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1、淋巴细胞亚群检测的临床应用 检验科 梁红萍 2012 5 主要内容 l为何要检测 淋巴细胞亚群 l何时检测 l如何解读 l如何应用 肿瘤 自身免疫 感染 儿科 l案例分析 l标本要求 为何要检测 淋巴细胞亚群 关键词 免疫 拉丁文 免 免疫基本功能 识别自己与非己 动态平衡 免疫系统 由免疫器官 免疫细胞及免疫分子组成 遍布全身 相互制约的 网络 免疫相关疾病 应答过高 变态反应 过敏性疾病 四型 不平衡 应答不足 感染 肿瘤 放射病 血液病 免疫缺损症 自身组织应答 自身免疫疾病 SLE 类风湿性关节炎 免疫应答类型 二种 1 固有性免疫应答 识别多种病原体的共有成分 多糖 非特异性应答 机
2、械性防御机制 皮肤 粘膜 口腔 呼吸道 消化道 泌尿 体液免疫机制 补体系统 急性相蛋白 CRP等 吞噬细胞 单核 巨噬细胞 粒细胞 NK 肿瘤 病毒感染细胞 异源 ADCC 感染早期数分或96h内执行防卫 2 适应性免疫应答 识别特异的病原体 特异性应答 T及B淋巴细胞 感染后4 5天对识别的病原体进行杀伤清除 发生在固有 性免疫应答之后 B淋巴细胞针对细胞外的细菌病原体 引发吞噬作用 介导体液免疫 T淋巴细胞抵抗细胞内复制的病原体 病毒 结核菌 介导细胞免疫 T细胞与B细胞系统的特性 共性 产生记忆细胞 T细胞系统 cell mediated mmunity CMI B细胞系统 humor
3、al immunity 介导细胞免疫 自身分化效应细胞 来源于胸腺 巨噬细胞处理后的抗原识别 分两大类 细胞毒性T细胞 cytotoxic T cells CTL 和调节T细胞 regulatory T cells T reg Treg 辅助性T细胞Th 抑制 性T细胞Ts Th 识别特异性抗原 正反馈免疫调节 Th Th1 Th2 Th0 Ts 负反馈免疫调节 CTL 杀伤表达特异抗原的靶细胞 如病毒 结核菌等感染的靶细胞或肿瘤细胞 T细胞活化先天性免疫系统的防御机制 如 巨噬细胞 Th1 IFN 介导体液免疫 经Ab执行免疫功能 来源于骨髓 识别天然蛋白质抗原 增殖时需要T辅助细胞Th的刺
4、激 分化成浆细胞 合成抗原特异性抗体 发挥抗独特型抗体的免疫调节 防御细胞外病原体 细菌 以抗体介导 促使 巨噬细胞和补体系统活化 ADCC Th2 IL 4 IL 5 何时检测 淋巴细胞亚群 评价免疫功能 血常规 Ig 补体 淋巴细胞亚群 术前 新生儿筛查 原发性免疫缺陷病 体检 诊断免疫相关疾病 如HIV初筛有反应时 免疫治疗疗效观察 出现免疫功能低下症状时检测 1 经常感到疲劳 2 经常感冒 3 伤口容易感染 4 肠胃功能下降 自身保护能力差 5 易受到传染病的侵袭 6 精神萎靡 7 易昏睡 8 爱做梦 恶梦 9 身心憔悴 Sheep erythrocyte rosetter E ros
5、ettes for T cells Surface immunoglobulin sIg for B cells Surface immunoglobulin sIg for B cells 流式细胞仪检测原理流式细胞仪检测原理 流式细胞术的特点 z流式细胞术 利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或生物颗粒进行多参 数 快速的定量分析及分选的技术 z流式细胞术 细胞荧光化学技术 单克隆抗体技术 激光技术 流体力学 光 电测量技术 计算机技术 z测量速度快 最快可在1秒种内检测上万个细胞 z可进行多参数测量 可以对同一个细胞做有关物理 化学特性的多参数测 量 z具有明显的统计学意义 提供细胞群体的
