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1、实验二温度 pH值 激活剂和抑制剂对酶活性的影响及特异性 一 实验目的 1 通过实验 观察温度 pH值 激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响 2 能运用所学的生化知识对实验结果进行正确的分析 二 实验原理 利用淀粉及其水解产物的颜色反应 来比较唾液淀粉酶在不同条件下催化淀粉水解的程度 从而判断温度 pH 激动剂和抑制剂对酶的活性影响 二 实验原理 在低温时 酶活性降低 酶促反应速度较慢 甚至停止 随着温度升高 酶的活性恢复 反应速度加快 当达到最适温度时 酶的活性最大 酶促反应速度达到最大 人体内大多数的酶的最适温度在37 左右 温度过高 酶变性失活 酶促反应速度下降 甚至停止 每种酶都有最适的
2、pH值 在最适pH值时 酶的活性最大 酶促反应速度最快 偏离酶的最适pH均可引起酶蛋白变性而降低或失去活性 唾液淀粉酶的最适pH值为6 8 氯离子对唾液淀粉酶有激活作用 铜离子对唾液淀粉酶有抑制作用 三 实验材料 1 1 淀粉溶液取可溶性淀粉1g 加5ml蒸馏水 调成糊状 再加80ml蒸馏水 加热并不断搅拌 使其充分溶解 放冷 最后用蒸馏水稀释至100ml 2 pH3 0缓冲液取0 2mmol LNa2HPO4溶液205ml 0 1mol L柠檬酸溶液795ml 混合即成 3 pH6 8缓冲液取0 2mmol LNa2HPO4溶液772ml 0 1mol L柠檬酸溶液228ml 混合即成 4
3、pH8 0缓冲液取0 2mmol LNa2HPO4溶液972ml 0 1mol L柠檬酸溶液28ml混合即成 5 0 9 NaCl溶液6 1 CuSO4溶液7 碘液9 试管架11 试管夹12 滴管13 白瓷板14 恒温水浴箱15 电炉16 烧杯 注意事项 1 注意实验器材的干净 避免杂质影响反应结果2 各管反应时间应严格控制 保证一致 四 实验方法 稀释唾液制备用水漱口 含蒸馏水咀嚼2分钟后 把唾液吐进烧杯中备用 注 唾液淀粉酶活性具有个体差异 按下述各实验方法进行实验 有部分同学可能失败 可重新操作 但在重做过程中 要根据第一次实验结果改变稀释唾液的用量 反应太慢 则增加稀释唾液用量 如果反
4、应太快 则减少稀释唾液的用量 煮沸唾液的制备取上述唾液约5ml 放入沸水中煮沸5分钟 取出备用 一 温度对酶促反应速度的影响 取白瓷板一块 向各凹分别加1滴碘液 每隔半分钟用滴管或玻棒从2号管取溶液1滴 加到已加有碘液的小凹中 观察颜色变化 直至与碘不呈色时 即只显棕黄色时 向各管加碘液1滴 摇匀观察颜色变化 切记勿摇动 摇匀再观察 二 pH对酶促反应速度的影响 将各管混匀 放进37 水浴箱中保温 取白瓷板一块 向各凹分别加1滴碘液 每隔半分钟用滴管或玻棒从2号管取溶液1滴 加到已加有碘液的小凹中 观察颜色变化 直至与碘不呈色时 即只显棕黄色时 向各管加碘液1滴 摇匀观察颜色变化 三 激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响 将各管摇匀 放进37 水浴箱中保温 取白瓷板一块 向各凹分别加1滴碘液 每隔半分钟用滴管或玻棒从2号管取溶液1滴 加到已加有碘液的小凹中 观察颜色变化 直至与碘不呈色时 即只显棕黄色时 向各管加碘液1滴 摇匀 观察各管颜色变化 激活剂与抑制剂 激活剂与抑制剂 五 思考题1 什么是酶的最适温度 2 什么是酶的最适pH 3 激活剂与抑制剂对酶活性影响实验中设置第四管的作用是什么 4 什么是酶的特异性 四 酶的专一性对酶促反应的影响 2 混匀 37 水浴10min 分别加入班氏试剂20滴 3 各管摇匀置于沸水煮沸8 10min 观察结果并记录 酶的专一性
