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1、T NAIA 0001 2020 ICS 13 080 30 B10 团团体体标标准准 T NAIA 0001 2020 土壤微生物量氮的测定土壤微生物量氮的测定 2020 XX XX 发布2020 XX XX 实施 宁夏化学分析测试协会宁夏化学分析测试协会发发 布布 T NAIA 0001 2020 前 言 本标准按照GB T 1 1 2009 标准化工作导则 第1部分 标准的结构和编写 规定编写 本标准由宁夏昊标检测服务研究院 有限公司 提出 本标准由宁夏化学分析测试协会归口 本标准起草单位 宁夏昊标检测服务研究院 有限公司 宁夏大学 宁夏农林科学院 荒漠所 宁夏化学分析测试协会 本标准主
2、要起草人 王京 白玲 任亚丽 马晓瑞 刘鸿翔 刘辉 俞鸿千 张小飞 刘娜娜 本标准于2020年XX月XX日首次发布 T NAIA 0001 2020 土壤微生物量土壤微生物量氮的测定氮的测定 1 范围 本标准规定了土壤微生物量氮的测定方法 本标准适用于各类土壤微生物量氮的测定 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的应用文件 仅注日期的版本适 用于本文件 凡是不住日期的引用文件 其最新版本 包括所有的修改单 适用于本文件 GB T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY T 1121 1 土壤检测 第一部分 土
3、壤样品的采集 处理和贮存 3 原理 新鲜土样经氯仿熏蒸 24 h 后 土壤微生物死亡细胞发生裂解 释放出微生物量氮 用 硫酸钾溶液提取微生物量氮 测定提取液中氮含量 根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤氮含量的差 值及转换系数 计算土壤微生物量氮 4 试剂和溶液 除非另有说明外 本方法均使用符合国家标准的分析纯试剂 分析用水为 GB T 6682 规 定的三级水 4 1 氯仿 CHCl3 4 1 1 去乙醇氯仿制备 市售氯仿一般含有少量乙醇作为稳定剂 使用前须将乙醇去除 方法是量取适量的氯仿 和二级水按 1 2 的比例置入分液漏斗中 充分震摇 1 min 并静置分层后 慢慢放出底层氯仿 于干燥的烧杯中 重
4、复洗涤 3 次 得到无乙醇氯仿 向其中加入无水氯化钙 以除去氯仿中 的水分 纯化后的氯仿置于暗色试剂瓶中 在 4 黑暗条件下保存 注意 氯仿具有致癌作用 所有操作必须在通风橱中进行 4 2 氢氧化钠 NaOH 4 3 硫酸钾 K2SO4 4 4 硫酸铜 CuSO4 4 5 硼酸 H3BO3 T NAIA 0001 2020 4 6 浓硫酸 H2SO4 4 7 甲基红指示剂 C15H15N3O2 4 8 溴甲酚绿指示剂 C21H14BrO5S 4 9 氢氧化钠溶液 1 mol L 称取 40 g 精确至 0 01 g 氢氧化钠用水溶解 定容至 1000 mL 4 10 硫酸钾浸提剂 0 5 mo
5、l L 称取 174 26 g 精确至 0 01 g 硫酸钾 用研钵磨成粉末 倒于 2 5 L 塑料桶中 加水 2 L 盖紧螺旋盖置于摇床 150 r min 至完全溶解 4 11 氢氧化钠溶液 400 g L 称取 400 g 精确至 0 01 g 氢氧化钠加水溶解 定容至 1 L 4 12 硼酸溶液 20 g L 称取 20 g 精确至 0 01 g 硼酸加水溶解 定容至 1 L 4 13 硫酸标准溶液 0 02 mol L 准确移取 5 56 mL 浓硫酸缓缓注入 800 mL 水中 用水定容至 1000 mL 配制成浓度为 0 1 mol L 的硫酸标准溶液 按照 GB T 601 对
6、其进行标定 将此溶液用水稀释 5 倍得到 0 02 mol L 的硫酸标准溶液 4 14 指示剂 称取 0 1 g 精确至 0 0001 g 甲基红和 0 5 g 精确至 0 0001 g 溴甲酚绿指示剂放入 玛瑙研钵中 加入 100 mL 95 乙醇研磨溶解 5 仪器设备 5 1 电子天平 感量 0 0001g 和 0 01g 5 2 真空泵 5 3 恒温培养箱 25 1 5 4 凯氏定氮仪 5 5 摇床 25 150 r min 300 r min 6 测量步骤 6 1 土壤前处理 新鲜土壤应立即处理或保存于 4 冰箱中 测定前先仔细除去土壤中可见植物残体 如 根 茎和叶 及土壤动物 如蚯
