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1、1肾阴虚抑郁症大鼠模型的建立及评价作者：陈晓阳，陈容，李晟，吴晓军，徐爱良，史冰【摘要 】 目的 建立肾阴虚抑郁症大鼠模型。方法 将 50 只大鼠随机分为正常组、单纯应激组、温燥组、甲状腺素组及激怒组；采用慢性温和不可预见性慢性应激建立抑郁症“病”模的同时，正常组、单纯应激组灌胃生理盐水，甲状腺素组灌胃甲状腺素，温燥组灌胃温燥药；激怒组采用长期激怒法并灌胃生理盐水。使大鼠在抑郁的基础上表现出一定的阴虚“证” ，以大鼠一般状态、敞箱试验、液体消耗试验、血清雌二醇（E2） 、睾酮（ T）及血浆环腺苷酸（cAMP） 、环鸟苷酸（cGMP）作为检测指标，对各模型进行比较。结果 与正常组比较，各模型组的
2、体质量、水平得分、垂直得分、中央格停留时间、糖水消耗、总液体消耗各指标测值减少,温燥组、甲状腺素组及激怒组普遍出现活动减少，大便干燥，毛湿无光泽，易惊怒以及血浆 cAMP 含量升高，其中甲状腺素组和激怒组大鼠血清E2、E2/T 比值显著升高。结论 甲状腺素合并应激抑郁模型所致的肾阴虚抑郁，更符合临床实际，简单易行，可作为肾阴虚抑郁症造模方法之一。 【关键词】 温燥药；抑郁症；肾阴虚；甲状腺素；动物模型；熟附片；肉桂；大鼠2 To establish a better experimental model of kidney-yin deficiency and depression syndr
3、ome. Methods All 50 rats were divided into normal, stress only, warm-dryness, thyroxine and irritation groups; all the rats were mildly and chronically irritated to establish the models of depression syndrome. The rats was fed with normal saline in the normal and stress only groups, with thyroxine i
4、n thyroxine group and warm-dry medicine in warm-dryness group, and the rats in irritation group was irritated in long-term and fed with normal saline, which could cause rats in a depression state with kidney deficient syndrome. And all the general conditions, open-field test, fluid consumption, conc
5、entration of cAMP and cGMP in plasma, and concentration of E2,T in serum were detected and compared. Results Compared with normoal group, the targets in all groups, such as body weight, horizontal scores, vertical scores, stopping time in center, sugar water consumption and total body fluid consumpt
6、ion, were decreased, the motions of rats in thyroxine, warm-dryness and irritation groups were lowered with dry stool, easy irritation and increased serum cAMP concentration, in which, 3the ratio of serum E2, E2/T in thyroxine group and irritation group was increased obviously. Conclusion The odel o
7、f kidney yin deficiency and depression syndrome, induced by feeding thyroxine and irritated depression, is simple and prepared easily, which can be the first selection for the modeling of kidney yin deficiency and depression syndrome. depression syndrome; kidney yin deficiency; animal model; rats肾阴虚
8、型抑郁症是由于长期情志不畅，以致耗伤阴精，肝肾阴亏，髓海不充所致，是抑郁症中比较常见的证型，尤其多见于疾病后期及中老年人群。近年来就抑郁症和肾阴虚证本质的研究较多，但对肾阴虚型抑郁症动物模型的研究尚未见报道。本文将 3 种阴虚证“证”模分别与慢性应激致抑郁症“病”模合并，建立 3 种不同的阴虚抑郁模型，试图寻找一种符合临床实际的肾阴虚抑郁症模型。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 动物 健康 SD 大鼠 50 只，雄性，体质量（22020） 4g，由湖南中医药大学实验动物中心提供，许可证号：SYXK（湘）2003-0001。1.1.2 药物及试剂 甲状腺素片（济南维尔康生化制药有限公司，产品
