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1、 重组活疫苗 重组活疫苗 指使用重组DNA技术克隆并表达保护性抗原基因 利用表达的抗原产物 或重组体本身制成的疫苗 其原理是将外源性目的基因 保护性抗原基因 插入已知的病毒或细菌的弱毒株或疫苗株的基因组中致使基因获得高效的表达 但不影响原弱毒株或疫苗株的生存与繁殖 基因缺失活疫苗 基因缺失活疫苗使用分子生物学技术去除与毒力有关的基因获得的缺失突变毒株制成的疫苗 优点 有突变性状明确 稳定 不易返祖 毒力恢复 是研究安全有效的新型疫苗的重要途径 基因工程载体疫苗 基因工程载体疫苗是指利用微生物做载体 将保护性抗原基因重组到微生物体中 使用能表达保护性抗原基因的重组微生物制成的疫苗 优点 疫苗多为
2、活疫苗 重组体用量少 抗原不需纯化 载体本身可发挥佐剂效应增强免疫效果缺点 曾感染过腺病毒或者接种过痘苗的人 对载体微生物已具有免疫力 使之接种后不易繁殖 因而影响免疫效果 重组痘苗病毒 重组质粒 痘苗病毒dna 外源抗原基因 病毒dna 构建痘苗病毒活疫苗所必需的条件 1 外源基因应是连续的2 外源基因必须在痘苗病毒基因组的安全位点处插入3 必须在上述安全点的基因片段内建表达载体4 具有细胞内同源重组的适宜条件5 必须有一种简便易行的重组痘苗病毒的选择方法6 插入外源基因的容量25 40kb 病毒性载体痘病毒载体疱疹病毒载体杆状病毒载体腺病毒载体RNA病毒 细菌性活载体卡介苗大肠杆菌伤寒杆菌
3、沙门氏菌 痘病毒载体 宿主范围广 增殖滴度高 稳定性好 基因组容量大 含多个非必需区基因 易于构建和分离重组病毒 适于插入多个外源基因 40kb 对插入的外源基因有较高的表达水平 抗原性稳定 免疫原性持久 能够同时诱发体液和细胞免疫 相对安全 痘苗病毒在种痘后局部反应较大 在人接种后有百万分之一发生全身性发痘和种痘后脑炎等并发症倾向 禽类痘病毒 由于用该病毒接种哺乳动物后 可以引起顿挫型感染 但却可以持续表达外源基因 并且不影响再次接种 鸡痘病毒 腺病毒载体 人Ad2和Ad5 外源基因容量为20kb左右 E3 病毒复制的非必须区 允许插入的外源基因的最大长度为4 0Kb 外源基因一般不需要加基
4、因表达调控元件 利用腺病毒本身的调节元件 即外源基因可插在E3启动子后 在感染早期有效表达 HIV 1 狂犬病毒 E1 为病毒复制必须区 缺失E1区的人腺病毒必须在特殊的工程细胞中 比如293细胞系 人胚肾细胞 或非缺失的腺病毒辅助下才能复制增殖 因此称为病毒缺陷型载体 腺病毒的优点 腺病毒比较安全 腺病毒的靶细胞范围广 复制分裂细胞 非复制分裂细胞 腺病毒容易制备 对热不敏感 高滴度增殖 腺病毒可以在肠道及呼吸道繁殖 能诱导粘膜免疫 能制成药囊经口服途径接种以预防消化道及呼吸道感染 Ad2 Ad5等启动子较强 能高水平表达外源基因 特别是换以更强的启动子如CMV早期启动子后 更可明显提高外源
5、基因的表达水平 疱疹病毒载体 基因组较大 约150kb 含70个编码基因 其中至少20 的基因是非必需基因 可容纳多个外源基因的插入 大多数疱疹病毒的宿主范围很窄 其重组病毒的使用不会产生流行病学方面的不良后果 伪狂犬病毒除外 许多疱疹病毒经粘膜途径感染 构建的载体活疫苗可经粘膜途径提呈抗原 诱导特异性粘膜免疫 疱疹病毒作为活载体表达外源基因作为疫苗的研究 单纯疱疹病毒 伪狂犬病毒 火鸡疱疹病毒 牛疱疹病毒I型 马疱疹病毒I型 传染性喉气管炎病毒 沙门氏菌活疫苗载体 能运送抗原至肠道淋巴组织 并引起分泌免疫反应 其中分泌性IgA浸润所有粘膜表面及外分泌腺体的分泌物中 伤寒沙门氏菌在人体 鼠伤寒
6、沙门氏菌在小鼠能在寄主肠道中定居 并在肠道淋巴组织 肝和脾中增殖 沙门氏菌人工突变后 它们仍能在肠道淋巴组织中定居 卡介苗 BCG不仅是一种活疫苗 而且还是外源基因的表达载体和较强的免疫佐剂 也是最耐热的疫苗之一 随着研究的深入 很多外源蛋白在BCG中获得表达 有的获得了较好的免疫效果 是理想的重组菌苗 将外源基因导入BCG的途径1 分枝杆菌噬菌体衍生的基因转移系统2 分枝杆菌质粒衍生的基因转移系统3 同源重组基因转移系统 多价BCG疫苗可预防艾滋病 肝炎 白喉 破伤风 麻疹和疟疾等疾病构建多价疫苗时 可将A菌的表面抗原与B菌的表面抗原连接 也可用A菌的表面抗原与B菌的内部抗原连接 也可将A菌
7、的B细胞表位与B菌的T细胞表位连接 以产生更大的免疫反应 细菌疫苗载体与病毒疫苗载体相比的优点 生产相当低廉细菌载体大多对抗生素敏感可以通过口服和鼻饲接种 方法简便易行可以携带较大的基因片段 易于构建多价疫苗具有免疫佐剂的作用 不仅可以刺激全身免疫而且还可以刺激机体的粘膜免疫诱导作用点比较明确 比较安全可靠 重组 疫苗的研究进展 疫苗是最经济有效的预防疾病的医学 卡介苗 是分枝杆菌中牛结核杆菌的一种突变株 它具有的特点可使之发展成为一种特别有吸引力的重组载体疫苗 分枝杆菌载体疫苗与其它疫苗相比具有以下特征 产品不需纯化 可直接用于免疫保护试验 免去了蛋白质后处理的复杂工序 单次接种即可持续诱导对 靶抗原 的免疫反应 运用分子生物学手段 通过对不同 靶抗原 的剪切 拼接 可使新型疫苗理想化 分枝杆菌本身是一种强免疫性剂 在人类近 个免疫接种者中 证明 用于人是安全的 它是 推荐的两种出生时接种的活疫苗之一 在世界范围内分布着 接种点 价格低廉 便于保存 适于大量生产 近年发展起来的分枝杆菌分子遗传学手段和方法可将外源基因转入 和其它分枝杆菌 为将 和其它分枝杆菌发展为多价载体疫苗打下基础 一重组 疫苗载体的发展重组 疫苗的发展是随着载体的发展而得以推广的 载体是重组 疫苗发展的关键因素 谢谢
