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1、第 1 页 元谋栽培印楝枝叶化学成分的研究 印楝 Azadirachta indica 为楝科 Meliaceae 楝 属 Melia Linn 植物 原产于南亚次大陆 包括印度 巴 基斯坦以及缅甸等国 1 印楝有很强的昆虫拒食活性和杀 虫活性 它是目前世界上公认的高效无毒无公害杀虫植物 它还是一种药用植物 在印度人们利用印楝的各个部位来治 疗麻疹 眼疾 鼻出血 肠道寄生虫 皮肤溃疡等疾病 2 现代活性研究发现印楝有抗肿瘤 3 抗菌 4 抗病毒 5 等活性甾体 印楝的化学成分及生物活性也一直是研究热 点 我国曾在云南 海南和广东进行种植 以云南种植面积 最大中国论文网 目前在云南元谋地区栽培的
2、印楝均已成材 结实 但是却未能得到实际有效的利用 转变为预期的生态 农药 更加让人担忧的是这些印楝面临随时被砍伐的危险 为了能挽救这一闲置的资源 为开发利用这一资源探索新的 途径 本研究组对采集于云南元谋县栽培印楝枝叶进行了化 学成分的研究 从印楝枝叶的甲醇提取物中分离得到分离得 到 56 个化合物 本文报道首次从中得到的15 个化合物 分 别为 nimbin 1 甾体 6 deacetylnimbin 2 6 deacetylnimbinene 3 nimbinene 4 azadiradione 5 7 acetoxy elema 1 3 dien 8 ol 6 1 naphthaleno
3、ne 7 acarusnol 8 colvane 2 9 diol 9 乌苏酸 10 马斯里酸 11 第 2 页 2 羟基乌苏酸 12 甾体 猕猴桃酸B 13 2 3 4 trihydroxypregnan 16 one 14 2 3 4 trihydroxypregnan 16 one 15 1 材料和方法 1 1 材料和仪器 NMR 在 Bruker AV 400 或 DRX 500 核磁共振仪上测定 以 TMS 为内标 ESI 质谱由 Waters 2695 HPLC Thermofinnigan LCQ Advantage 离子阱质谱仪或者API Qster Pulsar质谱仪测 定
4、硅胶 G 200 300 目 及 GF254薄层层析硅胶板购自中 国青岛海洋化工厂 葡聚糖凝胶LH 20 为 Pharmacia 公司生 产 C 18 反相材料 40 63 m 为德国Merck 公司生产 D101大孔吸附树脂为日本MitsubishiChemical Corporation生产 显色剂为10 硫酸水溶液及碘 1 2 植物来源 印楝 Azadirachta indica 样品于 2009 年 5 月采自云南 省元谋县杀虫植物印楝栽培基地 系引自缅甸的品种 植物 标本由昆明植物研究所彭华研究员鉴定 标本 No KIB 20090502 存放于昆明植物所植物化学与西部植物资源可持
5、续利用国家重点实验室中国论文网 1 3 提取与分离 自然晾干的印楝枝叶 47 kg 粉碎后 于室温下用甲醇提 取 4 次 每次 140 L 甲醇提取 16 小时 合并提取液减压回 第 3 页 收溶剂 得到含水的粗提物 将粗提物用乙酸乙酯萃取后浓 缩得到 1250 g 萃取物 将萃取物硅利用硅胶色谱划分为4 个极性段 分别是纯氯仿段Fr A 146 g 50 1 氯仿 甲 醇段 Fr B 497 g 10 1 氯仿 甲醇段Fr C 157 g 及 4 1 氯仿 甲醇段Fr D 180 g Fr B用 D101大孔树脂 吸附甾体 20 甲醇水洗脱至流出液基本无色后用80 90 甲 醇水洗脱 收集合
6、并80 90 甲醇水洗脱液浓缩蒸干得303 g 胶状物 将其用1 5 倍量硅胶拌样 用7 倍量硅胶进行柱层 析 用石油醚 丙酮 1 0 1 1 系统洗脱分为油脂部分及 TLC检测合并后的4 个馏分 Fr 1 4 馏分 Fr 1 110 g 先 用反相划为3 段 55 甲醇水馏分Fr 1 1 70 甲醇水馏分 Fr 1 2及 90 甲醇水馏分Fr 1 3 再对各段用硅胶柱 200 300 目 石油醚 乙酸乙酯 氯仿 丙酮或氯仿 甲 醇梯度洗脱 和凝胶色谱 流动相为甲醇 反复层析 从 Fr 1 1 得到化合物1 6 8 g 2 5 9 g 3 940 mg 4 480 mg 甾体 5 390 mg
7、 从 Fr 1 2 得到化合物10 4 2 g 从 Fr 1 3 得到化合物6 40 mg 7 150 mg 8 95 mg Fr C用大孔树脂吸附 依次用30 80 甲醇水及甲醇洗 脱 将 80 甲醇水洗脱部分合并浓缩得65 g 胶状物 1 5 倍 硅胶拌样后10 倍硅胶上柱并用25 1 10 1 氯仿 甲醇系统 洗脱 TLC检测合并分为4 个馏分 Fr 5 8 对 Fr 7 19 g 反复用反相C 18 凝胶及硅胶柱 氯仿 丙酮和氯仿 甲醇 第 4 页 梯度洗脱 层析甾体 得到化合物9 6 mg 11 9 mg 15 85 mg 同样从馏分Fr 8 25 g 得到化合物12 72 mg 1
