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1、脂代谢紊乱检验,第十章,异常？,正常？,血脂,机体脂类代谢,动脉粥样硬化冠心病急性事件,血脂：是血浆中脂类的总称,第一节 概述,血浆脂蛋白（Lp）： 血脂 + 载脂蛋白,脂蛋白结构示意图,此种结构形式可使脂蛋白颗粒稳定、均匀地分散于血浆。并可与酶及细胞表面的受体接触，在脂蛋白代谢中起关键作用。,离心法,电泳法,血浆脂蛋白的分类,1、超速离心法,乳糜微粒（CM）,极低密度脂蛋白（VLDL）,中间密度脂蛋白（IDL）,低密度脂蛋白（LDL）,高密度脂蛋白（HDL）,脂蛋白（a）（Lp(a)）,依据血浆脂蛋白分子中蛋白质表面电荷多少的不同而分离。通常可分成：,2、电泳,分别相当于CM、LDL、VLD
2、L 、HDL，IDL也有移动度，在IDL异常时可显现宽带 。,CM、-LP 、pre-LP、-LP 四条区带,人血浆脂蛋白主要特征,Lp(a)的核心部分由TG、PL、chol、CE等脂质和ApoB100组成，结构类似LDL。且含有特异性抗原成分 Apo(a)。Lp(a)中1分子ApoB通过二硫键与1分子Apo(a)共价结合。Apo(a)与PLG（纤溶酶原）具有高度同源性。肝脏是Apo (a)合成的主要场所。Lp(a) 是动脉粥样硬化的独立危险因素，且与血栓形成密切相关。,脂蛋白(a)Lp(a),10,载脂蛋白,定义：脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白(Apo)。种类： 按1972年Alaupovic
3、建议的命名方法，用英文字母顺序编码，分为ApoA、B、C、D、E、F、G、H、J等。由于氨基酸组成的差异，每一型又可分若干亚型。,ApoA ApoB ApoC ApoE,分 类,载体 、运输联系 、配体激活,功能,合成部位,肝小肠,受 体,LDL受体残粒受体清道夫受体,脂蛋白受体,糖蛋白调节细胞外脂蛋白的水平,LDL受体残粒受体清道夫受体,运送及清除,LDL受体：识别ApoB100（ApoE ）对维持细胞和全身胆固醇平衡起重要作用,识别ApoE，清除血液循环中CM残粒和-VLDL残粒,巨噬细胞表面,介导修饰LDL从血液循环中清除,胆固醇酯转运蛋白（CETP）磷脂转运蛋白（PTP）微粒体甘油三酯
4、转运蛋白（MTP）,脂质转运蛋白-LTP,血浆脂蛋白代谢,脂蛋白代谢以肝脏为中心,HDL代谢：胆固醇逆转运(RCT),VLDL-IDL-LDL代谢：由肝合成VLDL, 再转变为IDL和LDL,并被肝或其它器官代谢的过程,CM代谢：饮食摄入的Ch和TG在小肠中合成CM及其代谢过程,LP代谢,外源性代谢,内源性代谢,血 浆 脂 蛋 白 代 谢 总 图,Lp(a) 是一类独立的由肝脏合成的脂蛋白,高脂血症: TC 或/和 TG,高脂蛋白血症 : CM、VLDL、LDL、HDL,血 浆 脂 蛋 白 代 谢 紊乱,脂质异常血症,高 脂 血 症 的 分 类,临 床 表 型,是 否 继 发 其 他,基 因
5、分 型 法,Fredrickson,血清(血浆)外观：在4冰箱放置16-24h 后的血清外观(2) 血脂浓度：血清TG、TC含量(3) 各种血浆脂蛋白升高程度,依据,1967年Fredrickson等首先提出高脂蛋白血症的分类法（5型）。1970年WHO进行部分修改，将其中型分为a和b两型。,型高脂蛋白血症a型高脂蛋白血症b型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症, 4静置过夜， 表面奶油状，下层澄清 血清TG， 血清TC正常或轻度 血清脂蛋白电泳，CM,型高脂蛋白血症,家族性高乳糜微粒血症脂蛋白酶缺乏症,生 化 特 征,基因突变 LPL CM,a高脂蛋白血症,高-脂蛋白血症高
