《年高中生物无菌操作和接种技术及微生物的分离、培养与数量测定同步教案苏教版选修》由会员分享，可在线阅读，更多相关《年高中生物无菌操作和接种技术及微生物的分离、培养与数量测定同步教案苏教版选修（71页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 二 无菌操作和接种技术术及微生物的分离 培养与数量测测定 学习导习导 航 1 学会无菌操作和接种技术 重点 2 研究培养基对微生物的选择作用 重点 3 了解平板分离微生物的方法和计数 重点 4 简述从土壤中分离出分解纤维素的微生物的 方法 难点 新知初探 思维启动 无菌 培养基 玻璃刮铲铲 穿刺 平板划线线 2 无菌操作 微生物接种技术术的关键键 1 培养微生物用的试试管 培养皿和微生物培 养基等 在接种之前都需要 2 通常接种操作要在 的附近 进进行 灭灭菌 酒精灯火焰 1 在微生物的培养过过程中为为什么要进进行无 菌操作 提示 无菌操作的目的是防止受到空气中的 杂杂菌污污染 想一想 二
2、微生物的分离 1 原理 根据微生物对对 氧气 pH等要求的不同 通过过只提供目的微生物生 长长的 条件 或加入某些抑制剂剂使非目 的微生物不能生长长 从而达到 微生物的目的 2 方法 1 据菌落形态态特征初步分离 营营养成分 必需 选择选择 分离 菌落 微生物在适宜的 培 养基表面或内部生长长 繁殖到一定程度 可 以形成肉眼可见见的 有一定 的子 细细胞生长长群体 当固体培养基表面众多菌落 连连成一片时时 称为为 菌落特征 不同微生物在 培养基 上生长长形成的菌落或菌苔一般都具有稳稳定的 特征 可以成为对该类为对该类 微生物进进行 的重要依据 单单个 固体 形态结态结 构 菌苔 特定 分类类
3、鉴鉴定 涂抹平板法 平板划线线法 单单个 1 使用已灭菌的接种环 培养基 操作过程中不 再灭菌 2 富含有机物的土壤中微生物的种类和数量少 反之则多 3 菌落是肉眼鉴别微生物不同种类的重要依据 4 稀释涂抹平板法的结果都可在培养基表面形成 单个的菌落 判一判 三 土壤微生物的分离和计计数 1 准备实验备实验 器材 2 采集土壤 制备悬备悬 液 1 制备悬备悬 液 称取0 5 g土壤样样品 倒入盛有50 mL无菌水的 锥锥形瓶 振荡荡20 min 使土样样充分打散 即 成为为10 2 g mL的土壤悬悬液 2 等比稀释释 用无菌移液管吸取0 5 mL土壤悬悬液注入盛有 4 5 mL 的1号试试管
4、 配成10 3 g mL 的土壤悬悬液 取另一支无菌移液管吹吸1号试试 管3次 使悬悬液均匀 再吸取0 5 mL注入盛有 4 5 mL无菌水的2号试试管 配成10 4 g mL的 土壤悬悬液 以此类类推 依次配制成10 5 g mL 10 6 g mL 10 7 g mL 10 8 g mL的土 壤悬悬液 无菌水 3 选择选择 适于分离特定微生物的培养基 不同微生物的代谢谢特性不同 通过过 可选选出所需要的特定微生物 4 接种 采用3支无菌移液管分别别吸取10 8 g mL 10 7 g mL 10 6 g mL的土壤悬悬液各1 mL加入培养 皿中 每个浓浓度设设置 个重复 并充分振 荡荡混合
5、均匀 用 平板法进进行分离 选择选择 培养基 3 涂抹 5 培养与观观察 将培养皿倒置于 恒温箱中培养1 2 d 观观察细细菌菌落 6 计计数菌落 培养24 48 h后取出平板计计数 选选取菌落数 为为30 300的一组为组为 代表进进行统计统计 每克土壤样样品的细细菌数 某一稀释释度几次重 复培养后的菌落平均数 稀释释倍数 假定涂抹 所用稀释释液为为1 mL 37 2 A同学分离与培养土壤微生物时时与其他同 学的结结果相差很大 请请分析可能的原因是什 么 并进进一步通过对过对 照实验验证实验验证 原因 想一想 可能原 因 实验验证实验验证结论结论 所取土 样样不同 其他同学用与 A同学一样样
