《胰腺癌组织中神经生长因子受体的表达意义》由会员分享，可在线阅读，更多相关《胰腺癌组织中神经生长因子受体的表达意义（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1胰腺癌组织中神经生长因子受体的表达意义【摘要】 目的： 研究神经生长因子（NGF）高亲和受体 TrkA 与低亲和受体 p75 在胰腺癌中的表达意义. 方法： 应用实时定量PCR 法检测 56 例胰腺癌组织中 TrkA 及 p75 的表达并进行临床病理及预后分析. 结果： 所有组织标本中均可检测出 TrkA 及 p75 的表达呈负相关. p75 与 TrkA 的表达水平与患者的腹背部疼痛和神经浸润程度有关 （P 均0.05 ）. Cox 单变量分析揭示，高 p75 表达患者较高 TrkA 患者的总生存时间延长（P0.05 ） ，Cox 多变量分析揭示，p75 及 TrkA 均为影响预后的独立因
2、素 . 结论： 胰腺癌中 TrkA 的表达促进肿瘤的恶性进展，而 p75 则相反，NGF 刺激增长或抑制胰腺癌的双重作用可能与 TrkA 及 p75 的表达比率相关. 【关键词】 胰腺肿瘤；受体，神经生长因子；TrkA；p750 引言胰腺癌嗜神经浸润的生物学特征，是导致术后局部复发影响预后的主要原因之一1-2. 研究发现，神经生长因子（ nerve growth factor， NGF）及其受体 TrkA（tyrosine kinase receptor A ）/ p75 (p75 neurotrophin receptor )在胰腺癌中具有诱导细胞凋亡、促进癌细胞分裂和存活的作用. 我们研究
3、的目的2是阐明 TrkA 与 p75 在胰腺癌中的表达意义 .1 材料和方法1.1 材料 200106/200512 行标准胰十二指肠切除术胰腺癌标本 56（男 30, 女 26）例, 年龄 48 86（平均 62）岁，病理检查证实为胰腺导管腺癌. 采用 1987 年国际抗癌联盟(UICC)的TNM 分期标准,期 9 例，期 10 例，期 37 例；组织病理学分级，1 级 21 例，2 级 30 例，3 级 5 例. 手术切除后立即切取标本,一半送病理诊断及神经浸润分析，按 Zhu 等3 的方法：0，未见神经浸润；1，神经浸润少见，每张切片不超过 1 处；2，神经浸润很容易发现，每张切片 24
4、 处；3，每张切片超过 4 处. 另一半快速液氮冷冻,-80保存以备检测 TrkA 及 p75 表达水平. 生存者中位随访时间为 6 mo，出现远处转移 48 例. 所有患者术前按 Zhu 等3的方法结合视觉疼痛类比量表 (visual analog scales, VAS)评分以评价患者腹部、背部疼痛水平：0，无疼痛； 1，轻微可以忍受的疼痛；2，中等程度疼痛，需要非吗啡类止痛药物干预；3 ，严重的疼痛，需要吗啡类药物干预.1.2 方法用 Trizol 法按操作说明从每例标本 50 mg 胰腺癌组织中抽提总 RNA. 采用无 RNA 酶的 DNA 酶处理,以提高 RNA纯度, 并使用 Qia
5、gen RNeasy Kit 进一步纯化总 RNA,操作方法按说3明进行. 分光光度计测定总 RNA 的纯度,琼脂糖凝胶电泳初步评价总RNA 质量, 确保总 RNA 的 A260/A280 之值在 1.82.0 之间. 琼脂糖凝胶电泳, 18 s 和 28 s 电泳条带清晰, 28 s 和 18 s 亮度之比2. 实时定量 PCR 应用 Primer premier 5.0 软件, 参照各靶基因序列设计引物（表 1）,TBP(TATAboxbinding protein)备用作管家基因. 每份标本取总 RNA 5 g,在逆转录酶 Superscript( Invitrogen 公司)作用下合成
6、 cDNA,加入引物 1 L，荧光染料SybrGreenI 0.5 L,总反应体积 25 L,按 Invitrogen RTPCR kit操作说明应用 ABI7700 进行 PCR 扩增, 反应条件: 50孵育 2 min, 95 10min, 45 个循环, 95 15s, 60 1 min.统计学处理: 采用 SPSS13.0 软件包, 对年龄、性别、淋巴结转移、疼痛程度、肿瘤大小、神经浸润程度等可能影响中晚期胰腺癌预后的因素进行单因素和多因素分析. 两变量相关分析采用Spearman 秩相关；两组间生存率曲线比较采用 logrank 法, 多因素分析采用 Cox 比例风险回归模型 , 率
7、的比较采用 2 检验, 检验水平定为 =0.05. 表 1 扩增靶基因的引物序列（略）2 结果42.1TrkA 及 p75 在胰腺癌中的分布 TrkA mRNA 的浓度为0.530.92（0.0034.660 ） ，下四分位数为 0.137 而上四分位数为0.437；p75 mRNA 的浓度为 0.951.58（0.0016.660） ，下四分位数为 0.142 而上四分位数为 0.548.2.2TrkA 及 p75 表达与临床病理的关系 TrkA 及 p75 基因表达水平均与疼痛及神经浸润有关（2 检验） ；TrkA 与 p75 表达水平负相关（P0.05 ） ，TrkA，p75 与疼痛，神
8、经浸润程度有关（P0.05,表 2）.表 2TrkA 和 p75 的表达与临床病理学指标的关系（略）2.3 预后 Cox 单变量分析揭示高 p75 表达患者较高 TrkA 患者可延长总生存时间 （设定所有病例的 p75 及 TrkA 表达量的上四分位数为高表达界值） ，TrkA（P=0.013 ） ，神经浸润（P=0.011） ，及疼痛（P=0.018）是预后不良的影响因素（图 1） ，组织学分级，肿瘤大小，淋巴结转移不是预后因素. 在无病生存中p75（P=0.000 ）及疼痛（ P=0.012）为预后因素； Cox 多变量分析揭示，p75，TrkA，神经浸润和疼痛为影响总生存率的独立因素 .
