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1、1酶标法检测小巨核细胞对单纯性贫血的诊断价值作者：杨颉 吴少玲 赵新东 孟冬梅 陈兵 【关键词】 贫血; 诊断,鉴别; 小巨核细胞 摘要目的 探讨酶标法检测小巨核细胞在单纯性贫血诊断和鉴别诊断中的意义。方法 应用碱性磷酸酶 -抗碱性磷酸酶桥联酶联技术（APAAP）法和瑞特染色法，分别检测 106 例单纯性贫血（包括骨髓增生异常综合征 20 例，缺铁性贫血 18 例，巨幼细胞性贫血 10 例，溶血性贫血 18 例，多发性骨髓瘤 20 例，骨髓纤维化7 例，肾性贫血 5 例，纯红细胞再生障碍性贫血 3 例，慢性病贫血3 例，慢性再生障碍性贫血 2 例）病人骨髓中巨核细胞的数量和小巨核细胞的数量及类
2、型。结果 APAAP 法检测到的巨核细胞的数量较瑞特染色法多，APAAP 法检测小巨核细胞的阳性率较瑞特染色法高，差异有显著性（ 2 =5.013，P 0.05） 。结论 APAAP 法检测小巨核细胞明显优于瑞特染色法，是诊断单纯性贫血类型的重要方法。 关键词 贫血;诊断，鉴别;小巨核细胞 ABSTRACTObjectiveTo assess the significance of detection of micromegakaryocytes by enzyme linked immunosorbent-assay in differential diagnosis of simple a
3、nemia. MethodsBone marrow smears from patients with 2different kinds of anemia （ n =106） were detected by both APAAP staining and Wrights staining for the number and types of micromegakaryocytes. Results The number of micromegakaryocytes and their positive rate detected by APAAP staining were signif
4、icantly higher than that of Wrights method （ 2 =5.013， P 0.05）. ConclusionAPAAP staining obviously surpasses Wrights method in the detection of micromegakaryocytes， which is an important technique in the diagnosis of simple anemia. KEY WORDSanemia; diagnosis， differential; small megakaryocytes 巨核细胞酶
5、标组织化学染色属于免疫化学中非标记抗体酶法，适用于骨髓标本的检测，对形态学难以识别的小巨核细胞和淋巴样小巨核细胞的鉴别有重要意义。贫血是血液系统疾病中的常见病，明确诊断对于治疗非常重要。我科应用巨核细胞酶标染色法，检测了 106 例单纯性贫血病人的小巨核细胞，探讨小巨核细胞数目及分布情况在单纯性贫血诊断和鉴别诊断中的价值。 1 对象与方法 1.1 对象 单纯性贫血病人 106 例，均为我院 2005 年 112月门诊及住院病人，其中骨髓增生异常综合征（MDS）20 例，缺铁性贫血（IDA）18 例，巨幼细胞性贫血（MA ）10 例，溶血性贫血（HA）18 例，多发性骨髓瘤（MM）20 例，骨髓