6、的 土样进样进 行实验实验 若结结果与A同学的一致 则说则说 明土样样没问题问题 若 结结果与A同学的不一致 则说则说 明A同学操作失误误 或培养基配制有问题问题 培养基 污污染或 操作失 误误 将A同学配制 的培养基在不 加土样样的情况 下进进行培养 作空白对对照 若有菌落出现现 则说则说 明 培养基被污污染 若无菌 落出现现 则说则说 明未被污污 染 提示 四 设计实验设计实验 分离土壤中能分解纤维纤维 素的微生 物 1 研究目的 从土壤微生物中筛选筛选 出能分解纤维纤维 素的微生物 2 实验实验 原理 纤维纤维 素分解菌可以分泌 在用 作为为惟一碳源的培养基中 纤维纤维 素分 解菌能很好
7、地生长长 其他微生物则则不能生长长 纤维纤维 素酶 纤维纤维 素 3 方法步骤骤 1 制备选择备选择 培养基 培养基中提供碳源的物 质质只有 2 分装 3 制备备土壤稀释释液 依次制备备稀释释度为为10 1 10 2 10 3 10 4 10 5的土壤稀释释液 纤维纤维 素 4 接种培养 分别别吸取各稀释释度的土壤稀释释液 1 mL接种到滤纸滤纸 条上 每个稀释释度重复4次 置 中培养 5 观观察 检查检查 各试试管中滤纸滤纸 条上出现现的 和滤纸颜滤纸颜 色的变变化情况 培养箱 菌落 3 在等比稀释释的过过程中如何使微生物在菌液中 均匀分布 你认为计认为计 数的菌落与实际实际 菌落之间间 存
8、在什么样样的关系 提示 每次吸取前都要将土壤悬悬液充分振荡荡混 合均匀 实际实际 菌落数目大于计计数的菌落数目 想一想 要点突破 讲练互动 要点一要点一无菌操作 1 无菌技术术的概念 防止一切外来杂杂菌的侵入 并保持灭灭菌物品及无菌区域不再被污污染的方法 称为为无菌技术术 2 无菌技术的具体内容 1 对实验操作的空间 操作者的衣着和手进 行清洁和消毒 2 将用于微生物培养的器皿 接种用具和培 养基等进行灭菌 3 实验操作应在酒精灯火焰附近进行 以避 免周围环境中微生物的污染 4 实验操作时应避免已灭菌处理的材料用具 与周围物品接触 特别提醒 在微生物的实验室培养中 无菌技术的核心 是防止杂菌污
9、染 保证培养物的纯度 细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽灭 菌锅 酒精 火焰灼烧等几种不同的处理 这 些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌 A 接种环 手 培养基 B 高压锅 手 接种环 C 培养基 手 接种环 D 接种环 手 高压锅 例例1 1 解析 此题题考查查学生对对无菌技术术的掌握 高压压蒸汽灭灭菌锅锅是灭灭菌的一个设备设备 通常用于 培养基的灭灭菌 用酒精擦拭双手是消毒的一种 方法 火焰灼烧烧可以迅速彻彻底地灭灭菌 适用于 微生物的接种工具 如接种环环 答案 C 1 下列操作错误的是 A 用酒精擦拭双手 B 用氯气消毒水源 C 实验室用紫外线进行消毒 D 玻璃器皿 吸管 培养皿 用酒精直接
10、擦拭 即可达到彻底灭菌的目的 变变式训练训练 解析 选选D 玻璃器皿 金属用具等耐高温 需要保持干燥的物品 应应采用干热灭热灭 菌法进进 行灭灭菌 而用酒精直接擦拭达不到彻彻底灭灭菌 的目的 1 原理 大多数细菌 许多真菌和单细胞藻 类能在固体培养基上形成孤立的菌落 平板 分离法能将单个微生物分离和固定在固体培 养基表面或里面 每个孤立的活微生物体经 过生长 繁殖均可形成便于移植的菌落 要点二要点二 平板分离法 2 常用培养基 最常用的分离 培养微生物的固体培养 基是琼脂固体培养基 3 方法 1 涂抹平板法 分离材料进行10倍系列稀释 取一定稀释度样品倒入预先准备好的琼脂平板 用无菌 玻璃刮铲
11、将样品涂布均匀 细菌菌落常仅在平板表面生 长 2 混合平板法 分离材料进行10倍系列稀释 取一定稀 释度样品与溶化的琼脂混合 将与样品混合的琼脂倒入 无菌平皿 细菌菌落出现在平板表面及内部 3 平板划线法 有扇形划线 连续划线 方格划 线等 4 目的 通过采用各种平板分离法在培养基上得到 目的微生物的单个菌落 1 灭菌后的接种环须冷却后再挑取菌种 否则会 杀死菌种 2 整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行 避免杂 菌污染 3 划线时用力大小要适当 防止用力过大使培养 基划破 2012 盐城高二检测 下图是微生物平板 划线示意图 划线的顺序为1 2 3 4 5 下 列操作方法正确的是 A 操作前要将
