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1、1陕西汉族人 p53 codon 72 基因多态性与子宫颈鳞癌易患性的关系： 病例对照研究【关键词】 基因,p53;codon,72;多态现象,遗传；宫颈肿瘤；癌,鳞状细胞Relationship between p53 codon 72 polymorphism and liability of squamous cervical cancer in Han population of Shaanxi province: Casecontrol study【Abstract】 AIM: To explore the relationship between genetic polymorph
2、ism of p53 codon 72 and the risk of squamous cervical cancer. METHODS: A casecontrol study was conducted in Han population of Shaanxi province, involving 33 women with squamous cervical carcinoma as experimental group, and 51 same ethical normal women as control group. DNA extracted from peripheral
3、blood samples and pathologic tissues were examined by PCR with allele specific primers. RESULTS: The rates of arginine (Arg) and proline (Pro) homozygosity and Arg/Pro heterozygosity were 33%, 15% and 52% in experimental group, respectively, 22%, 18% and 61% in control group, respectively. The A of
4、Pro/Pro 2or Arg/Pro genotype was 1.80 (95%CI=0.378.97) compared with Arg/Arg genotype. The A of Pro allele compared with Arg allele was 1.34 (95%CI=0.682.62) . Chisquare analysis showed no significant differences between the 2 groups (P0.05). CONCLUSION:Polymorphism at codon 72 of p53 gene may be no
5、t associated with an increased susceptibility to squamous cervical cancer.【Keywords】 genes, p53; codon 72; polymorphism, genetic; cervix neoplasms; carcinoma, squamous cell【摘要】 目的： 探讨 p53 72 密码基因多态性与子宫颈鳞癌易患性的关系. 方法： 在陕西地区汉族妇女中，对子宫颈鳞癌患者 33 例，健康对照 51 例进行病例对照研究，用聚合酶链反应法检测 p53 codon 72 多态性 . 结果： p53 cod
6、on 72 Arg 纯合子、pro 纯合子、Arg/pro 杂合子在病例组分别是 33%, 15%, 52%；在对照组分别是 22%, 18%, 61%. p53 codon 72 Arg/Arg 基因型与Pro/Pro 和 Arg/Pro 两种基因型相比 A 值=1.80, 95%CI=0.378.97，差异无统计意义（P0.05）. 结论： p53 codon 72 Arg 纯合子可能不增加陕西地区汉族人子宫颈鳞癌易患性.3【关键词】基因，p53;codon 72;多态现象，遗传；宫颈肿瘤；癌，鳞状细胞0 引言子宫颈癌是常见的恶性肿瘤，发病率有明显的地区差异. 我国是世界上子宫颈癌高发区之
7、一，每年新增子宫颈癌患者在 13.15万人左右，死亡率较高1. 流行病学和病毒学研究表明高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染是子宫颈癌的主要致癌因素2 ，但并不是所有人感染高危型 HPV 后都进一步发展为子宫颈癌. 1998 年Storey 等 3提出 p53 第 4 外显子 72 密码的基因多态性可能是机体易患子宫颈癌的一个重要基因遗传因素，Arg/Arg 基因型可增加患子宫颈癌的风险.有研究表明 p53 codon 72 多态性具有明显的种族和地区间差异4,因此我们选择我国子宫颈癌高发的陕西省，针对汉族人进行了病例对照研究，旨在探讨陕西地区汉族人 p53 codon 72 多态性与子宫颈鳞癌易
8、患性的关系.1 对象与方法1.1 对象收集 200306/200406 在陕西省肿瘤医院住院的子4宫颈鳞癌病例共 33 例，对照为在西安市疾病预防控制中心健康查体的同地区汉族女性共 51 例.1.2 调查内容采用统一调查表形式，包括基本人口资料、卫生习惯、既往疾病和家族史、临床和病理资料等.1.3 样本和 DNA 样品制备手术取未经过放疗和化疗的子宫颈鳞癌患者的宫颈组织，清洁后在 0.5 h 内冷藏送-70冰箱保存，直至 DNA 提取，另取肿瘤组织送病理检查以明确诊断. 病例组采用杭州维特杰公司的动物组织基因提取试剂盒提取 DNA. 健康对照组采集静脉血 3 mL 存于 EDTA 作抗凝剂的真
