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1、人感染H7N9禽流感病毒 病原学特点及标本采集 实验室检测 江西省疾病预防控制中心 疾病检测所 2013年4月12日 目 录 人感染H7N9禽流感病毒病原学特点 人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检测策略 人感染H7N9禽流感病例诊断程序 人感染H7N9禽流感诊疗方案 2013年第2版 病原学检测的解析 人感染H7N9禽流感病毒病原学特点 流感病毒株 H1N1 H2N2 H3N2 流感大流行造成的死亡人数 第一次世界大流行 2000 4000万 第一次世界大战战亡人数100人 美国 英国 意大利 荷兰 加拿大 HPAI LPAI 1959 1 USA H7N7 1977 1 USA H7
2、N7 1979 1980 4 USA H7N7 1996 1 England H7N7 2002 1 USA H7N2 2003 1 USA H7N2 7 Italy H7N3 89 Netherlands H7N7 1 died 2004 1 Canada H7N3 1 Canada H7N3 2006 1 Norfolk H7N3 2007 4 Wales H7N2 2 Mexico H7N3 H7N9H7N9病毒病毒 共25株 均为LPAI 无感染人病例 亚洲 7株 均来自野禽 5株 韩国 2株 蒙古 中国地区中国地区H7 H7 AIVAIV A Baer s pochard HuNan
3、 414 2010 H7N1 A chicken Hebei 1 2002 H7N2 A duck Guangdong 1 1996 H7N3 A duck Hubei 126 1985 H7N8 A duck Jiangxi 1742 03 H7N7 A duck Jiangxi 1760 03 H7N7 A duck Jiangxi 1786 03 H7N7 A duck Jiangxi 1814 03 H7N7 A duck Nanchang 1904 1992 H7N1 A duck Nanchang 1944 92 H7N1 A duck Zhejiang 10 2011 H7N3
4、A duck Zhejiang 12 2011 H7N3 A duck Zhejiang 2 2011 H7N3 A magpie robin China 28710 93 H7 亚型 H7N1 H7N2 H7N3 H7N7 H7N8 野禽居多 LPAI 核酸检测 从3个病例中分离到3株病毒 A Shanghai 1 2013 H7N9 A Shanghai 2 2013 H7N9 A Anhui 1 2013 H7N9 病毒分离 三株H7N9病毒为同一基因类型 PB2 PB1 HA NP NA MP NS PA 6个内部片段来源于H9N2 序列测定 序列特点 l 耐药性分析 对烷胺类药物是耐
5、药的 即M2蛋白25 42位氨基酸发生S31N突变 l HA连接肽分析 HA蛋白339位连接肽由单个 PKGRGLFG 碱性氨基酸组成 根据既 往研究 具有这种序列特点的病毒对禽类呈低致病性 l 受体结合位点及其它重要位点分析 Shanghai 1 2013的HA蛋白 226 228位氨基酸属于禽源受体结合位点 为QSG Shanghai 2 2013和Anhui 1 2013的HA蛋白 226 228位 氨基酸受体结合位点 为LSG l PB2蛋白627位氨基酸为K 提示致病性增强 l NS1蛋白92位氨基酸为D 与禽流感病毒一致 而与人流感病毒不同 一 标本采集 转送和检测 一 病例标本采
6、集 采集人 医疗机构应当及时采集病例的相关临床标本 标本类型 包括病人的上呼吸道标本 包括咽拭子 鼻拭 子 鼻咽抽取物 咽漱液和鼻洗液 下呼吸道标本 如 气管吸取物 肺洗液 肺组织标本 和血清标本等 如病人死亡 应当尽可能说服家属同意尸检 及时进 行尸体解剖 采集组织 如肺组织 气管 支气管组织 标本 人感染H7N9禽流感病毒标本采集 及实验室检测策略 采集时间 应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本 尤其 是下呼吸道标本 和发病7天内急性期血清以及间隔2 4 周的 恢复期血清 标本分装 为避免标本反复冻融 保证标本检测质量 采集的呼吸道标本每份分为3 管 每管不少于1ml 血清标本每份分为2
