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1、1热休克蛋白 70，90 在口腔鳞癌及癌前病变中的表达及意义作者：殷操，沈丽佳，谢思明，谢立群 【关键词】 热休克蛋白；HSP70 ；HSP90 ；口腔癌；口腔扁平苔藓【Abstract】 AIM: To detect the expression of heat shock protein 70, 90 (HSP 70, HSP 90) in oral squamous cell carcinoma (OSCC) and oral precancerous lesions and investigate the roles of HSP 70 and HSP 90. METHODS: SAB
2、C immunohistochemical methods were used to detect the expressions of HSP 70 and HSP 90 in 42 cases of OSCC, 22 cases of oral lichen planus(OLP), 20 cases of oral leukoplakia and 10 cases of normal oral mucosa. RESULTS: The rate of the positive or high expression of HSP70 in OLP was 91% (20/22), whic
3、h was remarkably higher than those of normal oral mucosa, oral leukoplakia and OSCC （P0.05）. The rates of positive or low expression of HSP90 in OLP and OSCC were 73%（16/22） and 70%（14/20）, respectively, which was significantly higher than those of oral normal mucosa and 2oral leukoplakia（P0.05）. CO
4、NCLUSION: Both HSP70 and HSP90 may play a role in oral lichen planus. HSP90 may be related with the pathogenesis of OSCC. 【Keywords】 Heat shock protein; HSP70; HSP90; oral cancer; oral lichen planus【摘要】 目的： 检测热休克蛋白 70，90 在口腔鳞癌及癌前病变中的表达情况，探讨其在口腔癌中的作用及其意义. 方法： 采用SABC 法免疫组化方法检测 42 例口腔鳞癌、22 例口腔扁平苔藓、20 例
5、口腔白斑、10 例正常黏膜中 HSP70，90 蛋白表达的情况. 结果： HSP70 在 OLP 组中主要以阳性和强阳性表达为主，占91%（20/22） ，明显高于正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组（P0.05） ；HSP90 在 OLP, OSCC 组中主要以弱阳性和阳性表达为主，分别占 73%（16/22）和 70%（ 14/20） ，明显高于正常组和口腔白斑组（P0.05 ）. 结论： HSP70，90 在口腔扁平苔藓中均起着一定的作用；同时 HSP90 可能还参与口腔鳞癌的发生和发展过程.【关键词】 热休克蛋白；HSP70 ；HSP90 ；口腔癌；口腔扁平苔藓30 引言热休克蛋白(heat
6、 shock protein, HSP)，是一类非常保守的蛋白质分子家族. 自从 20 世纪 80 年代确定 HSP 的序列和基因结构位点以来1 ，很多研究发现， HSP 在细胞保护、免疫应答、信号转导及调节凋亡等方面具有重要作用，还能诱导细胞毒 T 淋巴细胞活性，特异杀伤肿瘤细胞. 目前有关 HSP 在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）及癌前病变中的表达和作用的研究较少，为此，我们通过检测 HSP70 及 HSP90 在 OSCC 及其癌前病变中的表达，探讨 HSP70，90 在 OSCC 发生发展过程中的作用.1 材料和方法1.1 材料 1
7、999/2003 年本院手术及活检标本 94 例（患者术前均未采用化疗、放疗） ，其中正常口腔黏膜（normal oral mucosa， NOM）10 例，口腔扁平苔藓（oral lichen planus，OLP ）22 例，口腔白斑（oral leukoplakia，OLK）20 例，OSCC 共 42 例，按照其分化程度分为 I 级 20 例，II 级 12 例，III级 10 例. 所有标本均经 HE 染色，并经口腔病理专家确诊. 鼠抗人HSP70 mAb（浓缩型） 、鼠抗人 HSP90 mAb（浓缩型）均购自DAKO 公司，工作浓度分别为 1300和 1200. SABC 法试剂盒
8、4及 DAB 显色液均购自 DAKO 公司. 1.2 方法常规石蜡连续切片 4 m，常规脱蜡、梯度乙醇水化至水，微波修复，自然冷却至室温. 采用 SABC 法免疫组织化学染色，DAB 显色 35 min，苏木素复染 5 min，盐酸乙醇分化数秒，流水返蓝 15 min，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片. 用TBS 代替一抗作为空白对照，已知阳性片作阳性对照. 结果在光学显微镜下进行观察. HSP70 阳性定位于胞质及胞膜，HSP90 阳性定位于胞质，呈黄色或棕黄色颗粒. 采用双盲法统计实验结果. 随机选取 10 个高倍视野进行计数，计数阳性细胞所占的百分比，根据阳性细胞的比例分为以下四个