6、纤维化3（MF ）7 例，肾性贫血 5 例，纯红细胞再生障碍性贫血（PRCA）3 例，慢性 病贫血 3 例，慢性再生障碍性贫血（CAA）2 例。病人均经临床、血常规、骨髓检查确诊，符合文献1诊断标准。 1.2 方法 1.2.1 标本采集 常规骨髓穿刺采取骨髓标本，制备骨髓涂片。1.2.2 巨核细胞和小巨核细胞检测 分别采用碱性磷酸酶 -抗碱性磷酸酶桥联酶联技术（APAAP）法和瑞特染色法，所有试剂购自协和干细胞基因工程有限公司，按文献2，3 方法操作，显微镜下计数。阳性细胞的细胞核呈蓝色，细胞浆或膜有玫瑰红色标记，且在油镜下观察证实;无红色标记者为阴性细胞。根据小巨核细胞的形态，分为 4 型:
7、型为淋巴样小巨核细胞，直径 12 m;型为单圆核小巨核细胞，直径 1225 m;型为大单圆核小巨核细胞，直径 2640 m;型为多圆核和双圆核小巨核细胞，直径 12 40 m2 。 2 结果 瑞特染色法检测到巨核细胞的数量为 37 个，APAAP 法染色检测到巨核细胞的数量为 67 个。APAAP 法检测 MDS 病人小巨核细胞的阳性率为 75%，瑞特染色法检测阳性率为 40%，二者比较，差异有显著性（ 2 =5.013，P 0.05） 。见表 1。MDS 出现的小巨核细胞的类型主要是、型，而 MA 和 MF 仅出现和型。 4表 1 瑞特染色法和 APAAP 法检测贫血巨核细胞的数量和小巨核细
8、胞的阳性率比较（略） 3 讨论 应用骨髓片瑞特染色法进行巨核细胞计数时，常常会造成巨核细胞的漏检。本文应用 APAAP 法和瑞特染色法检测小巨核细胞阳性率差别有显著性，说明 APAAP 法检测小巨核细胞更敏感。其主要原因有两个:一是由于 APAAP 法中主要应用 CD41a 血小板膜糖蛋白b/a 单克隆抗体，其特异度和灵敏度远远高于瑞特染色法，且能克服内源性过氧化酶的干扰;二是瑞特染色法后进行巨核细胞计数，一般先在低倍镜下观察、后在油镜下确认，所以和幼红、幼粒大小相仿的小巨核细胞往往漏检，造成巨核细胞计数的减少。所以，用 APAAP 法计数小巨核细胞明显优于瑞特染色法，可推广用于贫血性疾病的常
9、规检查，以提高疾病的诊断准确率，对 形态学难以识别的小巨核细胞和淋巴样小巨核细胞的鉴别有重要意义。本文结果还显示，用 APAAP 法计数巨核细胞的数量较常规瑞特染色法多，其原因为:巨核细胞酶标组织化学染色属于免疫化学中非标记抗体酶法，适用于骨髓标本的检测。在单纯性贫血疾病中，除 MDS外，巨幼细胞性贫血、骨髓纤维化也可出现小巨核细胞，但大部分是以、型以外的小巨核细胞为主。而 IDA、HA 、肾性贫血、CAA、PRCA 等疾病中未检测到小巨核细胞。MDS 出现较多的是型小巨核细胞，这是 MDS 病人巨核系统的病态表现及 MDS 的特征性改变，也是 MDS 的一个早期诊断的重要依据。APAAP 法
10、大大提5高了小巨核细胞检出率，因此，在进行小巨核细胞检测时，应用APAAP 法较好4 。MDS 病人单纯表现为贫血，而骨髓仅表现为红系减少或巨幼样变时，瑞特染色法不易与 CAA 或巨幼细胞性贫血相鉴别，易造成误诊，延误治疗5 。APAAP 法可检出瑞特染色法难以识别的淋巴样小巨核细胞，还可同时观察小巨核细胞的形态和分化特征，对早期诊断 MDS 及与其他类型贫血的鉴别诊断有重要意义。对指导治疗也有一定的帮助。 参考文献 1 张 之南. 血液病诊断及疗效标准M . 第 2 版. 北京: 科学出版社， 1998:20. 2 王 曦，程爽. 小巨核细胞免疫酶标染色在急性白血病诊断分型中的意义J.中华血液学杂志，1995，16（1）:37. 3 刘 成玉. 临床检验基础实验指导M . 第 2 版. 北京: 人民卫生出版社， 2003:11. 4 桑玉旗，赵锐利. 小巨核细胞免疫酶标染色在鉴别骨髓增生异常综合征和巨幼细胞贫血中的意义J.齐鲁医学杂志，2001，16 （ 4）:276-279. 5 崔中光，汪洪毅，赵洪国. 环孢素、司坦唑醇及大剂量甲基泼尼松龙治疗急性再生障碍性贫血的效果J.青岛大学医学院学报，2003，39 （ 1）:97.