9、空干燥管内， 0.5 h 内送-70冰箱保存，DNA 提取采用北京鼎国公司的动物全血 DNA 提取试剂盒.1.4 基因型检测 p53 Arg 和 p53 Pro 序列分别用等位基因特异性引物核苷酸（表 1）进行扩增. PCR 反应体系为： 101.5 L buffer, 410 mol/L dNTP 0.4 L, Mg2+ 1.5 mmol/L, 20 mol/L 正义引物和反义引物 0.25 L， 1 L Taq DNA 聚合酶（均购自美国 MBI 公司） ，添加双蒸水至 15 L. 反应条件为： 94 4 min 预变性，94 40 s, 61 40 s（Arg 序列引物） ，59 40
10、s（Pro 序列引物）退火，72 40 s 延伸，最后 72延伸 10 min. PCR 循环 35 个周期，分别取 10 L 在 2.5%琼脂糖凝胶中电5泳，p53 Arg 特异性产物为 141 bp，p53 Pro 的 PCR 产物为 177 bp（图 1）.表 1p53 codon 72 特异性等位基因引物核苷酸序列（略）M: Marker 100600 bp; 1,3,5: Pro 177bp PCR 产物; 2,4,6: Arg 141bp PCR 产物 .图 1p53 codon 72 特异性扩增产物电泳结果（略）统计学处理： 所有数据用 SPSS10.0 软件进行统计分析，子宫颈
11、癌组和正常对照组间的差异比较采用 2 检测，A 及 95%CI 用以进行危险度评价.2 结果p53 codon 72 Arg 和 Pro 两个等位基因在病例组中所占比例分别为 59%和 41%，在对照组中分别为 52%和 48%，两组等位基因的分布未见显著差异（P0.05）. 以 Pro 等位基因做参比对照， Arg 等位基因与其比较 A=1.34 （95%CI=0.682.62）. p53 codon 72 Arg/Arg, Arg/Pro 和 Pro/Pro 3 种基因型在病例组中所占比例分别为 33%，52%和 15%，在对照组中分别为622%，61%，18%，两组 3 种基因型分布也未
12、见显著差异（P0.05）. 以 Pro/Pro 作为参比对照基因型，Arg/Arg 与其比较 A=1.80 （95%CI=0.37 8.97） ，Arg/Pro 与其比较 A=0.99 （95%CI=0.254.08） ，进一步将 Arg/Pro 和 Pro/Pro 2 基因型合并为参比对照，Arg/Arg 基因型与其比较 A=1.82 （95%CI=0.822.41） ，差异无统计学意义（P0.05，表 2）.表 2p53 基因型在病例组和对照组中的分布（略）3 讨论子宫颈鳞癌发病机制到目前为止尚不清楚，许多研究证明是一个复杂的多步骤多因素作用的结果，涉及遗传及外源性的诸多因素.1998 年
13、 Storey 等3提出 p53 codon 72 的一个单核苷酸基因多态性能增加子宫颈癌易患性. 表现为此基因座是 p53 Pro（脯氨酸，密码为 CGC） ，或者是 p53 Arg（精氨酸，密码为CCC） ，为精氨酸纯合子 (Arg/Arg)型的 p53 蛋白的降解比 p53 codon 72 为脯氨酸纯合子（Pro/Pro）型的 p53 蛋白快. 推断其失活更易引起子宫颈瘤发生. 但此后许多相关研究对此存在争论，不同地区种族得出的结论并不相同，目前普遍认为此基因多态性与地区和种族人群差异有关5-8.7我国有关 p53 codon 72 多态性与子宫颈癌易患性文献研究，目前检索到的只有郗明
14、蓉等91 篇，报道宫颈癌组和正常对照组p53 Arg 纯合子基因型频率相比，有显著性差异(2=6.45, P0.05). 而我们此次针对陕西地区汉族人的研究并未得出阳性结论，考虑有以下几方面因素： 样本量的大小和对照人群的选择. 我们的研究样本量是郗明蓉等人研究样本量的 2 倍多. 穆丽娜等10有关 p53 codon 72 基因多态性与胃癌危险度关系的研究中270 名正常女性对照中 Arg 纯合子占 30%，与我们研究对照组中Arg 纯合子占约 22%. 1998 年 Story 等 3用 30 名子宫颈癌病例和 41 名正常对照得出 p53 codon 72 基因型为 Arg 纯合子的患者
15、患 HPV 相关子宫颈癌的风险是杂合子的 7 倍，但其后 Lanham等11对英国白人妇女研究扩大样本量近 10 倍，结果并不支持此假设，可能是样本量小，抽样误差产生的偏倚. 另外，我们选择以同地区同种族健康人作为对照更具有代表性. DNA 的来源可能会影响基因的检测. 从石蜡标本提取的 DNA 片段完整性较差，不利于较长片段的扩增. Arg 扩增片段为 141 bp, Pro 扩增片段为 177 bp，比 Arg 扩增片段长 25%，而从新鲜组织或外周血标本中提取的 DNA 片段较为完整. 病例组 Arg 纯合子所占比例高于对照组，也可能存在标本来源导致的偏倚. 另外，由于不适宜选择对照宫颈
16、组织提取 DNA，所以为了进一步去除标本来源偏倚，我们同时采集病例组外周血做 PCR 检测，与新鲜组织标本的检测结果一致，因此8在此不考虑其对 p53 codon 72 基因型检测影响.除去这些因素的影响，少数几个种族和地域的研究支持Story 等 3的假设，如希腊12 、南非13等，这些研究中对照人群的 Arg/Arg 基因型所占比例较低（9%20%）,而对照人群中的 Arg/Arg 基因型所占比例较高（47%56%）的美国白人14等相关研究并未得出此结论. 我国有关 p53 codon 72 多态性与肿瘤关系的研究中，除郗明蓉等9的对照人群 Arg/Arg 基因型比例为 40%以外，其余的均偏小（30%） ，并未证明汉族人群此基因多态性与子宫颈鳞癌有关，考虑此基因多态性与子宫颈癌的关系除受到对照人群的 Arg/Arg 基因型比例影响外，可能还有其它因
