《朱洁 激素对血糖的影响课件(2012研究生)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《朱洁 激素对血糖的影响课件(2012研究生)（14页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验激素对血糖浓度的影响 安徽中医学院生化与分子生物学教研室朱洁 目的要求 1 掌握血糖测定的原理 葡萄糖氧化酶法2 掌握大鼠的一般实验方法3 熟悉血糖含量的调节机制 明确肾上腺素和胰岛素对家兔血糖含量的影响 实验原理 升糖激素与降糖激素的作用相互对抗又彼此协调 共同维持着血糖浓度的恒定 血糖 肾上腺素 胰岛素 本实验通过分别给大鼠注射肾上腺素和胰岛素 作用一段时间后再分别采血 对比注射前后血糖浓度的变化 观察激素对血糖浓度的影响 本实验用葡萄糖氧化酶法测定血糖含量 葡萄糖 O2 H2O葡萄糖酸 H2O2 葡萄糖氧化酶 2H2O2 4 AAP 酚 红色醌类化合物 过氧化物酶 其呈色深浅有葡萄糖
2、含量成正比 在505nm处与同样处理的葡萄糖标准液进行比色 计算葡萄糖含量 实验原理 1 胰岛素注射液2 肾上腺素注射液3 葡萄糖测定试剂盒 葡萄糖氧化酶 过氧化物酶法 4 吸管 分光光度计 电热恒温水浴箱 碘酒棉球 酒精棉球 注射器等 5 麻醉剂 乌拉坦 按大鼠0 5ml 100g 实验试剂与器材 一 动物准备及取血1 动物准备及空腹采血取禁食16小时大鼠一只 过磅称重 并记录体重 2 取血并测定注射激素前血糖水平大鼠断尾取血 用血糖仪测定血糖浓度 空腹血糖浓度 并记录 胰前 或 肾前 3 注射激素按0 5ml 100g腹腔注射胰岛素或肾上腺素 记录注药时间 实验步骤 4 注射胰岛素或注射肾
3、上腺素20分钟后 腹腔注射乌拉坦0 5ml 100g 麻醉 腹主动脉取血 标以 胰后 或 肾后 5 将收集的血液置离心机运转5分钟 3000 min r 分离出血浆 制备样本管 大鼠 禁食16小时 称重并记录 腹腔注射肾上腺素0 3ml 100g 记时20分钟 断尾取血 用血糖仪测定大鼠注射激素前血糖水平 并记录胰前或肾前 腹腔注射胰岛素0 3ml 100g 计时20分钟 按0 5ml 100g 皮下注射乌拉坦 麻醉 将麻醉后大鼠捆绑于解剖台上固定 将收集血液置离心机运转5分钟 3000 min转 分离出血浆 制备样本管 腹腔解剖 暴露腹主动脉 抗凝负压管取血 轻轻振荡 静置 葡萄糖氧化酶法试
4、剂盒 分别测定血糖含量 并记录 胰后 或 肾后 比较大鼠 胰前 或 胰后 血糖的差异以及 肾前 与 肾后 血糖的差异 二 血糖含量的测定 置37 水浴5分钟 用波长505nm 比色杯光径1 0cm 用空白管调 零 点测定各管的吸光度 A 结果处理计算 样本管吸光度 A 葡萄糖 mmol L 标准液浓度 5 55 标准管吸光度 A 0 24 比较激素对血糖影响的百分数 本实验要求男女搭配 操作大鼠时要耐心大胆 特别注意不能放走大鼠 大鼠注射激素后要放回大鼠笼 打开腹腔时不要用厚的劳保手套 换戴一次性手套 实验结束后统一收集大鼠尸体 仔细清理实验台面 不要留有血迹 实验步骤 讨论思考 1 比较注射激素前 后血糖浓度的变化 这些变化说明什么 2 血糖主要有哪些代谢来源与去路 升糖激素和降糖激素的作用机制是什么 3 葡萄糖氧化酶 过氧化物酶法测定血糖的基本原理是什么 4 血糖浓度测定有何临床意义
