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1、1芪丹通脉片预防异丙肾上腺素所致的大鼠慢性心肌缺血作者：李晶华，王宗仁，肖铁卉，邵中军，马静，郑谨，马爱玲，龙铟，王文，李军昌 【关键词】 芪丹通脉片 【Abstract】 AIM: To investigate the preventive effects of Qidantongmai tablet on chronic myocardial infarction in mice and its possible mechanism. METHODS: Wistar mice were given small-dose of Qidantongmai Tablet to see the p
2、reventive effects on isoproterenol (ISO) caused chronic myocardial infarction, and the contents of VEGF and bFGF in the part of ischemia were detected by immunohistochemistry method to explore its mechanism. RESULTS: No expression of VEGF and bFGF was found in the group of non-injection ISO, but in
3、ISO injection groups QiDanTongMai Tablet enhanced the expression of VEGF and bFGF. CONCLUSION: Qidantongmai tablet can prevent chronic myocardial ischemia and the acceleration of the expression of VEGF and bFGF may be responsible for it. 【Keywords】 Qidantongmai tablet; chronic myocardial 2infarction
4、; VEGF; bFGF 【摘要】 目的： 研究芪丹通脉片 (QDTMT)对大鼠慢性心肌缺血预防作用及其机制. 方法： 采用 SD 大鼠为研究对象，比较观察 QDTMT 长期小剂量给药对异丙肾上腺素所致的心肌缺血保护作用，通过检测心肌血管内皮生长因子（VEGF） 、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）表达，探讨其可能作用机制. 结果： 未注射 ISO组未见 VEGF, bFGF 表达，而在注射异丙肾上腺素(Iso)各组 VEGF, bFGF 表达均增加，给药组 VEGF, bFGF 表达量高于未给药组. 结论：QDTMT 能够预防慢性心肌缺血，促进 VEGF, bFGF 表达. 【关键词】 芪丹
5、通脉片；慢性心肌缺血；血管内皮生长因子；碱性成纤维细胞生长因子 0 引言 预防慢性心肌缺血的主要手段有长期服用小剂量阿斯匹林、硝苯地平的西药制剂. 但中药在这方面的应用研究较少. 芪丹通脉片(Qidaitongmai tablet, QDTMT)是我们在传统医学理论与实践的基础上组建的中药方剂，动物实验和临床试验均证明对缺血性心脏病有显著疗效. 本次研究的主要就其长期小剂量给药对慢性心肌缺血的预防作用及其机制进行探讨. 1 材料和方法 1.1 材料 SD 大鼠 48 只，雄性，体质量（17020） g，第四军医大学实验动物中心提供. 芪丹通脉片西京医院提供，主要成3分为黄芪 30 g、当归 1
6、5 g、丹参 30 g、红花 30 g、桂枝 10 g. QDTMT 1 g 干粉含 2.86 g 生药；盐酸异丙肾上腺素注射液上海天丰药厂生产(批号 900811). 1.2 方法先把动物分为 2 组：未处理组（不注射异丙肾上腺素）和处理组（注射异丙肾上腺素）. 处理组又分为空白对照组、QDTMT 低剂量组和 QDTMT 高剂量组，每组 12 只，实验前测体质量、作心电图. 空白对照组（生理盐水量为 3 mLkg-1） ；QDTMT 低剂量组（1.0 gkg-1） ；QDTMT 高剂量组（2.0 gkg-1）. 灌胃前用生理盐水配置成等体积药液并分别灌胃，每日 2 次，连续 14 d. 处理
7、组第 14 日注射异丙肾上腺素，每次 4 gkg-1，每日 2 次，造模 2 d 后测心电图，断颈处死后取心肌. 未处理组测心电图，断颈处死后取心肌. 石蜡切片梯度脱蜡，4.5 mLL-1 的 H2O2 室温封闭 15 min；每张滴加 10 gL-1 胰蛋白酶 50 L，37消化 30 min; 20 gL-1 正常羊血清 28封闭 20 min. 加 PBS 稀释的一抗50 L (bFGF 150,VEGF 1100)，阴性对照片加入等量的 PBS. 湿盒孵育 4过夜；滴加生物素标记的羊抗兔 IgG 50 L (PBS 1200 稀释)，28孵育 30 min；滴加 ABC 液 8孵育 3
8、0 min；DAB 显色液 50 L，避光显色 58 min. 各步骤之间洗 3 次，每次 5 min；自来水冲洗 5 min 终止显色；脱水、透明、树脂封片. bFGF， VEGF 为细胞质棕黄色染色. 显微镜观察下根据免疫组化染4色深度、范围对染色结果综合判断. 将 SD 大鼠用 200 gL-1 乌拉坦麻醉后，四肢固定，用 Cardiofax 心电图仪描记心电图，同步记录 , , 导联及心前区搏动最明显处心电图，测量比较各组 ECG 之 J 点上升，ST 段下移，T 波上升的变化. 出现下列一项者为阳性心肌缺血： J 点上升15 mV，T 波低平(下降50%)倒置，ST 段下移0.5 m