7、管 每管不少于0 5ml 并填写不明原因肺炎病例 聚集性病例标本送检表 二 密切接触者标本采集 采集人 疾病预防控制机构负责标本采集和实验室检测 工作 标本类型 应当采集病例的所有密切接触者的双份血清 标本 开始实施医学观察时和间隔2 4周后 当密切接 触者出现急性呼吸道症状时还要采集咽拭子 送当地国家 级流感网络实验室进行检测 二 标本转送和检测 1 H7N9禽流感病毒实验室活动和样本运输按照 人间传染的病原微生物名录 中高致病性禽流感 病毒进行管理 病例的临床标本采集后 县级疾病预防控制 机构和病例收治的医疗机构要密切配合 按照生 物安全的相关规定进行包装 在24 小时内送到当 地流感监测
8、网络实验室进行检测 2 当地流感监测网络实验室收到标本后24 小时内 立即对呼吸道标本开展甲 乙型流感病毒通用引物H5 H7亚型的检测 若当地流感监测网络实验室检测结果为H5 H7核酸检 测阳性时 应当于24小时内将其中2管呼吸道相关原 始标本分别送省级疾控中心流感网络实验室和国家流 感中心 具备相应生物安全条件的网络实验室可开展病毒分离 并将分离的毒株按要求及时送国家流感中心 3 若当地流感监测网络实验室检测结果为甲型流 感和乙型流感通用引物均阴性时 应当立即将1管 原始呼吸道标本送省级疾控中心 省级疾控中心 收到标本后 应当立即对其中1管进行SARS 新 型冠状病毒等相关病原体的检测 另1
9、管送国家流 感中心 4 当地流感监测网络实验室将采集的血清标本分 别送省级疾控中心和国家流感中心开展病原体的 抗体检测 二 标本检测结果反馈和报告 开展实验室检测的疾控中心要及时将标本信息和 检测结果信息报送国家流感中心 并在24 小时内 由网络实验室所在疾控中心逐级反馈到病例所在 医院 当标本为SARS 禽流感 H5 H7 新型冠状 病毒或其他新型病原体检测阳性时 检测结果应 当及时报告给同级卫生行政部门 人感染H7N9禽流感病例诊断程序 一 诊断程序 各省首例人感染H7N9禽流感病例由发生地省级卫 生行政部门组织省级临床专家组结合病例的流行 病学史 临床表现 省级疾病预防控制中心检测 结果
10、及中国疾病预防控制中心实验室复核检测结 果等 按照诊疗方案进行诊断 由省级卫生行政 部门报告国家卫生和计划生育委员会 各省后续病例的诊断仍按上述程序进行 但实验 室诊断依据可不需要中国疾病预防控制中心实验 室的复核检测结果 二 实验室检测程序 人感染H7N9禽流感疑似病例先由各省 区 市 的国 家流感监测网络实验室和具备PCR实验室检测条件的 医疗机构进行标本的检测 不具备检测条件的地区 在确保生物安全的情况下 按照规定将标本送邻近具备相应条件和资格认证的 国家流感监测网络实验室和具备PCR实验室检测条件 的医疗机构进行检测 各省 区 市 首例人感染H7N9禽流感疑似病例的 原始标本应在确保生
11、物安全的情况下 送中国疾病 预防控制中心进行复检确认 后续发生的病例 各地应当将其原始标本和病毒分 离物 在确保生物安全的情况下 按照规定及时送 中国疾病预防控制中心 各省 区 市 卫生行政部门应当将具备PCR实验 室检测条件的医疗机构纳入人感染H7N9禽流感检测 机构 开展标本检测工作 并作为诊断的实验室依 据 人感染H7N9禽流感诊疗方案 2013年第2版 病原学检测的解析 病原学及相关检测 抗病毒治疗之前必须采集呼吸道标本送检 如鼻咽分泌物 口腔含漱液 气管吸出物或呼吸道上皮细胞 有病原学检测条件的医疗机构应尽快检测 无病原学检测 条件的医疗机构应留取标本送指定机构检测 1 甲型流感病毒
12、抗原筛查 呼吸道标本甲型流感病毒抗原 快速检测阳性 但仅可作为初筛实验 2 核酸检测 对患者呼吸道标本采用real time PCR 或RT PCR 检测H7N9禽流感病毒核酸 3 病毒分离 从患者呼吸道标本中分离H7N9禽流感病毒 4 动态检测双份血清H7N9禽流感病毒特异性抗体水平呈4 倍或以上升高 人感染H7N9禽流感诊疗方案 2013年第2版 病原学检测的解释 抗病毒治疗之前必须采集呼吸道标本送检 如鼻咽分泌物 口腔含漱 液 气管吸出物或呼吸道上皮细胞 有病原学检测条件的医疗机构应尽快检测 无病原学检测条件的医疗 机构应留取标本送指定机构检测 甲型流感病毒抗原筛查 呼吸道标本甲型流感病毒抗原快速检测阳性 但 仅可作为初筛实验 核酸检测 对患者呼吸道标本采用real time PCR 或RT PCR 检测H7N9 禽流感病毒核酸 病毒分离 从患者呼吸道标本中分离H7N9禽流感病毒 动态检测双份血清H7N9禽流感病毒特异性抗体水平呈4倍或以上升高
