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1、学校代码：10226（大庆）毕业论文 论文题目：大庆地区马齿苋中黄酮类化合物含量测定方法的研究 所在院系： 药学院 专 业： 中药学 年 级： 2009级 学 号： 0914120222 姓 名： 杨璐铭 指导教师： 韩成花 实习单位： 哈尔滨医科大学大庆校区药学院 起止日期： 20 年 月 至 20 年 月 20 年 月 日目 录中文摘要1Abstract2一 前言（一） 马齿苋植物学研究（二） 马齿苋药动学研究 （三） 槲皮素和山奈酚含量分析的研究进展二 材料与方法（一） 材料1.仪器2.试剂（二） 方法1.测定方法的比较2.AlCl3显色法的线性关系考察3.HPLC法的线性关系考察三 结
2、果与讨论11 （一）) 测定方法的比较111.样品的制备112.直接扫描法3.AlCl3显色法11 4.NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法 （二） AlCl3显色法的方法学考察 （三） HPLC法的方法学考察四 结论15致谢16参考文献17中文摘要除了高效液相的内容以外，比色法的内容也补上去。 本实验旨在研究马齿苋中黄酮类化合物含量测定的方法，为更好的开发利用马齿苋提供依据。采用美国安捷伦Agilent 1200 Series高效液相色谱仪等度洗脱，EclipseXDB-C18150x4.6mm,5umcolumnP/N993967-902为色谱柱，甲醇-0.2%磷酸为流动相，流速1.0
3、ml/min，测定波长360nm。 槲皮素进样浓度在0.4962.48g/ml（r=0.9994）范围内线性关系良好，平均回收率为98.11%，RSD=0.45%（n=6）。山奈酚进样浓度在0.4482.24g/ml（r=0.9994）范围内线性关系良好，平均回收率为96.92%，RSD=0.63%(n=6)。该方法准确可靠、重现性好，可用于马齿苋初提液中槲皮素和山奈酚的含量测定。关键词：槲皮素；山奈酚；HPLC；等度洗脱The Study on the determination of flavonoid compounds content in purslane in Daqing are
4、aAbstract The purpose of this experiment is to study method for the determination of flavooids content in purslane, provide the basis for the development and utilization of Portulaca oleracea better. By the United States of America Agilent Agilent 1200 Series high performance liquid chromatography w
5、ith isocratic elution, EclipseXDB-C18150x4.6mm, 5umcolumnP/N993967-902 column, methanol -0.2% phosphoric acid as the mobile phase, flow rate 1.0ml/min, the detection wavelength of 360nm. Quercetin sampling concentration from 0.496 to 2.48 g/ml (r=0.9994) the linear range, the average recovery was 98
6、.11%, RSD=0.45% (n=6). Kaempferol sampling concentration from 0.448 to 2.24 g/ml (r=0.9994) the linear range, the average recovery was 96.92%, RSD=0.63% (n=6). The method is accurate and reliable, reproducible, and can be used for purslane initial content of quercetin and kaempferol in the determina
7、tion of liquid.Keywords :Quercetin; kaempferol; HPLC; isocratic elution一 前言前沿指的是综述，除了下面你写的内容以外，还应该有关于国内外黄酮类化合物含量测定方法的研究，还有写的标题与内容不符，如：植物学研究的内容、药动学研究等（1） 马齿苋植物学研究 马齿苋（purslane herb）这个再重新查一下，种名属名是斜体。为马齿苋科植物马齿苋的干燥地上部分，又名长寿菜、五行草、蚂蚱菜等。全草均可入药，夏、秋采收，除去杂质和残根，洗净，略蒸或烫后晒干。马齿苋资源丰富，分布于我国各地方。 马齿苋性寒，味酸，具有清热解毒、凉血止痢