6、胆固醇血症,生 化 特 征,4冷置试验 血浆外观澄清血清TC 尤其LDL TG正常血清脂蛋白电泳 -LP,LDLR缺乏或异常,此型临床常见,b型高脂蛋白血症,生 化 特 征,4冷置试验 血清外观澄清或微混血清TC，TG VLDL和LDL均 血清脂蛋白电泳 -LP，pre-LP,多基因突变 LPL LCAT,此型临床很常见,型高脂蛋白血症,宽-脂蛋白血症,4冷置试验，血清外观混浊可见一模糊奶油样薄膜。血清TC ，TG 。 血清脂蛋白电泳，-LP，pre-LP融合形成宽区带。,生 化 特 征,ApoE异常 VLDL转化和清除缺陷,型高脂蛋白血症,4冷置试验，血清外观可以是澄清也可呈混浊。血清TG
7、，TC正常或稍， VLDL 血清脂蛋白电泳，pre-LP,内源性高三脂酰甘油血症,生 化 特 征,临床表现，多见于中青年，较常见,型高脂蛋白血症,混合性高三酰甘油血症,4冷置试验，血清上层为奶油状，下层混浊。血浆中TG ，TC ，VLDL 。血清脂蛋白电泳，CM ，pre-LP。,内源性和外源性TG清除功能缺陷,生 化 特 征,动脉粥样硬化(AS)是指动脉内膜因脂质、血液成分的沉积、平滑肌细胞及胶原纤维增生，并伴有不同程度坏死及钙化等一类慢性进行性的病理改变。,最终导致血管壁呈增厚、狭窄，使某些脏器(尤其是心、脑)供血不足而损伤，甚至危及生命。,高血压,年龄,冠心病家族史,血脂紊乱,吸烟,糖尿
8、病,不可改变的,可改变的,NCEP Circulation 1994;89:13291445. Eur Heart J 1994;15:13001331.Wood D et al. Eur Heart J 1998;19:14341503.,冠心病,冠心病的主要危险因素,AS主要的危险因素,高脂血症（高脂蛋白血症）高血压吸烟,性别遗传因素 内分泌因素,引起动脉粥样硬化的脂蛋白,CM颗粒大，一般不致AS, 但易诱发胰腺炎,LDL相对较小, 是首要的致AS性脂蛋白,VLDL升高已被确认为CHD的危险因子。,IDL具有致AS作用,LP（a)As的独立危险因子。,动脉粥样硬化,HDL降低,第二节 血脂
9、、脂蛋白及载脂蛋白测定,常规测定项目：,TC、TG、HDL-C、LDL-C,分析前的准备：,受试者的准备标本采集合格的试剂校准物的选用检测方法选择,是否空腹采血体位血液浓缩抗凝剂标本处理存储条件生物学波动,总胆固醇（total cholesterol，TC）甘油三酯（triglyceride，TG）高密度脂蛋白-胆固醇（high dense lipoprotein cholesterol，HDL-C）低密度脂蛋白-胆固醇（low dense lipoprotein cholesterol，LDL-C）载脂蛋白A（apolipoprotein A，ApoA）载脂蛋白B（apolipoprotei
10、n B，ApoB）Apo（a）,临床血脂分析项目,一、血清（浆）静置试验,二、血清（浆）总胆固醇测定, COD-PAP法,胆固醇酯 + H2O 胆固醇 游离脂肪酸 胆固醇 O2 4-胆甾烯酮H2O22H2O24-AAP酚 醌亚胺（红色化合物）4H2O,方法学评价,简便,快速,无腐蚀性,高，好，宽,CE水解不全，CHE活性受影响，易受干扰,常规方法,三、血清（浆）三酰甘油测定,检测方法,同位素稀释-质谱法,化学法,酶法（GPO-PAP）,磷酸甘油氧化酶法 乳酸脱氢酶法 甘油氧化酶法,化 学 法,1.抽提 2.皂化 3.氧化 4.显色,变色酸显色法,乙酰丙酮显色法,1、磷酸甘油氧化酶法GPO-PA
