《蛋白酶体抑制剂MG》由会员分享，可在线阅读，更多相关《蛋白酶体抑制剂MG（11页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1蛋白酶体抑制剂 MG作者：李强，罗卓荆，朱锦宇，毕龙，吕荣，孟浩，耿丹【关键词】 蛋白酶体抑制剂；,泛素；,肌萎缩；,失神经Preventive and therapeutic effects of proteasome inhibitor MG132 on denervated muscle atrophy of rats【Abstract】 AIM: To investigate the preventive and therapeutic effects of proteasome inhibitor MG132 on the denervated muscle atrophy of
2、rats. METHODS: Thirtysix SD were randomly divided into 3 groups, group A: 50 L MG132 group; group B: 100 L MG132 group; group C: control group, 12 rats in each group. Standard model of denervated gastrocnemius muscle was established in right limb of each rat. 50 and 100 L MG132 (concentration 20 mol
3、/L), 100 L PBS were respectively given by intramuscular injection once per day to right gastrocnemius muscle of each rat of group A, B and C. Six rats of the each group were separately sacrificed after the last injection of the 1st and 4th week, and the gastrocnemius was harvested for measurement of
4、 atrophy 2rate of muscle, total proteins of muscle, diameter and cross section area of myocyte. RESULTS: At the 1st week postinjectively, atrophy rate of muscle, total proteins of muscle, diameter and cross section area of myocyte in group A and B were （24.53.5）% and （18.23.3 ）%, （9.980.68） mg/mL an
5、d （10.560.84） mg/mL, （14.611.26） m and （14.961.34） m, （790.2512.26） m2 and （800.2818.98） m2; there were significant differences from group C （P0.05 ）, and also between group A and B in atrophy rate of muscle （P0.05）. At the 4th week postinjectively, the above indexes were （60.23.7 ）% and（52.14.0）%,
6、（7.040.70） mg/mL and （ 7.960.68） mg/mL, （10.631.04） m and （12.160.98） m, （470.4811.14） m2 and （498.4710.34） m2; there were statistic differences from group C （P0.05 ）, and also between group A and B in the above indexes （P0.05）. CONCLUSION: Denervated muscle atrophy can be partly prevented by protea
7、some inhibitor MG132 in rats, and the effects rely on the dose of MG132 and the injection duration.3【Keywords】 proteasome inhibitor； ubiquitin；muscle atrophy；denervation【摘要】 目的：探讨蛋白酶体抑制剂 MG132 对大鼠失神经肌肉萎缩的防治作用. 方法：36 只 SD 大鼠随机分为 3 组，每组 12只. A 组：50 L MG132 组；B 组：100 L MG132 组；C 组：对照组. 制作成标准的右侧坐骨神经离断，腓
8、肠肌失神经支配模型. 分别在 A 组和 B 组大鼠失神经腓肠肌局部注射浓度为 20 mol/L 的蛋白酶体抑制剂 MG132 50 L 和 100 L，1 次/d；C 组于相同部位注射 100 L PBS， 1 次/d. 连续注射 1 wk 后半数处死各组动物，各组剩余动物连续注射 4 wk 后处死，取双侧腓肠肌进行肌肉湿重萎缩率、总蛋白含量、肌细胞直径和横截面积测定，并进行统计学分析. 结果： A 组和 B 组肌肉湿重萎缩率、总蛋白含量、肌细胞直径和横截面积注射 1 wk 时分别为（24.53.5）%和（18.23.3）%， （9.980.68） mg/mL 和（10.560.84） mg/