12、接种环放在火焰旁边灼烧灭菌 B 划线操作要在火焰上进行 C 在5区域中才可以得到所需菌落 D 在1 2 3 4 5区域中划线前后都要对接 种环灭菌 例例2 2 解析 操作前要将接种环环放在酒精灯的 外焰灼烧进烧进 行灭灭菌 整个操作过过程要在酒精 灯旁进进行 1 2 3 4 5这这五个区域都可 能有所需菌落 在每次画线线前对对接种环环灼烧烧 是为为了杀杀死上次画线结线结 束后接种环环上残留的 菌种 画线结线结 束后对对接种环灭环灭 菌是为为了杀杀 死接种环环上残留的菌种 避免细细菌污污染环环境 和感染操作者 答案 D 变式训练 2 有关稀释涂抹平板法的叙述 错误的是 A 首先将菌液进行一系列的
13、梯度稀释 B 然后将不同稀释度的菌液分别涂抹到琼脂 固体培养基的表面 C 适宜条件下培养 D 结果都可在培养基表面形成单个的菌落 解析 选选D 稀释释涂抹平板法是将菌液进进行一 系列的梯度稀释释 然后将不同稀释释度的菌液分 别别涂抹到琼琼脂固体培养基的表面 在适宜条件 下培养 只有在稀释释度足够够高的菌液里 聚集 在一起的微生物将被分散成单单个细细胞 从而能 在培养基表面形成单单个的菌落 要点三要点三 菌落数目的统计统计 方法 1 显微镜直接计数法 1 原理 此法利用特定细菌计数板或血细胞 计数板 在显微镜下计算一定容积的样品中 微生物的数量 2 方法 用计数板计数 计数板是特制的载玻 片 其
14、上有特定的面积为1 mm2 高为0 1 mm的 计数室 一个计数室又被分成25个 或16个 中 格 每个中格再被划分成16个 或25个 小格 每 个计数室都由400个小格组成 3 操作 将稀释的样品滴在计数板上 盖上盖 玻片 然后在显微镜下计数4 5个中格中的细 菌数 并求出每个小格所含细菌的平均数 再 按计算公式求出每毫升样品中所含的细菌数 4 计算公式 每毫升原液所含细菌数 每小格平均细菌数 400 10000 稀释倍数 5 缺点 不能区分死菌与活菌 2 间接计数法 活菌计数法 1 原理 当样品的稀释度足够高时 培养基 表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的 一个活菌 通过统计平板上的菌
15、落数 就能推 测出样品中大约含有多少活菌 2 操作 设置重复组 增强实验的说服力与准确性 将待测样品经一系列10倍稀释 然后选择三个 稀释度的菌液 分别取0 1 mL接种到已制备好 的平板上 然后用无菌涂布器将菌液涂布在整 个平板表面 放在适宜的温度下培养计数菌落 数 为使结果接近真实值 可将同一稀释度菌 液加到三个或三个以上的平板上 经涂布 培 养 计算出菌落平均数 为了保证结果准确 一般选择菌落数在30 300的平板进行计数 若设置的重复组中结果 相差太远 意味着操作有误 需重新实验 3 滤膜法 1 实例 测定饮用水中大肠杆菌的数目 2 过程 将已知体积的水过滤后 将滤膜放于 伊红 美蓝培
16、养基上培养 在该培养基上 大 肠杆菌菌落呈现绿色 并带有金属光泽可根据 培养基上绿色的菌落数目 计算出水样中大肠 杆菌的数量 特别提醒 统计菌落数目的注意事项 一般选择菌落数在30 300的平板进行计数 统计的菌落数往往比活菌的实际数目低 统计结果一般用菌落数而不是用活菌数表示 设置对照 目的是排除实验组中无关因素对实 验结果的影响 提高实验结果的可信度 下列是关于检测土壤中细菌总数实验操 作的叙述 其中错误的是 A 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基 经高 温 高压灭菌后倒平板 B 取104 105 106倍的土壤稀释液和无菌水 各0 1 mL 分别涂布于各组平板上 C 将实验组和对照组平板倒置 37 恒温培 养24 48小时 D 确定对照组无菌后 选择菌落数在300以上 的实验组平板进行计数 例例3 3 思路点拨拨 本题题主要考查统计查统计 菌落数目 的方法 解答本题题需从以下几点入手 区分实验材料的灭菌方法 理解空白对照在菌落计数实验中的作用 明确菌落计数的选择范围 解析 本题题考查查的是土壤微生物总总数的 计计数 所以培养所使用的培养基就应该应该 是基 本培养基 并要经过经过 高压