11、P,三酰甘油 + H2O 甘油 3-脂肪酸 甘油 ATP 3-磷酸甘油ADP3-磷酸甘油O2+2H2O 磷酸二羟丙酮+2H2O2H2O24-AAP4-氯酚 苯醌亚胺2H2O+HCL,第一步反应,第二步反应,本法酶试剂比较稳定，灵敏度高，线性范围较宽两步法为检验分会推荐方法,三酰甘油 + H2O 甘油 3-脂肪酸 甘油 ATP 3-磷酸甘油ADP3-磷酸甘油O2+2H2O 磷酸二羟丙酮+2H2O2H2O24-AAP4-氯酚 苯醌亚胺2H2O+HCL,2乳酸脱氢酶法,【原理】,三酰甘油 + H2O 甘油 3-脂肪酸 甘油 ATP 3-磷酸甘油ADPADP磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸+ATP 丙酮酸+N
12、ADH NAD+乳酸,3甘油氧化酶法,第一步： FG + O2 甘油醛+ H2O2 H2O2 + EMAE 无色物质 消除游离甘油的影响，3-5min后进行第二步反应： TG + 3H2O 甘油 + 3RCOOH 甘油 + O2 甘油醛+ H2O2H2O2 +4-AAP+ EMAE 有色物质EMAE作用与酚相似，是还原剂，但灵敏度比酚高。,甘油氧化酶,POD,POD,LPL,甘油氧化酶,血清甘油三酯一般随年龄增加而升高， 体重超过标准者往往偏高。 合适范围：1.70mmol/L(150mg/dl)， 升高：1.70mmol/L (150mg/dl)。,升高：（1）原发性高TG血症，包括家族性高
13、TG血症与家族性高脂（蛋白）血症等。（2）继发性高TG见于糖尿病糖原贮积症、甲状腺功能减退、肾病综合征、妊娠、口服避孕药等降低:甲亢、肾上腺皮质功能减退和肝功能严重损伤。,【参考区间】,【临床意义】,四、血清（浆）脂蛋白测定,高密度脂蛋白胆固醇测定,参考方法:,超速离心分离HDL，然后用化学法（ALKB法）或酶法测定其胆固醇含量，此法需特殊设备，而且不易常握。,沉淀剂：肝素-锰、硫酸葡聚糖-镁、聚乙二醇、磷钨酸-镁,常规方法:,HDL直接测定法,抗体包裹法、酶修饰法、选择性抑制法,HDL-C合适范围：1.04mmol/L (40mg/dl), 0.91mmol/L (35mg/dl)为减低。,
14、流行病学与临床研究证明，HDL-C与冠心病发病呈负相关，HDL-C低于0.9 mmol/L 是冠心病危险因素。HDL-C大于1.55mmol/L被认为是冠心病的“负”危险因素。 HDL-C下降还多见于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高TG血症往往伴以低HDL-C，肥胖者的HDL-C也多偏低。吸烟可使HDL-C下降，适量饮酒、长期体力劳动和运动会使HDL-C升高。,【参考值】,【临床意义】,低密度脂蛋白测定,1Friedewald公式法 LDL-CTCHDL-CTG/2.2（以mmol/L为单位时）（血清中存在CM、TG4.56时不适用）,2聚乙烯硫酸盐沉淀法 本法并非对LDL-C作直接测定，而是用聚乙烯硫酸（PVS）选择性沉淀血清中LDL，再以血清TC减去上清液（含HDL与VLDL）胆固醇即得LDL-C值。,