7、蚓等 过 2 mm 孔径筛并混匀 如果土壤过湿 应在室内适当 风干 并经常翻动 以避免局部干燥 至土壤含水量约为田间持水量的 40 以手感湿润 疏松但不结块为宜 如果土壤过于干燥 用蒸馏水调节含水量至田间持水量的 40 将 土壌置于密封的塑料桶内 在 25 1 下预培养 7 15 d 桶内有适量水以保证相对湿度 T NAIA 0001 2020 为 100 并在桶内放一小烧杯 1 mol LNaOH 溶液以吸收土壌呼吸产生的 CO2 这些过程是 为了消除土壤水分限制对微生物的影响以及植物残体对测定的干扰 经预培养的土壤应立即 分析 否则 应置于 4 下保存 且分析前需在上述条件下至少再培养 2
8、4 h 6 2 熏蒸 称取经前处理相当干 50 g 精确至 0 01 g 烘干基的新鲜土壤 3 份 置于 100 mL 烧杯 中 将烧杯放入真空干燥器中 同时放入盛有去乙醇氯仿 约 2 3 烧杯 的烧杯 2 3 个 烧杯内放入少量经浓盐酸溶液浸泡过夜后洗涤烘干的瓷片 0 5 mm 大小 防瀑沸 或放入 抗瀑沸的颗粒 同时放入一小烧杯 1 mol LNaOH 溶液以吸收熏蒸期间释放出来的 CO2 干燥 器底部还应加入少量水以保持湿度 用真空泵抽真空 在 0 07 MPa 真空度下使氯仿剧烈沸 腾 3 5 min 关闭真空干燥器阀门 于 25 1 黑暗条件下熏蒸 24 h 打开干燥器阀门 时 由于
9、空气进入应该能听见有明显嘶嘶的声音 否则 意味着抽真空不够或漏气 应重新 进行熏蒸 取出土壤和氯仿 氯仿倒回贮存瓶 可再使用 将装土壤的烧杯转入清洁真空干燥器 中 反复抽真空 0 07 Ma 直到土壌无氯仿味为止 否则 残留在土壤中的氯仿将影响分 析结果 一般需要反复抽真空 5 6 次 每次 3 min 每次抽真空后最好完全打开干燥器 以 加快去氯仿速度和效果 在熏蒸的同时 另称取等量的土壤 3 份 置于另一干燥器中 除不加氯仿进行熏蒸外 其他操作与熏蒸土壤一样 作为对照土壤 6 3 浸提 将熏蒸后的土壤无损转移到 200 mL 聚乙烯塑料瓶中 加入 100 mL 0 5 mol L 硫酸钾浸
10、 提剂 4 10 使土水比为 1 2 土壤为质量单位 g 浸提液为体积单位 mL 振荡 25 300 r min 浸提 30 min 用中速定量滤纸过滤于 100 mL 塑料瓶中 另称取等量的 3 份对 照土壤于 200 mL 聚乙烯浸提塑料瓶中 加入 100 mL 0 5 mol L 硫酸钾浸提剂 4 10 同 上浸提 同时做 3 个不加土壤的试剂空白 过滤后的浸提液应立即分析 或在 18 下保存 6 4 消化 取 10 0 mL 浸提液 解冻的浸提液在取样前应彻底混匀 于 250 mL 消化管中 加入 0 100 g 硫酸铜 5 mL 浓硫酸 于电炉上消化 混合液消化变清后再回流 3 h
11、6 5 测定 按说明书检查凯氏定氮仪 空蒸 15 min 洗管道 消化结束后 冷却 接在蒸馏装置上 将一三角瓶接在冷凝管的下端 并使冷凝管浸在三角瓶的液面下 三角瓶内盛有 25 mL 20 g L 硼酸吸收液 4 12 和指示剂 4 14 3 滴 然后向消化管缓缓加入 35 mL 400 g L 氢氧化 钠溶液 4 11 蒸馏 5 min 用少量蒸馏水冲洗冷凝管的下端 洗入三角瓶中 用 0 02 mol L 硫酸标准液 4 13 滴定 溶液由蓝色变为酒红色时即为终点 记下消耗标准硫酸溶液的毫 升数 7 结果计算 样品中氮含量以克每千克 g kg 表示 按式 1 计算 2 01 100 1000
12、 014 0 Vfm cVV N 1 T NAIA 0001 2020 式中 N样品中氮的含量 单位为克每千克 g kg V1滴定样品时消耗硫酸标准溶液的毫升数 单位为毫升 mL V0滴定空白时消耗硫酸标准溶液的毫升数 单位为毫升 mL C硫酸标准溶液的摩尔浓度 单位为摩尔每升 moL L 0 014氮原子的毫摩尔质量 单位为克每毫摩尔 g mmol M称取试样的质量 单位为克 g F土壤水分系数 V2用于测定的浸提液体积 单位为毫升 mL 土壤微生物量氮 按式 2 计算 kEcBc 2 式中 Bc样品中微生物量氮的含量 单位为克每千克 g kg Ec熏蒸土壤浸提测定的氮含量 不熏蒸土壤浸提测定的氮含量 单位为克每千克 g kg K转换系数 取值 0 45 结果保留三位有效数字 8 精密度 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10