9、V，心律不齐. 走纸速度 25 mms-1，灵敏度为 1 mV. 2 结果 2.1 心电图未处理组心电图无缺血改变. 处理组各组 ST 段均抬高，提示本次造模成功. 用药组的心电图改变要低于模型组，提示 QDTMT 可以对抗异丙肾上腺素造成心肌缺血，具有保护作用. 2.2VEGF, bFGF 表达未处理组两种因子均无表达. 在处理组各组中，VEGF, bFGF 均有表达. VEGF 在 QDTMT 高剂量组表达颜色最深，低剂量组次之，损伤组表达最少（Fig 1）. 提示 QDTMT可以促进缺血心肌表达 VEGF. bFGF 在 3 组中表达的量较恒定（Fig 2）. 图 1 不同条件下慢性心肌
10、缺血 VEGF 的表达 （略） Fig 1Expression of VEGF in chronic myocardial infarction400（略） A: Model; B: Min dose; C: Max dose. 图 2 不同条件下慢性心肌缺血 bFGF 的表达（略） 5Fig 2Expression of bFGF in chronic myocardial infarction400（略） A: Model; B: Min dose; C: Max dose. 3 讨论 我们实验结果显示： 在慢性心肌缺血模型中，QDTMT 可以改善心肌供血； 在正常心肌组织中，服用 QDT
11、MT 无 VEGF, bFGF 不表达； 在缺血缺氧条件下，服用 QDTMT 能促进 VEGF, bFGF 表达. QDTMT 活血化淤治疗心肌缺血的机制，可能就是通过促进 VEGF, bFGF 分泌表达来体现功能的. 本次研究是在慢性心肌缺血的基础上，长期使用小剂量中成药的基础上进行的，如果本方剂在人体也能有类似的作用，就有可能取代具有预防心肌梗死作用阿斯匹林等西药. 小剂量阿斯匹林、硝苯地平等西药制剂长期服用可以有效的预防缺血性疾病，但有易于成瘾、损害胃粘膜、影响血压等毒副作用. 而我们的传统医药，尤其是活血化瘀类药物从理论上而言，如果也采取类似的给药方式，也可能有类似的效果；而且中药具有
12、双向调节、毒副作用小等优点，有很大的应用和开发前景. 芪丹通脉片是在多年临床应用的基础上组建的方剂，具有活血化瘀的功效，对高脂血症、高粘血症以及慢性缺血性心脏病都有很好的疗效1,2. 本试验证明 QDTMT 可以有效地对抗异丙肾上腺素所致的心肌缺血，为进一步临床实验打下很好的基础. 复方制剂成分多，作用机制复杂. 结合目前国内国际研究的主要成就我们也对其分子机制进行了初步研究. VEGF 和 bFGF 在许多组织都有分6布和表达，尤其是血管内皮细胞、血管平滑肌和高度血管化的器官3，4. 二者在体内能特异地作用于血管内皮细胞，强烈刺激其增殖，促进血管形成，改善组织器官血运供应的功能.有研究发现正
13、常心肌组织中无 VEGF,bFGF 的 mRNA 表达5，6 ，而在进行性狭窄的冠状动脉分布区和增生的侧枝血管内有大量的 VEGF, bFGF的 mRNA 表达，这说明 VEGF, bFGF 在心肌侧枝血管生成过程中可能发挥着重要的作用. 【参考文献】 1 Wang ZR, Liu JX, Shang XH. Effect of Huoxue tongmai tablet on blood biochemistry in acute experimental myocardial ischemia/infarction canine J. Disi Junyi Daxue Xuebao (J
14、Fourth Mil Med Univ), 1999;20(10):907-909. 2 Ma SP, Wang ZR, Xia T, Li JC, Ma J. Effect of Huoxue tongmai tablet on hemorheology in experimental canine and patients with myocardial ischemia J. Anhui Zhongyi Xueyuan Xuebao (J Fourth Mil Med Univ), 2000;19(3):40-42. 3 Buehler A, Martire A, Strohm C, W
15、olfram S, Fernandez B, Palmen M, Wehrens XH, Doevendans PA, Franz WM, Schaper W, Zimmermann R.Angiogenesisindependent cardioprotection in FGF1 transgenic mice J . Cardiovasc 7Res, 2002;55(4):768-777. 4 Zhang Z, Dong H, Liu J, Wang W, Hu B.Vascular endothelial growth factor gene transfer improves hos
16、t endothelialization of xenogeneic biologic heart valve in vivo J. Chin Med J (Engl), 2002;115(6):878-883. 5 Grasselli F, Basini G, Bussolati S, Tamanini C. Effects of VEGF and bFGF on Proliferation and Production of Steroids and Nitric Oxide in Porcine Granulosa Cells J. Reprod Domest Anim, 2002;37(6):362-368. 6 Lee RJ, Springer ML, BlancoBose WE, Shaw R, Ursell PC, Blau HM. VEGF gene delivery to myoc