9、批号：0505505） ，用蒸馏水配成浓度为 0.25 mg/mL 的混悬液；温燥药浓缩液（由湖南中医药大学第一附属医院提供） ，熟附片干姜 肉桂按 111 比例称取药材，提取挥发油后，水煎 3 次过滤，浓缩，兑入挥发油制成含生药 1.5 g/mL 的溶液；雌二醇（E2） 、睾酮（T）放免分析试剂盒（北京科美东雅生物技术公司，批号050925） ，环腺苷酸（cAMP） 、环鸟苷酸（cGMP）放免分析试剂盒（上海中医药大学同位素室，批号 050920） 。1.1.3 仪器 敞箱（自制）：由不透明材料制成，底面为 100 cm100 cm 的正方形，被等分为 25 个等边方格，高 50 cm；放射
10、免疫计数器(GC-1200 放射免疫计数器, 中国科学技术大学科技实业有限公司） ；电子天平（型号:ES-C-600 电子天平,湘仪天平仪器有限公司） ；低温大容量高速离心机（型号：KDC-2046 低温大容量离心机,中国科学技术大学科技实业有限公司） 。1.2 方法1.2.1 动物分组 试验前对所有大鼠进行敞箱实验和液体消耗实验，5根据敞箱实验得分和液体消耗实验结果，将动物分为 5 组，每组 10只：即正常对照组、慢性应激抑郁模型组（简称应激组） 、慢性应激抑郁模型+温燥药（简称温燥组） 、慢性应激抑郁模型+甲状腺素（简称甲状腺素组） 、慢性应激抑郁模型+激怒（简称激怒组） 。整个实验过程中
11、动物自由摄食和饮水（禁食禁水应激除外)，室温(223)(热、冷应激除外)，自然昼夜节律光照，相对湿度60%70%，背景噪音(4010)db。1.2.2 3 种肾阴虚型抑郁动物模型的建立 参照文献1方法并加以改进，8 种应激因子随机安排到 21 d 中：昼夜颠倒(24 h)；禁食禁水(24 h)；潮湿垫料、鼠笼倾斜；40 高温环境(5 min)；夹尾(1 min)；4 冰水游泳(5 min)；陌生异常物品(如塑料杯、木勺等)；电击足底（18 V，5 s） ，除正常组外，各组大鼠均孤养并按程序给予应激刺激，造成大鼠抑郁。在应激使大鼠抑郁的同时，从试验第 1 天起，所有动物每天灌胃 1 次，连续 2
12、1 d，温燥组2灌胃温燥药浓缩液；甲状腺素组3灌胃甲状腺素混悬液；应激组、激怒组和正常对照组灌胃生理盐水,各组灌胃容量都为 10 mL/kg。激怒组参照文献4 从第 1 天开始将大鼠双后肢束缚，成对吊在笼内，以引起激怒，首次 20 min，以后每隔 1 d，增加 10 min。整个实验共 21 d。1.2.3 观察模型动物一般状态及体质量变化 实验过程中观察大鼠6外表、性情、活动情况、饮水量、大便情况。每周测 1 次体质量。1.2.4 液体消耗试验5 试验前在安静的房间内，训练动物适应含糖饮水，每笼同时放置 2 个水瓶，第 1 个 24 h，2 瓶均装有 1蔗糖水，随后的 24 h，1 个瓶装
13、 1蔗糖水，1 个瓶装纯水。23 h的禁食禁水后，进行动物的基础糖水纯水消耗试验，同时给予每只大鼠事先定量好的 2 瓶水：1 瓶 1蔗糖水，1 瓶纯水。60 min后，取此 2 瓶并称质量。计算动物的总液体消耗、糖水消耗、纯水消耗、糖水偏爱=糖水消耗量/总液体消耗100)。每周进行 1 次糖水消耗试验。1.2.5 敞箱试验 6 安静的房间内进行此项试验观察。将大鼠置于中心方格内，观察大鼠在 5 min 内中央格停留时间 (s)、穿越格数(四爪均进入的方格方可记数，为水平运动得分)、后肢直立次数( 两前爪腾空或攀附墙壁，为垂直运动得分)、清洁运动记数、粪便粒数。彻底清洁敞箱后再进行下 1 只大鼠
14、的观察，每只观察 1 次。每周进行 1 次敞箱实验。1.2.6 大鼠血清 E2、T 及血浆 cAMP、 cGMP 的测定 实验第 22天，颈动脉插管取血，一部分血低温下自然退缩，按放免试剂盒说明书测血清 E2、T；另一部分（约 12 mL）注入含 EDTANa2 50 ?滋L 的试管中，摇匀放入冰浴中，1 h 内，4 ,2 000 r/min 离心 10 7min，按试剂盒说明书制备血浆样本，用于测定 cAMP、cGMP。1.3 统计学分析SPSS 13.0 统计软件包作为统计工具，计量资料用“s” 表示，方差齐者用单因素方差分析，方差不齐者采用 Tamhan 分析。2 结果2.1 各实验组大
15、鼠一般状态的比较造模 2 周后，各模型组均出现活动减少的情况，但是激怒组、温燥组和甲状腺素组还出现毛湿，毛无光泽、大便干燥、易激怒的现象。从饮水量来看，各组大鼠在实验初期都有降低趋势，应激组和激怒组这种趋势持续到实验结束，甲状腺素组、温燥组的饮水量经过短暂的减少后，有增加趋势，到实验第 18 天到达最高值，最后才有所减少，其中甲状腺组大鼠饮水量增加具有显著性，实验第21 天甲状腺素组大鼠 24 h 饮水量显著高于正常组，见图 1。2.2 各实验组大鼠体质量及行为学指标的比较实验前，各组动物测得的体质量、敞箱实验及液体消耗试验的各项指标相近，无统计学差异。实验第 21 天，应激组、激怒组、温8燥
16、组和甲状腺素组大鼠体质量显著低于正常对照组（P0.01） ；各模型组的水平得分、垂直得分、中央格停留时间、糖水消耗、液体消耗等各项指标测值减少，与正常对照组比较有显著统计学意义（P 0.01） ，见表 1。2.3 各实验组大鼠血清 E2、T 及血浆 cAMP、cGMP 的比较与正常组比较，应激组大鼠血浆 cAMP、cGMP 及血清 E2、T含量无统计学差异。与正常组和应激组比较，温燥组、甲状腺素组、激怒组大鼠血浆 cAMP 含量、cAMP/cGMP 比值显著升高；温燥组E2、E2/T 升高无显著差异，而甲状腺素组、激怒组大鼠血清E2、E2/T 升高具有显著统计学意义（P0.01） 。见表 2。3 讨论抑郁症的病因尚未彻底阐明，目前认为慢性、低水平、长期的应激源是促进抑郁发生并加重病情的主要原因。慢性温和不可预见性应激抑郁模型根据此理论建立，已成为国内外
