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1、项目三 卵磷脂的制备 预习方案,目录,背景知识1、基础知识 主要来源 主要功能 实训目的2、卵磷脂的提取与检测 实训原理 生产工艺,基础知识,卵磷脂的生物学名为磷脂酰胆碱（Phosphatidylcholine)简称：PC，按照其纯度的高低，一般分为PC50、PC60、PC70、PC80、PC90、PC95等产品形式，最高可以提纯到98%，因为其纯度越高，氧化性越强，故提纯到98% 的卵磷脂需要做氢化处理，然后保存。卵磷脂在人体中占体重的1%左右，但在大脑中却占到脑重量的30%；而在脑细胞中更占到其干重的7080%。卵磷脂集中存在于脑及神经系统，血液循环系统、免疫系统及心、肝、肺、肾等重要器官
2、。,卵磷脂被誉为与蛋白质、维生素并列的“第三营养素”。1844年法国人Gohley从蛋黄中发现卵磷脂（蛋黄素），也自此揭开了其神秘的面纱。卵磷脂是生命的基础物质，人类生命自始至终都离不开它的滋养和保护。,主要来源,蛋黄中含有丰富的卵磷脂，牛奶。动物的脑、骨髓、心脏、肺脏、肝脏以及大豆和酵母中都含有卵磷脂。卵磷脂在体内多与蛋白质结合，以脂肪蛋白质（脂蛋白）的形态存在着，所以卵磷脂是以丰富的姿态存在于自然界当中，如果能摄取足够总类的食物，就不必担心会有缺乏的问题，同时也不需要额外补充卵磷脂的营养品。,主要功能,卵磷脂是血管的“清道夫”卵磷脂是肝脏的保护神卵磷脂是适合糖尿病患者的营养品卵磷脂是良好的
3、心理调和剂卵磷脂是美容养颜保健品我国传统中医素有“以脑补脑”之说，认为可“同类相求，各有所归”。像鸡蛋、海鲜、大豆及其制品、核桃、芝麻、葵花籽、动物肝脏和脑髓，等都含有大量卵磷脂。最经济实惠的莫过于鱼头汤，营养学家称它为“补脑汤”。,实训步骤,一、实训目的： 1.加深了解磷脂类物质的结构和性质 2.掌握卵磷脂的提取及鉴定的原理和方法 3.了解薄层层析色谱法的原理及操作二、实训原理： 1.卵磷脂可在植物的水化油或动物的脑和蛋黄中提取，尤以蛋黄中含量最高。,2.卵磷脂溶于乙醇，不溶于丙酮，因此可以利用乙醇从蛋黄中提取粗卵磷脂，而甘油三酯、甾纯溶于丙酮，所以可用丙酮将卵磷脂从粗卵磷脂中沉淀出来，得到
4、精卵磷脂。因为卵磷脂能与锌等二价中金属离子反应生成络合物，因此可利用金属盐将卵磷脂从溶液中提取出来，后再用适当溶剂萃取出无机盐和其他磷脂杂质，从而提高卵磷脂的纯度。（有机溶剂提取法）,三、生产工艺（一）卵磷脂的提取工艺流程: 鸡蛋黄 上清液 油状物 沉淀 精制卵磷脂 沉淀 溶解液,乙醇溶液,离心,丙酮洗涤、干燥,盐析、离心,减压蒸馏,乙醇溶解,丙酮除杂,1、所需原料、试剂及仪器：原料：某市场购得的鸡蛋试剂：95%乙醇、丙酮、硅胶、乙醚、氯仿 红色石蕊试纸、10%NaOH溶液、3%溴的四氯化碳溶液、硫酸氢钾、钼酸铵试剂仪器：恒温水浴锅、蒸发皿、漏斗、磁力搅拌器、天平,实际操作步骤如下： 1、粗提
5、：（1）室温下，取适量鸡蛋黄，用2倍于卵黄体积的95%乙醇进行提取，混合搅拌。（2）以3000rpm 离心5min。（3）将沉淀物重复提取三次，回收上清液。（4）45减压蒸馏至近干，用少量的石油醚洗下粘壁的黄色油状物质。（5）加入丙酮，抽滤，分离出沉淀物。（6）40在真空干燥30min，得到淡黄色的粗卵磷脂，称重。,2、精制：（1）取一定量的卵磷脂粗品，用无水乙醇溶解，得到约10%的乙醇粗提液。（2）加入相当于卵磷脂质量的10%的ZnCL2水溶液，室温搅拌0.5h，分离沉淀物。（3）加入适量冰丙酮（4）洗涤，搅拌1h。（4）用丙酮反复研洗，直到丙酮洗液为近无色为止，得到白色蜡状的精卵磷脂，干燥
6、，称重。,（二）卵磷脂的鉴定薄层层析法1、实训所需原料、试剂、仪器： 原料：提取的卵磷脂 试剂：硅胶-G、0.2%羧甲基纤维素钠溶液、展层剂：氯仿：甲醇：水（65:25:4）、显色剂：1%碘液2、实训步骤：（1）调浆：称取硅胶-G4.5g 烧杯 12mL 0.2%羧甲基纤维素钠溶液 用玻璃棒调匀搅拌为浆状液。（2）涂布：取洁净、干燥玻璃板一块 下衬一张白纸 在桌面上放平，保持均匀一致，涂布面积14/5。（3）干燥：在室温下凉干2min，活化30min后，关闭电源，当玻璃板面温度降至不烫手时取出。（4）活化：当干燥箱升温至不烫手时取出。,（5）点样：样点距离玻璃板一端下缘1cm，相互间隔11.2
