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1、1苦丁茶冬青叶的提取物抑菌活性研究作者：左文健冉忠梅梅文莉赵夏博戴好富 【摘要 】目的研究苦丁茶冬青老叶及嫩叶提取物的抑菌活性。方法以金黄色葡萄球菌与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌为指示菌，采用纸片法对苦丁茶冬青的老叶及嫩叶的不同萃取物进行抑菌试验。结果苦丁茶冬青的嫩叶和老叶对于两种实验菌株均有显示有抑制作用。结论海南产苦丁茶冬青叶的石油醚和乙酸乙酯萃取物均显示有抑菌作用，且老叶的抑菌作用优于嫩叶。 【关键词】苦丁茶冬青老叶抑菌活性 苦丁茶是一种非茶属植物饮料，采其嫩叶或芽制成，茶色清凉，微苦后甜，在我国有 2000 余年饮用历史。苦丁茶冬青(IlexkudinchaC.J.Tseng)系冬青科（A
2、quifoliaceae）冬青属（Ilex ）常绿植物，自然分布于我国长江流域以南地区，是苦丁茶的正品及重要来源植物之一1。苦丁茶具有清热解毒、消炎杀菌、止咳化痰、健胃消积、提神醒脑、降血压、降血脂、抗疲劳、抗衰老等药用保健功能2。目前，苦丁茶一般采集嫩叶加工而成，对其老叶弃之不用。但广西天等县、大新县等地区民间有采集老叶留下自用的习惯3，也有文献记载用苦丁茶的老叶煮水洗澡能治疗多种皮肤病及烫伤等14 。近年来，有学者开始对苦丁茶的老叶进行研究，有报道从苦丁茶(IlexkudinchaC.J.Tseng)的老叶中提取得到熊果酸25，测定了槲皮素、山柰酚的含量6，也有研究表明老叶的水提物具有降血
3、脂、抗炎的作用7,8。为了进一步开发和利用苦丁茶冬青的药用资源，本文对海南产的苦丁茶冬青嫩叶及老叶的提取物进行了抗菌活性的筛选，为苦丁茶新的药用资源开发提供科学依据。 1 材料 1.1 材料 供试苦丁茶冬青采自海南省澄迈县万昌种植园，经中国热带农业科学院热带生物技术研究所代正福副研究员鉴定为苦丁茶冬青（IlexkudinchaC.J.Tseng） ，标本编号为 DQ20101220，保存在中国热带农业科学院热带生物技术研究所。 1.2 仪器与试剂 洁净工作台( 上海博讯实业有限公司医疗设备厂)，CO2 培养箱(SheldonManufacturingInc.)，旋转蒸发仪，高压蒸汽灭菌锅，电子
4、分析天平，恒温培养箱，循环真空泵等。 1.3 供试菌种 金黄色葡萄球菌(Staphylococcuaureus,SA)ATCC51650，由海南省药检所提供；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcusaureus,MRSA)ATCC9551 由中国热带农业科学院洪葵教授提供。 2 方法 2.1 苦丁茶冬青提取物的制备称取苦丁茶冬青的嫩叶和老叶各200g，分别用 70%的乙醇超声提取 30min，提取两次，合并滤液，3减压回收乙醇得浸膏。将浸膏用适量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物和水相。 2
5、.2 抗菌活性试验采用纸片法测定样品抗菌活性。SA 和 MRSA采用琼脂培养基，将两种菌分别制成一定浓度的菌悬液（105 107cfu/ml） ，用棉签将其均匀涂布在供试无菌培养皿中，制成含菌平板。将苦丁茶冬青提取物配成浓度为 50mg/ml 的样品溶液，选用直径为 6mm 的灭菌滤纸片，分别加样品溶液 50l，待溶剂挥干后，将已经点样的滤纸片贴于已涂供试菌悬液的琼脂培养基上，放置 20min 后，再放入培养箱 37无光照培养，24h 后测定其抑菌圈的大小，阳性对照为硫酸卡那霉素。 3 结果 苦丁茶冬青嫩叶和老叶的总提取物对 MRSA 均表现出较好的抑制作用，对 SA 表现微弱的抑制作用。经萃
6、取后，石油醚和乙酸乙酯萃取物对 MRSA 和 SA 均表现出较强的抗菌活性，而正丁醇萃取物和水相则没有抗菌作用，结果见表 1。表 1 苦丁茶冬青各提取物对两种菌的抑制活性4 讨论 苦丁茶冬青的老叶和嫩叶均具有明显的抗菌活性，这与文献报道苦丁茶冬青具有消炎杀菌的作用相一致。石油醚和乙酸乙酯萃取物4活性更强，正丁醇萃取物和水相则没有活性，表明其抗菌活性成分存在于中小极性的化学成分中。试验结果还表明，老叶的抗菌活性总体上优于嫩叶，这为苦丁茶冬青老叶的开发和利用提供了理论基础。 参考文献 1吴赵云,包雪声, 顺庆生,等.苦丁茶的草本及植物来源考证J.上海中医药杂志 2002,11:43-44. 2江苏
7、新医学院编.中药大辞典上册M.上海：上海科技出版社,1993,11,1288. 3符翠莉,蒙大平, 荣延平,等.苦丁茶老叶水提取物降血脂作用实验研究J.中国实验方剂学杂志 ,2010,16(5):244-245. 4庄辉发.大叶冬青苦丁茶的研究现状与发展前景J.热带农业科学,2009,29(8):51-54. 5蒙大平,路玫黄, 远霞.正交试验法优选苦丁茶老叶中熊果酸的提取工艺J.中国药房,2007,18(6):422-423. 6蒙大平,黄雪梅, 邓玉庄.苦丁茶老叶中槲皮素和山柰素的含量测定J.中国医院药学杂志 ,2006,26(2):135-137. 7路玫荣,延平, 蒙大平.广西苦丁茶老叶提取物抗炎作用实验J.中国药师,2008,11(8):889-890. 8符翠莉,蒙大平, 荣延平.苦丁茶老叶水提取物降血脂作用实验研究J.中国实验方剂学杂志 ,2010,16(5):244-245.
