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1、色谱柱故障排除 色谱柱的组成 主要部件 柱管 柱头 筛板故障特征1 色谱峰形不好2 柱压高 避免问题的 使用预柱保护分析柱 硅胶在极性流动相 离子性流动相中有一定的溶解度 大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2 8 0避免流动相组成及极性的剧烈变化流动相使用前必须经脱气和过滤处理如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相 应在实验完毕将柱子冲洗干净 并保存在乙腈中压力升高是需要更换预柱的信号 色谱柱 反相色谱柱 如反相色谱填料C8 C18等 的再生 用以下溶剂至少各30mL冲洗色谱柱100 甲醇 100 乙腈 75 乙腈 25 异丙醇 100 异丙醇 100 二氯甲烷 100 己烷若使用己烷或二氯甲烷
2、冲洗色谱柱 则在重新使用反相流动相前 必须用异丙醇冲洗色谱柱 色谱柱的再生 正相色谱柱 如Si NH2 CN DIOL基色谱填料 的再生 用以下溶剂至少各50mL冲洗色谱柱50 甲醇 50 三氯甲烷 100 乙酸乙酯 色谱柱 色谱柱柱压问题 当色谱柱连接到泵将柱子反向冲洗 和进样器时 压力柱头滤网堵塞更换滤网 特别高更换色谱柱柱头填料变脏将柱子反向冲洗 取下滤网 挖去柱头变脏的填料 填入新的填料 更换色谱柱当柱子连接到检测器时 压力很高柱子和检测器之间的管道堵塞更换管子停泵 可能原因解决办法 噪音高或基线漂移 解决问题 可能原因柱子没有平衡好杂质组分从色谱柱中缓慢流出杂质在柱子中的富集检测器或
3、色谱柱的温度差异系统有气泡检测器氘灯需更换电压不稳造成干扰 解决办法继续冲洗色谱柱至平衡利用强极性的溶剂冲洗色谱柱冲洗色谱柱 改进和提高样品的预处理 使用液相色谱纯的溶剂使用色谱柱恒温箱流动相脱气 使用反压调节器更换氘灯 氘灯使用寿命一般为1000小时 使用稳压电源 检查供电系统 出现肩峰或前延峰 解决问题 可能原因预柱被污染或选用了不合适的预柱柱头 塌陷 造成死体积或是柱子内部有短流出现溶解样品的溶剂选择错误干扰物质的存在 样品中的杂质色谱柱过载柱外效应的影响 解决办法更换预柱更换色谱柱用流动相溶解样品改进样品预处理 用测试的混合物检验色谱柱 使用色谱纯溶剂将样品稀释检查连接色谱柱入口端的管
4、道 峰形展宽 解决问题 解决办法更换色谱柱或预柱减少进样体积 稀释样品用流动相溶解样品使用浓度稍高的缓冲溶液或者换用其它的缓冲溶液检查是否有漏 使用小的检测池提高色谱柱温度检查柱外死体积使用较小粒径填料的色谱柱 更换色谱柱 可能原因色谱柱或预柱被污染或不合适色谱柱 过载 或进样体积过大溶解样品的溶剂选用不当缓冲溶液的浓度太稀色谱柱和检测器之间有漏 检测器的检测池过大色谱柱温度太低 流动相的黏度太高柱外死体积太大色谱柱柱效下降 出现脱尾峰 解决问题 解决办法减少样品体积 增大色谱柱内径 使用高容量的固定相改进样品预处理 调节流动相的组成 使用测试样品混合物检查色谱柱 使用色谱纯溶剂使用流动相改性
5、剂 如三乙胺 提高缓冲溶液或盐溶液的浓度 离子对色谱 降低流动相的pH值 使用碱性去活的色谱柱更换滤网 使用柱前过滤系统 将样品过滤检查管路连接更换色谱柱 使用性质较温和的分离条件 可能原因色谱柱过载干扰峰 杂质硅胶表面未完全键合的硅羟基的影响色谱柱的滤网堵塞柱外效应的影响 死体积色谱柱有 塌陷 短流或断流 保留时间变长 解决问题 可能原因流速降低硅胶表面有活性点键合相流失流动相的组成有变化温度降低 解决办法检查系统是否有漏 更换泵的密封圈 排净气泡 使用流动相改性剂 如加入三乙胺 使用碱性去活的色谱柱保持流动相pH值在2 7 5范围内检查泵 检查滤网 防止流动相的挥发或降解使用色谱柱恒温箱 保留时间缩短 解决问题 可能原因流速升高色谱柱过载键合相流失流动相组成发生变化温度升高色谱柱老化 解决办法检查泵 检查流速降低样品的浓度或进样体积流动相的pH值保持在2 7 5范围内检查泵 检查滤网 防止流动相的挥发或降解使用色谱柱恒温箱更换色谱柱 使用预柱 感谢亲观看此幻灯片 此课件部分内容来源于网络 如有侵权请及时联系我们删除 谢谢配合 感谢亲观看此幻灯片 此课件部分内容来源于网络 如有侵权请及时联系我们删除 谢谢配合