7、cm；每位点重复点五次，每次用冷风吹干后再点，每次点样直径不超过2mm。（6）展层：在层析缸中加入展层剂0.5cm深，加盖平衡30min，将点样端浸入，密闭展层1030min。后取出薄层板，标出展层剂前沿位置，用电吹风热风将薄层板吹干。（7）显色：用喷雾器向薄层板上均匀喷洒1%碘液溶液，热风吹干至色斑出现。,薄层层析法,薄层层析法（简写TLC）是一种简便、快速、微量的层析方法。一般是将某种吸附剂或支持剂均匀的铺在薄层上，形成一个薄层而进行层析的一种方法。而待分析的样品，是点加到薄层板的一端，然后将该端浸入适宜的展层剂中，在密闭的层析缸中展层。此法广泛的用于化学成分的分离、精制、定性鉴定和含量测
8、定。,卵磷脂成分的检测,原理： 卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚，而不溶于丙酮，利用其性质可将其与中性脂肪分离开来；此外卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶，利用此性质又可将卵磷脂与脑磷脂分离。 新提取的卵磷脂为白色，当与空气接触后，其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄褐色。卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐、甘油与硫酸氢钾共热，可生成具有特殊臭味的丙烯醛；磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵作用，生成黄色的磷钼酸沉淀；胆碱在碱的进一步作用下生成无色且具有氨和鱼腥气味的三甲胺。这样通过对分解产物的检验可以对卵磷脂进行鉴定。,卵磷脂成分的检测,卵磷脂的溶解性检验：取干燥试管，加入少许提取卵磷脂粗品，
9、再加入5mL乙醚，用玻璃棒搅动使卵磷脂溶解，逐滴加入丙酮35mL。观察溶解情况。三甲胺的检验：取干燥试管一支，加入少量提取的卵磷脂粗品以及25mL10%NaOH溶液，放入水浴中加热15min，在管口放一片红色石蕊试纸，观察颜色有无变化，并嗅其气味，将加热过的溶液过滤，滤液备用。不饱和性检验：取干净试管一支，加入10滴上述滤液，再加入12滴含3%溴的四氯化碳溶液，振摇试管，观察四氯化碳层颜色的变化。磷酸的检验：取干净试管一支，加入10滴上述滤液和510滴95%乙醇溶液，然后再加入510滴钼酸铵试剂，观察现象；最后将试管放入热水浴中加热510min，观察有何变化。甘油的检验：取干净试管一支，加少许
10、提取的卵磷脂粗品和0.2g硫酸氢钾，用试管夹夹住并先在小火上略微加热，使卵磷脂和硫酸氢钾混熔，然后在集中加热，待有水蒸气放出时，嗅其气味。,注意事项,丙酮洗涤时，一定要将核黄素等洗净，洗至发白为止碘蒸汽显色时，应保证层析干燥，碘蒸汽量不可过浓。在加碘时应戴手套，注意安全。点样时，点样应少量多次，点样要适量，要均匀。,参考文献,【1】黄建华 袁道强 陈世锋，生物化学实验，北京：化学工业出版社，2009，2；【2】王林嵩 生物化学实验技术，北京：科学出版社，2007；【3】徐固华 陈芬 生物化学与技术实验，武汉：华中科技大学出版社，2010,1；【4】吴晓英 林影 叶倩君 李晶晶，蛋黄卵磷脂的制备研究J.食品科学.2004(05)【5】张珍，鸡蛋黄中提取卵磷脂的最佳工艺条件J.甘肃农业大学学报.2003(03)【6】迟玉杰 林淑英，卵黄卵磷脂提取与应用的研究进展J.食品与发酵工业.2002(05)【7】刘颖，蛋黄卵磷脂提取工艺研究D河北农业大学，2013【8】 许晓慧，蛋黄卵磷脂的提取及卵磷脂的纯化工艺研究D西北大学，2002。,谢谢观看,