6、均值和分布情况 z高分辨率 CV 2 高灵敏度 荧光检测灵敏度 100MESF 前向角散射光检 测灵敏度 0 2 0 5um z既是细胞分析技术 又是精确的分选技术 分选纯度可达99 以上 流式细胞术的应用使得过去应用E 玫瑰花结试验或EAC 花环 试验检测T或B淋巴细胞成为历史 应用抗CD cluster of differentiation CD 单抗将免疫细胞区分 得更细 更科学 更能描述免疫细胞的机能状态 由于流式细胞仪将静态的 显微镜下肉眼观察改为动态的 计算机信号处理 因此 在流式细胞仪上T细胞亚群统计方 式已从传统的荧光显微镜下计数200个细胞成为几秒钟内计 数上万个 因此 结果
7、更真实 更具有统计意义 淋巴细胞亚群流式术的基本内容 荧光染料标记的单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合 结合多色荧光 分析 即可以把各种不同功能的淋巴亚群区分开来 进而得到各亚群的 相对比例 淋巴细胞为CD45阳性 颗粒度较低的一群细胞 z淋巴细胞主要分为T淋巴细胞 CD3 B淋巴细胞 CD19 和 NK细 胞 CD16 56 zT淋巴细胞又分为 zT helper T inducer CD3 CD4 ThCD29 Ti CD45RA zT suppressor T cytotoxic CD3 CD8 TsCD28 Tc CD28 如何解读 淋巴细胞亚群 报告 解读原则 1 综合判断 CD4
8、CD8 CD4 CD8 初步评估机体免疫状态 快速便利 2 结合血常规结果 同时关注百分比和绝对数 3 当CD4 CD8 比例倒置时 一定要确认是CD4 细胞绝对数降低 还是CD8 细胞绝对数增加所致 两种情况的临床意义不同 4 CD3 CD19 CD16 56 100 5 如相差过于 悬殊 临床具有一定提示意义 研究表明感染和血液肿瘤最易出 现等式严重偏离 5 NK细胞 天然免疫系统的一个重要组成部分 约占外周血单核细胞的15 30 可通过非 MHC性限制性途径识别并在多数情况下杀伤被病毒感染细胞 HIV感染时 与CD4 T细胞计数相关 NK细胞的抗肿瘤免疫比T细胞的抗肿瘤免疫更重要 不明原
9、因流产患者 NK细胞数量与早孕组相比明显减少 6 避免将细胞表面标志和功能间的联系绝对化 原因 6 1 CD4 T细胞又分为Th1和Th2 Th1主要介导细胞免疫和炎症反应 涉及抗病毒 抗胞内寄生菌 和移植物排斥 Th2主要参于B细胞增殖 抗体产生和超敏反应性疾病 同时两者互为抑制 它们 在免疫调节中互相拮抗 起着十分微妙的作用 6 2己有研究表明确实存在CD4 杀伤T细胞 因而不能说CD4 T细胞一定发挥上调作用 解读原则 7 随着现代免疫学的发展 对T细胞表面标志及其生物学作用 的分子机制有了更深入的认识 鉴于T细胞功能亚群的传统分类 已不能反映真实情况 有必要淡化所谓辅助性T细胞 抑制性
10、T细 胞等的概念 实际上 无论是CD4 T细胞或CD8 T细胞 均包括可发挥正 负调节 即辅助或抑制 作用的功能亚群 8 与时俱进 解读原则 临临 床床 应应 用用 原发性免疫缺陷病 原发性免疫缺陷病 患者血液淋巴细胞免疫表型可出现多种异常 如患者血液淋巴细胞免疫表型可出现多种异常 如 严重联合免疫缺陷病 严重联合免疫缺陷病 SCIDSCID 时 时 T T淋巴细胞缺乏 淋巴细胞缺乏 X X连锁无丙种球蛋连锁无丙种球蛋 白血症 白血症 B B淋巴细胞数量缺乏或减少 淋巴细胞数量缺乏或减少 HIVHIV感染和感染和AIDSAIDS CD4 TCD4 T淋巴细胞是淋巴细胞是HIVHIV感染的主要细
11、胞 感染的主要细胞 CD4 TCD4 T淋巴淋巴 细胞计数用于评价细胞计数用于评价HIVHIV感染后免疫系统受损的程度 感染后免疫系统受损的程度 CD4 TCD4 T细胞细胞 下降 下降 CD8 TCD8 T细胞 细胞 HIVHIV感染早期增高 发展为感染早期增高 发展为AIDSAIDS时下降时下降 NKNK细胞 降低 特别是疾病晚期细胞 降低 特别是疾病晚期 免疫缺陷病免疫缺陷病 淋巴细胞数量减低 部分患者表现出与淋巴细胞数量减低 部分患者表现出与AIDSAIDS和部分晚和部分晚 期肿瘤患者相似的免疫功能状态 期肿瘤患者相似的免疫功能状态 研究发现 研究发现 SARSSARS患者淋巴细胞及其