9、mL， （ 14.611.26） m 和（14.961.34） m， （790.2512.26） m2 和（800.2818.98） m2， 与 C组相比较差异均具有统计学意义（P0.05） ；肌肉湿重萎缩率 A组和 B 组差异具有统计学意义（P0.05）. 注射 4 wk 时分别为（60.23.7 ）% 和（52.14.0）%， （7.040.70） mg/mL 和（7.960.68） mg/mL， （10.631.04 ） m 和（12.160.98） m， （470.4811.14） m2 和（498.4710.34） m2，与 C4组相比较差别均具有统计学意义（P0.05）. 肌肉湿重
10、萎缩率 A组和 B 组差异具有统计学意义（P0.05）. 结论：蛋白酶体抑制剂 MG132 可以通过抑制肌肉降解的泛素蛋白酶体途径延缓大鼠失神经肌肉萎缩，并且随时间的延长其作用具有剂量依赖性.【关键词】 蛋白酶体抑制剂；泛素；肌萎缩；失神经0引言泛素蛋白酶体通路是失神经骨骼肌分解代谢的主要途径，其对蛋白底物的水解作用，可以被蛋白酶体抑制剂所阻断，从而影响细胞的生理功能1 . MG132 是蛋白酶体抑制剂的一种，属于醛基肽类2 ，目前对 MG132 的研究主要集中于其抗肿瘤和炎症的作用与机理方面，而对其抑制失神经肌肉萎缩过程中泛素蛋白酶体途径相关的研究报道较少. 本实验中我们制造大鼠失神经肌肉萎
11、缩模型后，在大鼠萎缩肌肉局部注射不同剂量的蛋白酶体抑制剂MG132，旨在观察其对大鼠失神经肌肉萎缩的防治作用.1材料和方法1.1 材料536 只 SD 大鼠，雄性，体质量 190210 g（由第四军医大学实验动物中心提供） ；蛋白酶体抑制剂 MG132 冻干粉(美国Alexix 公司)；二甲基亚砜（dimethyl sulphoxide, DMSO） (中国医学科学院生物医学工程研究所，产品编号 D5879） ；磷酸缓冲液（PBS） ， （博士德生物工程有限公司） ；Leica 图像采集系统（德国Leica 公司） ；Mias 图像分析系统， Libror Age120 测量仪（日本DHIMA
12、DZU 公司） ；U2001 紫外分光光度计（HITACHI 公司）.1.2 方法1.2.1 动物分组及建模将大鼠随机分成组: 50 L MG132 组（A 组） ，100 L MG132 组（B 组）和对照组（C 组） ，每组 12 只. 按照文献3的方法制成右侧坐骨神经离断，腓肠肌失神经支配模型.1.2.2 给药方法蛋白酶体抑制剂 MG132 溶于 DMSO，用 PBS 稀释至 20 mol/L. 确定失神经腓肠肌的位置，用微量注射器正对肌腹中央刺入皮肤，通过改变针头方向分 5 个点行肌肉内注射 . 按照文献4的给药剂量, 局部多点注射 MG132：A 组 50 L，1/d，B 组 100
13、 6L，1/d；C 组局部多点注射 PBS 100 L，1/d. 连续注射 1 wk 后半数处死各组动物，各组剩余动物连续注射 4 wk 后处死，取双侧腓肠肌进行观察.1.2.3 骨骼肌湿重测定将双侧腓肠肌自股骨内外髁起点至跟骨结节止点完整取下，用 Libror Age120 测量仪准确称取肌肉湿重，计算右侧（失神经支配侧）较左侧（神经支配完好侧）腓肠肌的萎缩率.1.2.4 肌肉总蛋白含量的测定实验侧腓肠肌标本用 4 生理盐水冲洗干净，滤纸拭干，剪除表面的筋膜，取 0.2 g 肌肉组织，加入 1 mL 细胞裂解液，在冰浴下匀浆，4下，2000 r/ min，离心 10 min，取上清用 Low
14、ry法测总蛋白含量.1.2.5 骨骼肌细胞直径和横截面积的测定截取称量后的实验侧腓肠肌标本的中段，用 40 g/L 的甲醛液固定，经脱水处理后，石蜡包埋切片(横切)，厚度为 8 m，行 HE染色使用 Leica 图像采集系统进行图像采集，使用 Mias 图像分析系统对同一标本的 5 个不同视野进行观察，并测量肌细胞直径、截7面积，计算平均值.统计学处理：数据用 xs 表示，用 SPSS 12.0 统计软件进行统计学处理，组间比较采用方差分析，检验水准为 0.05.2结果2.1 形态学表现光镜下观察结果显示 C 组大鼠腓肠肌肌细胞核增多，细胞核分布于外周，细胞排列紊乱，细胞直径变小；A 组和 B
15、 组，肌纤维排列改善，有一定的方向性，肌细胞直径大于对照组（图 1）.2.2 腓肠肌湿重萎缩率和肌肉总蛋白含量注射 1，4 wk 时， A 组和 B 组腓肠肌湿重萎缩率和总蛋白含量与 C 组相比差异均有统计学意义（P0.05 ） ；1 wk 时 A 组和 B 组腓肠肌湿重萎缩率之间差异有统计学意义（P0.05）. 注射 4 wk 时， A 组和 B 组腓肠肌湿重萎缩率、总蛋白含量之间差异有统计学意义（P0.05， 表 1）.表 1 各组大鼠腓肠肌萎缩率和总蛋白含量（略）2.3 腓肠肌细胞直径和截面积注射 1 wk 时，A 组和 B 组肌细胞直径和截面积较 C 组差异有统计学意义（P0.05）
16、，A 组和 B 组8之间差异无统计学意义（P0.05） ；注射 4 wk 时，A 组和 B 组肌细胞直径和截面积较 C 组差异有统计学意义（P0.05） ，A 组和 B组之间差异有统计学意义（P0.05，表 2）.表 2 腓肠肌肌细胞直径及截面积（略）3讨论肌肉失神经后，从组织形态学、细胞学、分子生物学等方面发生了一系列的变化，但其萎缩的病理机制尚未完全明了. 许多学者针对肌萎缩过程中的可能机制，采用感觉神经植入技术、电刺激疗法、神经生长因子转染的基因疗法、氨哮素抑制凋亡、传统的中医中药方法治疗等5 ，但疗效均不满意. 由于失神经后肌肉萎缩的机制十分复杂，针对某种单一机制的治疗，均难以达到理想的效果.有研究发现在肌肉萎缩过程中，泛素蛋白酶体
