《植物生理学实验氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力》由会员分享，可在线阅读，更多相关《植物生理学实验氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力（21页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验4氯化三苯基四氮唑 TTC 法测定根系活力 实验目的 根系活力是衡量根系活动能力强弱的重要指标 可以衡量根系吸收水分或矿质元素的能力大小 甚至可以反映地上部分的营养状况以及产量水平 学会利用TTC法测定根系活力 一 原理 氯化三苯基四氮唑 TTC 溶于水中成为无色溶液 但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲替 TTF 如下式 生成的TTF比较稳定 不会被空气中的氧自动氧化 所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体 植物根所引起的TTC还原 可因加入琥珀酸 延胡索酸 苹果酸得到增强 而被丙二酸 碘乙酸所抑制 所以TTC还原量能表示脱氢酶活性 并作为根系活力的指标 二 材料 设备仪器及试剂 一 材
2、料 玉米等植物根系 二 仪器设备 分光光度计 天平 恒温箱1台 研钵1套 漏斗 量筒 移液管 试管 刻度试管10ml 试管架 药勺 石英砂适量 烧杯 小培养皿 洗瓶 二 材料 设备仪器及试剂 三 试剂 1 乙酸乙酯2 次硫酸钠 Na2S2O4 强还原剂 俗称保险粉 3 1mg ml的TTC溶液 4 磷酸缓冲液 66mmol L pH7 5 1mol L硫酸 6 0 4mol L琥珀酸 三 实验步骤 1 定性测定 教师做演示实验 1 配置反应液把1 TTC溶液 0 4moL L琥珀酸钠和磷酸缓冲液按1 5 4比例混合 2 把根仔细洗净 把地上部分从茎基切除 将根放入三角瓶中 倒入反应液 以浸没根
3、为度 置37 左右暗处放1h 以观察着色情况 新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色 表明该处有脱氢酶存在 三 实验步骤 2 定量测定 1 TTC标准曲线的制作取1mg mL的TTC2mL于100mL容量瓶中 加入2勺 黄豆大小 保险粉摇匀 加入乙酸乙酯40mL左右剧烈震荡至保险粉充分溶解 用乙酸乙酯定容至刻度 即成TTF标准液 20 g mL 按下表制作TTF标准曲线 以空白作参比 在485nm波长下测定光密度 绘制标准曲线 1010 三 实验步骤 2 样品的提取及测定样品提取 称取根样品0 5g 放入小培养皿 加入0 4 TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml 把根充分浸没在溶液内
4、在37 下暗处保温1h 此后加入1mol L硫酸2ml 以停止反应 与此同时做一空白实验 先加硫酸 再加根样品 其他操作同上 根系活力测定 把根取出 吸干水分后与乙酸乙酯3 4ml和少量石英砂一起磨碎 以提出TTF 把红色提出液过滤后移入10ml刻度试管 用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二至三次 皆移入试管 最后加乙酸乙酯使总量为10ml 用分光光度计在485nm下比色 以空白作参比读出光密度 查标准曲线 求出四氮唑还原量 四 结果计算 四氮唑还原强度 mg g 根鲜重 h 四氮唑还原量 mg 根重 g 时间 h 五注意事项 分光光度计的使用 看视频保险粉的量要过量 乙酸乙酯容易挥发 研磨时要求操作迅速 TTF暴露空气中易被还原 标准曲线要求现配现用 标准曲线制作 定量试验 定性实验