8、3 97 mg 14 31 mg 由于样品量较大 各馏分 间有重复 未进行全部分离 化合物所得重量不是绝对含量 2 研究结果 利用各种色谱方法从元谋栽培印楝枝叶中分离得到15 个不 同结构类型的化合物 并用NMR MS等技术手段鉴定了其结 构 化合物 1 C30H36O9 无色针晶 丙酮 甾体 ESIMS m z 563 M Na 1H NMR CDCl3 400MHz H 7 32 1H m H 21 7 23 1H m H 23 6 34 1H d J 10 1 Hz H 3 6 33 1H m H 22 5 88 1H d J 10 1Hz H 2 5 56 1H m H 15 5 21
9、 1H dd J 12 4 2 9 Hz H 6 4 04 1H d J 2 9 Hz H 7 3 73 3H s 28 OCH3 3 69 1H d J 12 4 Hz H 5 3 65 3H s 12 OCH3 2 04 3H s H Ac 1 66 3H d J 1 5 Hz H 18 1 35 3H s H 28 1 34 3H s H 29 1 28 3H s H 19 13CNMR CDCl3 100MHz 数据见表 1 中国论文网 其MS及 NMR 数 据与文献 6 报道的 nimbin 一致 化合物 2 C28H34O8 无色针晶 丙酮 其 NMR 数据与化合 物 1 十分相似
10、 比较可知其只是少了一个乙酰基 且与文献 6 报道的 6 deacetylnimbin一致 第 5 页 化合物 3 C26H32O6 无色针晶 丙酮 ESIMS m z 463 M Na 1H NMR CDCl3 400MHz H 7 32 1H m H 21 7 21 1H m H 23 6 37 1H m H 22 5 60 1H m H 3 5 46 1H m H 15 4 05 1H m H 6 4 01 1H m H 7 3 67 1H m H 17 3 59 3H s OCH3 2 91 1H d J 12 5 Hz H 5 2 05 3H s H 29 1 70 3H d J 1
11、 4 Hz H 18 1 33 3H s H 30 1 06 3H s H 19 13CNMR CDCl3 100MHz 数据见表 1 其 MS及 NMR 数据与文献 7 报道的 6 deacetylnimbine一致 化合物 4 C28H34O7 无色针晶 丙酮 与化合物3 十分相 似 比较可知其多了一个乙酰基 且与文献报道 7 的 nimbinene 一致 表 1 化合物 1 6 13C 数据 No 1 2 3 4 5 No 1 2 第 6 页 3 4 5 1 201 6 202 2 213 2 212 2 158 2 16 41 5 41 4 41 3 41 3 34 3 2 125 9
12、 126 4 39 9 39 8 125 4 17 第 7 页 49 4 49 6 49 5 49 4 51 5 3 147 6 148 1 119 1 120 0 204 6 18 12 8 12 8 12 8 12 8 20 6 4 47 9 47 7 138 6 136 7 第 8 页 44 1 19 16 6 17 1 21 7 21 6 19 0 5 41 5 43 6 47 2 43 0 46 1 20 126 8 126 8 126 7 126 124 5 6 68 6 66 1 第 9 页 66 3 69 1 23 7 21 139 0 138 9 138 9 138 8 13
13、9 6 7 84 5 86 9 86 3 85 1 74 4 22 110 4 110 4 110 3 110 4 111 0 8 第 10 页 47 0 47 3 47 2 47 7 42 7 23 143 0 143 0 143 0 143 0 142 5 9 38 5 39 0 37 1 36 9 38 6 28 174 6 175 5 21 3 10 第 11 页 48 0 47 4 49 4 49 3 39 9 29 17 2 16 4 14 0 14 2 27 0 11 34 2 34 3 33 6 33 5 16 4 30 16 7 17 5 17 4 17 1 第 12 页 2
14、7 3 12 173 6 173 6 173 6 173 5 32 9 Ac 170 6 170 6 170 1 13 135 1 134 9 134 8 135 1 47 1 Ac 21 0 21 1 21 1 14 第 13 页 146 1 146 7 147 2 146 3 158 8 12 OMe 51 7 51 6 51 6 51 6 15 87 1 87 4 88 0 86 8 119 0 28 OMe 53 1 53 0 化合物 5 C28H36O4 甾体 白色粉末 1H NMR CDCl3 400MHz H 7 25 1H m H 23 7 21 1H m H 21 7 15 1H d J 10 2 Hz H 1 6 27 1H d J 1 9 Hz H 22 第 14 页 5 84 1H d J 10 2 Hz H 2 5 37 1H dd J 3 2 1 5 Hz H 15 5 25 1H m H 7 2 19 1H dd J 13 1 2 2 Hz H 5 1 95 3H s H Ac 1 22 3H s H 30 1 19 3H s H 19 1 07 3H 2 s H 28 29 0 78 3H s H 18 13CNMR CDCl3 100MHz 数据见表 1 其 NMR 数据与文献 8 报道的 azadiradione一致