8、之功效，在治疗湿疹，丹毒，蛇虫咬伤，热毒血痢，崩漏下血等方面有广泛的应用。 图1.马齿苋 图2.中药马齿苋 （二） 马齿苋药动学研究 现代药理学研究证明马齿苋具有抑制肿瘤和预防心脏病之作用，其含有的黄酮类化合物能够降血脂、抗氧化、增强胰岛素抵抗。槲皮素、山奈酚是植物中常见的黄酮类化合物。 （三）槲皮素及山奈酚的研究进展 进来的研究显示，植物界分布最广泛的黄酮类化合物包括槲皮素（图3）及其衍生物，享有“最强的抗癌剂之一”的称号，有着化学预防和治疗肿瘤的双重功效，对多种促癌剂、致癌剂有拮抗作用，且能抑制多类恶性肿瘤细胞生长；山奈酚（图4）能保护神经细胞、抑制蛋白激酶和逆转肿瘤细胞多药耐药性。其他文
9、献报道的主要是测定马齿苋中总黄酮的含量，如选用超声法和回流法，萃取马齿苋中的槲皮素和山奈酚。还有实验采用高效液相色谱法分析马齿苋中黄酮类化合物的含量。由于槲皮素和山奈酚能溶于甲醇，所以在选择提取溶剂时，选择了甲醇。因此，需要建立了一种同时测定马齿苋中槲皮素和山奈酚的方法。通过直接扫描法，AlCl3显色法,HPLC法，NaNO2-Al(NO3)3-NaOH四种方法的比较，最终拟定了HPLC等度洗脱方法，得到较好的分析效果，并且可同时测定同一个样品中槲皮素和山奈酚的含量。 图3.槲皮素 图4.山奈酚 高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送；色谱柱是
10、以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。其特点为高压、高效、高速、高灵敏度、适用范围宽。 根据分离机制的不同，高效液相色谱法可分为液-液分配色谱法、液-固色谱法、离子交换色谱法、离子对色谱法等。 高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、反相高效液相色谱、疏水性高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液相层析的原理相似。其不同之处是高效液相色谱灵敏、快速、分辨率高、重复
11、性好，且须在色谱仪中进行。 图5.HPLC色谱仪 二 材料与方法（一） 材料1.仪器表1.实验所用主要仪器表格为三线表，上下框1.5磅，中间线0.5磅）仪器名称型号产地与产家紫外-可见分光光度计索氏提取器超声波振动器C3860上海超声仪器厂电子分析天平FA-1004上海精科天平厂高效液相色谱仪Agilent 1200 Series美国安捷伦2.试剂 表2.实验所用主要试剂主要试剂规格生产厂家石油醚AR天津市大茂化学试剂厂甲醇色谱纯天津市科密欧化学试剂有限公司水纯净水杭州娃哈哈有限公司磷酸AR天津市大茂化学试剂厂马齿苋1采摘自大庆地区槲皮素标准品2山奈酚标准品3（2） 方法 1.测定方法的比较（
12、1）样品的制备 取马齿苋粉末约1g，置索氏提取器中，加石油醚约140ml，提取2h至无色，弃去石油醚，药渣挥去石油醚置锥形瓶中，加入甲醇30ml，超声提取两次，每次40min,超声功率70w，频率20kHZ，温度60，滤过，转移至100ml量瓶中，加甲醇至刻度，精密量取1ml至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，过0.45m微孔滤膜，即得。 对照品的制备取芦丁，槲皮素及山奈酚标准品适量，加甲醇制成0.05mg/ml的对照品溶液，即得。（2）直接扫描法 取适量芦丁，槲皮素，山奈酚对照品溶液及样品溶液，以甲醇空白为参比，依次在200-00nm范围内扫描。（3）AlCl3显色法 取芦丁，槲皮素，山奈酚对照
13、品溶液和样品溶液各2ml,分别置于25ml量瓶中，各加1%的AlCl3溶液4ml,用H2O稀释至刻度，使混匀，静置10min后，用试剂空白为参比，在200-600nm范围内扫描。（4）NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法 精密吸取芦丁对照品溶液及样品溶液各3ml,各置于25ml量瓶中，分别加水至6ml,加5%NaNO2溶液1.0ml,摇匀，静置6min，加10%Al(NO3)3溶液1.0ml,使混匀，静置6min,加10%NaOH溶液10ml,加水至刻度，混匀，静置10min,用试剂空白作参比，在200-600nm范围内扫描。 2.AlCl3显色法的线性关系考察（1）标准曲线的绘制 将槲皮素配成6.24g/ml的对照品溶液，依次取0.25ml、0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml分别置于25ml量瓶中，依次加1%AlCl3溶液4ml,用水定容至刻度，使混匀，静置10min后，用试剂空白作参比，在420nm处测吸光度。以吸光度（A）与浓度（C）做出
