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1、实验五 肝中酮体生成,【目的】 验证肝的生酮能力（生成酮体是肝特有的能力）,【复习】,酮体是脂酸在肝分解氧化时特有的中间代谢产物。是乙酰乙酸、-羟丁酸和丙酮三者的统称。1. 酮体的生成 部位：肝线粒体 原料：乙酰CoA，主要来自脂酸的-氧化。 关键酶：HMG CoA合成酶,2. 酮体的利用特点,肝内生成，肝外利用（肝中缺乏利用酮体的酶）,3. 酮体生成的生理意义,酮体是肝脏输出能源物质的一种形式。在长期饥饿时，是脑和肌肉的主要能源物质。,紫红色化合物,【原理】,丁酸,酮体,肝匀浆,观察显色粉发生的颜色变化，判定在酶的作用下是否有酮体的生成。,显色粉,-羟丁酸乙酰乙酸丙酮,肌匀浆,【原理】 肝细
2、胞中有生成酮体的酶，能以乙酰CoA为原料合成酮体。本实验以丁酸作为底物，与新鲜肝匀浆一起放入与体内相似的环境中，也可以生成酮体。判断酮体生成与否，可将反应液与显色粉混合，酮体能与显色粉中的亚硝基铁氰化钠反应，生成紫红色化合物。而将丁酸与肌匀浆混合，放在同样的环境中则不能生成酮体，因此也不与显色粉反应。,【实践操作】取3支小试管，在上端标注学号、管号，如下操作加入物 （滴） 1 2 3 洛克液 15 15 15 0.5mol/L丁酸溶液 30 30 Ph7.6磷酸缓冲液 15 15 15 肝匀浆 20 20 肌匀浆 20蒸馏水 30 0.02%甲烯蓝溶液 10 10 10 将各管混匀后置度水浴4
3、0分钟。15%三氯乙酸溶液 20 20 20 混匀后离心5分钟，用滴管取各管上清液置反应板中。显色粉一小匙（克） 0.2 0.2 0.2结果（颜色反应） 结果分析,肝脏中酶的催化下以丁酸为底物生成酮体，使显色粉变为紫红色。,肌肉中的酶不能催化丁酸生成酮体，显色粉无反应。,紫红色,淡紫红色,白色,肝脏中酶的催化下以肝中残余乙酰CoA为底物生成少量酮体，使显色粉变为淡紫红色。,【注意事项】 1.凹玻板4人用1个。 2.吸取上清液的毛滴管，管对管吸取液体，不能混 用，4人1套。 3.混匀后吸取肝匀浆和肌匀浆。 4.取显色粉后立即盖瓶盖，取量以覆盖半凹槽为 准。 5.蒸馏水取用四人一小管，每管接水到1/3处。,【思考题】 洛克液、15%三氯乙酸溶液在实验中各有什么 作用？,洛克液起到营养的作用；15%三氯乙酸溶液可以终止反应的发生。,【测试】 1.请写出酮体由哪些成分组成？,酮体包括乙酰乙酸、-羟丁酸和丙酮。,2.酮体的利用特点？,肝内生成，肝外利用。,3.酮体生成的生理意义？,酮体是肝脏输出能源物质的一种形式。在 长期饥饿时，是脑和肌肉的主要能源物质。,
