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1、T NAIA 0004 2020 团团 体体 标标 准准 T NAIA 0004 2020 2020 XX XX 发布 2020 XX XX 实施 宁夏化学分析测试协会宁夏化学分析测试协会 发发 布布 ICS 65 02 B40 瘤胃液中氨态氮浓度的测定瘤胃液中氨态氮浓度的测定 碱性次氯酸钠碱性次氯酸钠 苯酚分光光度法苯酚分光光度法 征求意见稿 征求意见稿 T NAIA 0004 2020 前前 言言 本标准的编写格式符合 GB T 1 1 2009 标准化工作导则 第 1 部分 标准的结构和编写 规定编写 本标准由宁夏化学分析测试协会提出并归口 本标准由宁夏大学 宁夏饲料工程技术研究中心 宁
2、夏兽药饲料监察所 宁夏昊标检测服务 研究院 宁夏化学分析测试协会起草 本标准主要起草人 辛国省 刘辉 卜姣姣 燕翀 杨仪 丁园 高巧仙 武晓宏 谢荣国 张小飞 王京 佐婷婷 本标准于 2020 年 XX 月 XX 日首次发布 T NAIA 0004 2020 瘤胃液中氨态氮浓度的测定 碱性次氯酸钠 苯酚分光光度法 1 1 范围范围 本标准规定了瘤胃液中氨态氮浓度的碱性次氯酸钠 苯酚分光光度测定方法 本标准适用于反刍动物瘤胃液中氨态氮浓度的测定 本方法定量限 0 1mg 100mL 2 2 规范性引用文件规范性引用文件 下列文件中的条款通过在本标准中的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件
3、 其随后所有的修改单 不包括勘误的内容 或修订版均不适用于本标准 然而 鼓励根据本标 准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件 其最新 版本适用于本标准 GB T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB T 602 化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备 3 3 原理原理 在催化剂亚硝酸铁氰化钠存在下 氨与碱性次氯酸钠和酚反应生成蓝色吲哚酚 4 4 试剂与材料试剂与材料 除另有说明外 所用试剂均为优级纯 水为 GB T 6682 规定的一级水 4 1 甲醇 分析纯 4 2 盐酸 分析纯 4 3 亚硝基铁氰化钠 4
4、 4 苯酚 4 5 苯酚显色剂 称取 0 05g 亚硝基铁氰化钠 4 3 用 500mL 蒸馏水溶解 加入 10g 苯 酚 4 4 混合 溶解 用蒸馏水定容到 1L 装入棕色试剂瓶 在 2 10 保存 在避光条 件下可保存 6 个月 4 6 氢氧化钠 4 7 磷酸氢二钠 4 8 次氯酸钠 T NAIA 0004 2020 4 9 碱性次氯酸钠试剂 称取 5g 氢氧化钠 4 6 用 650mL 左右的蒸馏水溶解 加入 37 85g 磷酸氢二钠 4 7 加热溶解 冷却后 加入 50mL 次氯酸钠 4 8 混合 用蒸馏水定 容到 1L 用滤纸过滤 在 2 10 聚乙烯瓶中避光保存 可稳定 6 个月
5、4 10 氯化铵 优级纯 4 11 氨态氮标准溶液 32mg 100mL 称取 0 1005g 氯化铵 4 10 用 80mL 蒸馏水溶解 用 2N 的盐酸将 pH 值调整到 2 用蒸馏水定容到 100mL 此溶液 32mg 100mL 测定前配制成 1 2 4 8 16 和 32mg 100mL 的标准溶液 5 5 仪器和设备仪器和设备 5 1 分析天平 感量 0 0001g 5 2 旋涡混合仪 5 3 紫外分光光度计 5 4 pH 计 5 5 玻璃试管 5 6 容量瓶 50mL 100mL 1000mL 5 7 刻度吸管 5mL 10mL 20mL 5 8 烧杯 500mL 6 6 瘤胃液
6、的采集 处理与保存瘤胃液的采集 处理与保存 瘤胃液的采集在晨饲前进行 方法一般有两种 一种是通过瘤胃瘘管进行采集 另一种 是采用特定的胃管通过食道插入瘤胃进行采集 采集的瘤胃内容物 用 60 目尼龙袋过滤 取滤液 5mL 加入预先加有 5mL 用冰水预冷的甲醇 迅速混匀 置于 20 冰柜中保存 7 7 测定步骤测定步骤 7 1 试样制备 将瘤胃液充分混匀 准确吸取 1mL 瘤胃液 加入 1 5 mL 的离心管中 4 下 12000r min 离心 15 min 取上清液备用 7 2 平行试验 对同一试样进行平行试验测定 7 3 空白试验 随同试样进行空白试验 除不量取样品外 均按瘤胃液样品步骤
7、进行 7 4 测定与显色 吸取备用液 7 1 80ul 加入到玻璃试管中 加入 2 5 mL 苯酚显色剂 混匀 加入 2 0 mL 碱性次氯酸钠溶液 混匀 在 37 下水浴 10 min 取出后室温下放置 10 min 于紫外分光光度计波长 650 nm 处 以试剂空白为参比 测量其吸光度 7 5 标准曲线的绘制 T NAIA 0004 2020 准确移取氨态氮标准溶液 1 2 4 8 16 和 32mg 100mL 各 40ul 加入到预先标好的 玻璃试管中 各管补加 40ul 甲醇 4 2 混匀 加入 2 5 mL 苯酚显色剂 混匀 加入 2 0 mL 碱性次氯酸钠溶液 混匀 在 37 下水浴 10 min 取出后室温下放置 10 min 于紫外分光光度计波长 650 nm 处 以试剂空白为参比 测量其吸光度 以氨态氮浓度 mg 100mL 为横坐标 相应吸光度值为纵 坐标 绘制标准曲线 建立线性拟合回归方程 8 8 分析结果的计算分析结果的计算 按式 1 计算试样中的氨态氮浓度 其数值用 mg 100mL 表示 C mg 100mL C1 C0 1 式中 0 空白试验查得的氨态氮浓度 单位为 mg 100mL 1 标准曲线上查得的氨态氮浓度 单位为 mg 100mL 9 9 允许差允许差 在重复性条件下 完成两个平行测定的结果的相对偏差不大于 5