9、A: TrkA 高表达患者预后不良（P0.01）; B: p75 高表达患者预后好（P0.01 ）.5图 1 校准后 TrkA 和 p75 进行总生存率的 KaplanMeier 分析（略）3 讨论NGF 是一种多功能性、多肽性物质,它通过特异的靶细胞表面的神经生长因子受体(nerve growth factor receptor, NGFR)TrkA及 p75 介导产生生物学效应. Zhu 等3-4分析结果表明胰腺癌NGF mRNA，TrkA mRNA 水平比正常胰腺组织增加 2.7 和 5.6 倍,NGF 在癌细胞胞质中强表达, NGF mRNA 和 TrkA mRNA 表达水平在有神经浸
10、润的肿瘤中,比无神经浸润的高,且在高表达 NGF 和TrkA 的肿瘤中 ,周围神经浸润更易发生,提示癌细胞释放的 NGF 并非通过旁分泌或自分泌作用于自身,而是与神经束膜上出现的 TrkA 相互作用,使神经与癌细胞相接触, 导致 TrkA 介导的周围神经浸润，这和我们的结果一致. 国内孙沫逸等5在涎腺腺样囊性癌中也有类似结果报道. 说明 NGF/ TrkA 通路在胰腺癌沿神经播散和侵犯神经及临床疼痛、预后中,起着重要的作用. 我们的研究提示,患者的预后决定于 NGF 两个受体 p75 与 TrkA 的比例也通过实验表明NGF 对胰腺癌细胞生长的影响取决于两种受体表达水平及两者之间的平衡,p75
11、 对凋亡究竟起正调节还是负调节作用,p75 与 TrkA 究竟是协调还是相拮抗,决定于两种受体的不同表达水平,p75 介导的细胞凋亡作用大多发生在 TrkA 受体表达缺如或功能受阻断的细胞6中2. 另有研究发现，在裸鼠胰腺癌模型中应用 TrkA 酪氨酸家族抑制剂（CEP701 ）可明显抑制 NGF 介导的异种移植胰腺导管细胞癌的生存，相对减少肿瘤生长体积的 50%70%6. 我们的研究提示胰腺癌患者中高 p75 水平与患者的良好预后密切相关，而 TrkA 为肿瘤恶性进展的标记，患者的预后与 NGF 两个受体 p75 与 TrkA 的表达比例有关，可以作为探索胰腺癌治疗方法的新的靶目标.【参考文
12、献】 1 Hirai I, Kimura W, Ozawa K, et al. Perineural invasion in pancreatic cancerJ. Pancreas, 2002, 24(1):15-25.2 党诚学，王健生，秦兆寅，等. 胰腺癌神经侵润途径的探讨和临床意义的研究J.中华肝胆外科杂志，2001,7(6):357-358.3 Zhu ZW, Friess H, Wang L, et al. Nerve growth factor exerts differential effects on the growth of human pancreatic cancer
13、 cellsJ. Clin Cancer Res, 2001, 7(1): 105-112.4 Zhu Z, Friess H, Dimola FF, et al. Nerve growth 7factor expression correlates with perineural invasion and pain in human pancreatic cancerJ .J Clin Oncol, 1999, 17 ( 8 ):2419-2428.5 孙沫逸,王磊,杨连甲, 等. NGF 在涎腺腺样囊性癌中的表达及与嗜神经侵袭和疼痛的关系J. 第四军医大学学报, 2004, 25(11):1012-1014.6 Miknyoczki J, Chang H, KleinSzanto A, et al. The TrK tyrosine inhibitor CEP701(KT5555) exhibits significant antitumor efficacy in preclinical xenograft models of human pancreatic ductal adenocarcinoma J. Clin Cancer Res, 1999，5(8): 2205-2212.