12、各亚群均受到破坏 以患者淋巴细胞及其各亚群均受到破坏 以T T细胞细胞 受损为主 而且受损为主 而且CD4CD4细胞比细胞比CD8CD8细胞受损更为严重 细胞受损更为严重 治疗后病情好转或治愈后 治疗后病情好转或治愈后 T T淋巴细胞数量可逐渐恢淋巴细胞数量可逐渐恢 复正常 复正常 SARS SARS 活动期SLE患者外周血CD16 CD56 细胞百分率明显降低 SLE 强直性脊柱炎和类风湿性关节炎患者外周血CD4 细胞百分 率显著降低 CD8 细胞百分率显著升高 CD4 CD8比值降低或倒 置 治疗后患者CD4 细胞明显增加 CD8 细胞显著降低 CD4 CD8 比值显著升高 SLE患者活动
13、期和非活动期的淋巴细胞亚群结果有显著差异 强直性脊柱炎和类风湿性关节炎患者活动期和非活动期的淋巴细 胞亚群结果无显著差异 自身免疫疾病自身免疫疾病 干细胞移植后免疫系统将重建 但是极为干细胞移植后免疫系统将重建 但是极为 缓慢 缓慢 NKNK细胞首先开始升高 随后细胞首先开始升高 随后T T B B淋巴细胞开始淋巴细胞开始 恢复 恢复 CD4 CD4 比比CD8 CD8 重建更晚 重建更晚 倒置倒置CD4 CD8 CD4 CD8 两年才能逆转两年才能逆转 造血干细胞移植后重建造血干细胞移植后重建 排斥反应和排斥反应和免疫抑制剂治疗监测 免疫抑制剂治疗监测 CD4 CD8CD4 CD8低于低于0
14、 2 0 2 则停止使用免疫抑制剂 则停止使用免疫抑制剂 若若CD4 CD8CD4 CD8过高 则提示容易发生排斥反应过高 则提示容易发生排斥反应 器官移植后免疫监测器官移植后免疫监测 恶性肿瘤治疗前恶性肿瘤治疗前CD3 CD3 细胞数量 细胞数量 CD4 CD8 CD4 CD8 细胞比细胞比 值降低 化疗或放疗有效时则可逐渐恢复或达到值降低 化疗或放疗有效时则可逐渐恢复或达到 正常水平 正常水平 癌转移时 癌转移时 CD3CD3 CD4CD4明显减少 明显减少 CD8CD8明显增多 明显增多 CD4 CD8CD4 CD8明显减少明显减少 肿瘤终末期肿瘤终末期CD4 CD8CD4 CD8比值
15、可预测患者存活比值 可预测患者存活期期 实体肿瘤疗效观察实体肿瘤疗效观察 病毒性感染的重要标志 1 艾滋病 免疫功能普遍低下是艾滋病患者最明显的特征 CD4 细胞显著低于正常对照组 而CD8 细胞正常 CD4 CD8 比值下降 2 慢性乙肝患者 CD3 CD4 CD8均下降 CD4 CD8正常 表明患者T细胞辅助性 杀伤性功能下降 引起病毒清除困难 导致慢性迁延性肝损伤 3 慢活肝 肝硬化患者 CD3 CD4下降 CD8增高 CD4 CD8下降 患者免疫自稳功能下降 从而引起自身免疫损 伤 肝细胞持续性 大量损伤 4 传染性单核细胞增多症 巨细胞病毒感染 流行性出血热 麻疹急性期 水痘 猩红热
16、和一些上呼吸道感染患者均可表现 CD4下降 CD8升高能及CD4 CD8比值下降 牛皮癣 牛皮癣患者血液中T淋巴细胞各亚群的数量常无明显的 差别 但患者皮肤病变的部位浸润淋巴细胞却以辅助 诱导性 T细胞 TH 占优势 案 例 分 析 1 1 邢某 男 左上肺癌邢某 男 左上肺癌 20102010年年1 1月月1515日入院检测 日入院检测 CD3 CD4 CD8 B NKCD3 CD4 CD8 B NK 51 20 26 12 21 51 20 26 12 21 2010 2010年年3 3月月2222日出院检测 日出院检测 CD3 CD4 CD8 B NKCD3 CD4 CD8 B NK 55 27 24 11 18 55 27 24 11 18 1 1 邢某 男 左上肺癌邢某 男 左上肺癌 20102010年年1 1月月1515日入院检测 日入院检测 CD3 CD4 CD8 B NKCD3 CD4 CD8 B NK 51 20 26 12 21 51 20 26 12 21 2010 2010年年3 3月月2222日出院检测 日出院检测 CD3 CD4 CD8 B NKCD3 CD