9、等级：75%为强阳性（）.统计学分析： 采用 SPSS12.0 统计软件包进行统计，因各组指标均为等级资料，故其组间的比较采用非参数秩和检验 Kruskal Wallis Test，检验水准取双侧 0.05. 2 结果2.1HSP70 的表达见表 1. HSP70 在口腔正常黏膜中以阳性表达为主，占 70%（7/10） ，主要表达在基底层及棘层；在 OLP 组中主要以阳性和强阳性为主，占 91%（20/22） ，主要表达在基底层及棘5层，固有层淋巴细胞和血管内皮细胞也有阳性表达（图 1A）. 在OLK 中以阳性和强阳性表达为主，占 90%（18/20 ）. OSCC 组中则以弱阳性和阳性表达为
10、主（图 1B） ，占 76%（32/42）. 各组间经非参数秩和检验 Kruskal Wallis Test， 2=17.348，P=0.0010.05，差异无统计学意义. 将这三组合并为非 OLP 组后与 OLP 组相比，2=12.948，P 0.0000.05，差异无统计学意义 .2.2HSP90 的表达见表 1. HSP90 在口腔正常黏膜中以阴性表达为主，占 70%（7/10） ；在 OLP 组中主要以阳性和弱阳性为主，占73%（16/22）. 在 OLK 组中主要以阴性和弱阳性表达为主（图1C） ，占 70%（14/20）. OSCC 组中则以弱阳性和阳性表达为主（图 1D） ，占
11、62%（26/42 ）. 各组间经非参数秩和检验 Kruskal Wallis Test， 211.233，P0.0110.05，差异无统计学意义. OLP 与 OSCC 相比，20.747，P0.3870.05，差异无统计学意义. 将 OLP 与 OSCC 合并成一组，NOM 与 OLK 合并成另一组后相比，29.149, P=0.0020.05，提示 HSP90在 OLP, OSCC 组中表达上调. OSCC 各级相比，27.066，P=0.0290.05 ，以 OSCC I 级表达较低，提示6HSP90 与 OSCC 分化程度有关.3 讨论生物细胞在受到各种理化因素刺激后发生应激反应，诱
12、导 HSP的合成. HSP 广泛存在于原核和真核 A：扁平苔藓 HSP70；B：口腔鳞癌 中 HSP70 阳性表达；C：口腔白斑 HSP90 弱阳性；D：口腔鳞癌 HSP90 阳性.图 1 口腔病变组织 HSP70，90 的阳性表达 SABC 400生物中，主要功能是在应激状态下保护细胞生命活动必需的蛋白质以维持细胞的生存. 目前认为 HSP70，表 1HSP70，90 在 OSCC及其癌前病变中的表达 90 与肿瘤的关系比较密切，有研究报道HSP70 和 90 表达对癌细胞的生长、分化有重要作用2 ，且其过表达与 OSCC 病理分化存在明显而稳定的关系3. 我们的研究表明 HSP70 在 N
13、OM, OLK 及 OSCC 中的表达无统计学差异，提示HSP70 在 OSCC 中可能不起作用. 但 HSP70 在 OLP 中表达上调，可在 OLP 上皮层连续着色或灶性着色，固有层浸润的淋巴细胞、血管内皮细胞也呈阳性表达，这可能是因为淋巴细胞的活化和浸润产生了大量的细胞因子，刺激 HSP70 的表达，从而对组织起着一定的7保护作用. 邸萍等4的研究也表明 HSP70 的表达上调发生在OLP 淋巴细胞浸润密集的周围区域，同时 RTPCR 的结果显示HSP70 mRNA 在 OLP 中表达增强，提示 HSP70 在 OLP 的发生中起着重要的作用. HSP90 家族是一类可溶性蛋白，能特异地
14、与多种细胞功能蛋白结合而改变其功能状态. 已发现在其他肿瘤中 HSP90与肿瘤的发生、发展、预后密切相关5-6. 我们的研究表明,HSP90 在 OLP 中表达上调，提示在 OLP 中除了 HSP70 外，还可通过刺激 HSP90 的表达来参与应激反应，对机体起到一定的保护作用. 同时我们的研究还表明 HSP90 在 OSCC 中的表达上调，并且与OSCC 的分化程度相关，在分化较低的癌细胞中表达上调，提示HSP90 在 OSCC 的发生发展过程中起着一定的作用. 有研究表明HSP90 能介导 Src 基因产物对底物的磷酸化，从而促进细胞的代谢和增殖，抑制肿瘤细胞的凋亡7 ，促进肿瘤的发生 .
15、综上所述，HSP70 可能在 OLP 中发挥着重要的作用，而HSP90 在 OLP, OSCC 中均起着一定的作用. 尚需进一步的研究来观察 HSP90 与 OSCC 患者预后、淋巴结转移之间的关系，为判断OSCC 患者的预后提供一个可供参考的指标.【参考文献】 1 Sorger PK. Heat shock factor is regulated differently 8in yeast and hela cellsJ. Nature, 1987,329:81-84. 2 白晓霞，王文栋，陈亚琼. 子宫内膜热休克蛋白 70 和 90表达与 ER 表达的关系J . 第四军医大学学报， 2002, 23（14）: 1337-1340. 3 Kaur J, Srivastava A，Ralhan R. Serem p53 antibodies in patients with oral lesions: Correlation with p53/HSP70 complexesJ . Int J Cancer, 1997,74(6)：609. 4 邸萍，高岩 . 热休克蛋白 60、7
