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1、实验四浮游植物采集和定量 一 实验目的 1 掌握浮游植物采集 浓缩的常用方法 2 了解浮游植物计数框的结构 学习 掌握浮游植物计数的方法 二 实验原理 应用显微镜的成像原理 并借助浮游植物计数框 计算单位体积浮游植物的数量 三 实验仪器 用品 广口瓶 乳胶管 医用输液管 浮游生物网 量筒 鲁哥氏液 碘液 甲醛 标签纸 光学显微镜 100 l移液枪 浮游植物计数框 调查工具 1 采水器 2 浮游生物网 采用特种尼龙布制成 网口圆形 网底呈圆锥状开口 网底开口处扎系开关阀门 定性样品采集 针对浮游植物 原生动物和轮虫等 采用25 浮游生物网 网孔0 064mm 枝角类和挠足类等浮游动物采用13 浮
2、游生物网 网孔0 112mm 在表层中拖滤1 3min 3 透明度盘4 广口瓶 标本瓶 4 浮游植物定量 5 浮游动物定量 四 实验内容 1 采样点的选择 海洋采样点的选择应与环境监测站相一致 或根据污染 赤潮发生范围等确定采样点 2 采样层次 采水量及采样次数 水深15m以内的浅海 采表 水下0 5m 底两层 水深大于15m 采表 中 底 距底0 5m 三层 可分层采水 也可以各层采水等量混合采得1000ml水样后装入广口塑料瓶 应立即加入10 15ml碘液 即鲁哥氏液 固定 每一瓶都应有标签标明时间 地点 站号 样品号 采水量 水层 温度等 采样次数 可以每月一次 一般每季度采样一次 最少
3、要春季和夏末秋初各采一次 鲁哥氏液配置方法 将6克碘化钾溶于20ml水中 待其完全溶解后 加入4克碘充分摇动 待碘全部溶解后定容到100ml 固定浓度为1L水样加10 15ml鲁哥试剂 定量样的采集 四 实验内容 3 定量样品沉淀与浓缩所采水样摇匀后倒入沉淀器中静置 使浮游植物完全沉淀 沉淀是一种圆柱形分液漏斗 如无沉淀器也可用量筒 烧杯或在原水样瓶中静置沉淀 静置沉淀24 48h后 再用乳胶管或橡皮管 医用输液管 利用虹吸原理小心地抽出上部不含藻类的清液 一般约剩下20 40ml沉淀物转入30或50ml的定量瓶中 用上述清液冲洗沉淀器2 3次 洗液仍倒入定量瓶中使水量恰好达到30或50ml
4、然后贴上标签 标签上要记载采集时间 地点 采水量 站号 样品号 水层和温度 四 实验内容 3 沉淀与浓缩虹吸动作要十分仔细 小心 开始时虹吸管一端放在沉淀器内约三分之二处 另一端套接在已经用手挤压出空气的橡皮球上 然后轻轻松手并移开橡皮球使清液流出 为了避免漂浮水面的一些微小藻类进入虹吸管而被吸走 管口应始终低于水面 虹吸管内清液的活动不宜过快 可用手指轻捏管壁以控制流量 当吸到原水样的3 5以上时 应使清液一滴一滴地流下 吸出的清液要用一洁净的器皿装盛 以便在浓缩过程在出故障时 可重新倒入沉淀器中浓缩 不必新采水 将样品倒入量筒中沉淀浓缩 直接在广口瓶中浓缩 但要确定体积 4 浮游植物定性
5、浮游植物样品采集参照文献 国家环保总局 2002 的方法 定性样品用孔径约0 064mm的25号浮游生物网在水面下约0 5m处以适当的速度作 字形来回拖动1 3min 获得的浓缩样分为两份 一份立即用适量的鲁哥氏液固定 另一份活体样品于24小时内镜检 5 计数 计数一定体积内的浮游植物种类和数量 显微镜计数方法选择 采用行格法或镜头法 确定计数行格和镜头内的浮游植物种类和数量 行格法一般每片计数3 5 8行 列中的植物 镜头法必须确定观察镜头 即视野光圈 的直径 面积 通过随机移动镜头 计数所有镜头内的藻类 行格法按照计数玻片上的格子确定技术范围 玻片样品池长x宽 20mmx20mm 即每列长
6、x宽 20mmx2mm计数水样体积 0 001mlx计数格数 镜头法需量测量镜头的直径d 实验室目前常用的镜头的视野直径 d1 2000um 10 x 1000um 20 x 500um 40 x d2 1800um 10 x 900um 20 x 450um 40 x 镜头面积 r2 使用的工具有 100 l移液枪 带有0 1毫升刻度的小吸管 容量为0 1毫升的计数框 面积20 20毫米2 和具有移动台的显微镜 用前可浸入70 的酒精中 用时取出 用细绢拭净 计数框用前以薄绸布拭净 用毕以水弄湿后轻拭或用水冲净 取样计数时应注意以下方面 将浓缩沉淀后水样充分摇匀 倒转摇 后 立即用0 1ml
7、吸量管吸出0 1ml样品 注入0 1ml计数框内 小心盖上盖玻片 20 20 2 在盖盖玻片时 要求计数框内没有气泡 样品不溢出计数框 然后在显微镜下计数 在400 600倍的显微镜下观察计数 每个水样标本计数两次 二片 取其平均值 一每片计数100个视野 但具体观察的视野数以样品中浮游植物多少而酌情增减 如果平均每个视野有十几个时 数50个视野就够了 如果平均每个视野有5 6个时 就需数100个视野 如果平均每个视野不超过1 2个时 要数200个视野以上 取样计数时应注意以下方面 每瓶标本计数两片取其平均值 同一样品的两片计算结果和平均数之差应不大于其均数的 15 时 其均数视为有效结果 否
8、则还必须测第三片 直至三片平均数与相近两数之差不超过均数的15 为止 在计数过程中 常碰到某些个体一部分在视野中 另一部分在视野外 这时可规定出在视野上半圈者计数 出现在下半圈者不计数 数量最好用细胞表示 对不宜用细胞数表示的群体或丝状体 应分细胞大小分类计数 计数时记录保持整洁清晰 便于整理计算 应明确记录采样时间 地点 原水样体积 浓缩体积 计数片数和视野数 数横条 最少不少于3条具体可自行掌握 总之不论数视野还是数横条 每片计数到的浮游植物总数应达到200个 低浓度时 500个 高浓度时 以上 同一样品的二片计数结果与其均数之差距如果不大于其均数的 15 这两个相近的值的均数即可视为计数
9、结果 例 计数第一个片为250个 计数第二片为246个则两片的均数为 250 246 2 248均数与第一片之差 248 250 2均数与第二片之差 248 246 2则 2 248 0 0081即 0 81 2 248 0 0081即0 81 因为0 81 10 所以上述相近值的均数应视为计数结果 计算细胞密度的公式 N A Ac Vs V n式中 N为每升 L 原水样中浮游植物数量 A为计数框的面积 mm2 1mm2 Ac为计数面积 mm2 Vs为1L原水样浓缩后的样品体积 ml V为计数框的体积 ml 0 1ml n为计数所得浮游植物数目 图3浮游植物采样 定量流程 作业 1 列表表示各种类浮游植物的数量及数量占总量的百分比 表1浮游植物细胞数量计数记录表标本编号站号层次 m 采水量 L 浓缩体积 ml 计数体积 ml 调查时间 年月日 思考题 1 在浮游植物定量过程中应注意哪些事项
