、中、高不同剂量的广藿香提取液，给药1 h后，灌胃2.1.2项下的半固体营养米糊，30 min后脱颈处死大鼠，剖开腹腔，结扎幽门及贲门，剪取胃，用滤纸拭干称重，然后沿胃大弯剪开，洗净胃内容物，滤纸拭干后再次称重，胃全重与胃净重之差即为胃内残留物重，胃内残留物重与灌胃半固体米糊重的百分比为胃内残留率（%）。将大鼠的小肠不加牵引地放于平面上，测定幽门至回盲部的全长及幽门至炭末前端的距离，半固体米糊推进的长度与小肠全长的百分比为小肠推进率（%）。2.4 广藿香对湿阻中焦证大鼠胃液量、胃液酸度和胃蛋白酶的影响2.4.1 样本采集 取SD健康大鼠，随机分组，每组8只，按照2.2项下方法造模，第12天给药后禁食不禁水18 h，各组
