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1、1正交设计法优选桑白皮总黄酮的提取工艺【关键词】桑白皮;总黄酮; 正交设计;提取工艺 桑白皮是桑科植物桑(MorusalbaL.)的干燥根皮，为一常用中药，性甘、寒，归肺经，具有泻肺平喘、利水消肿功能，主治肺热喘咳、水肿胀满尿少、面目肌肤浮肿。近年来，国内外学者对桑白皮的药理活性进行了大量研究，并找到了一系列有效成分。桑白皮主要含多种黄酮类成分，包括桑酮、桑酮醇、桑根酮、桑根酮醇、桑素、桑皮根素等。文献报道其总黄酮具有利尿、降压、降糖、镇痛、镇静、抗癌及抗 HIV 等作用 1。桑白皮中总黄酮的提取方法主要有传统的水煮法、醇提法及微波辅助萃取法等方法2，3 。为了有效开发和利用资源，本文采用正交
2、实验对桑白皮总黄酮的提取工艺进行了研究。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 TU1900 紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)。SHB 循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。无水乙醇 AR;三氯化铝 AR;醋酸钠 AR;芦丁(购于中国药品生物制品检定所);桑白皮购于药材市场。 1.2 方法 1.2.1 样品提取：精密称取 5.0g 桑白皮粗粉 9 份，置于250ml 圆底烧瓶中，按表 1 和表 2 选择的因素水平在 50 下进行回流提取，趁热过滤，洗涤残渣，收集在 100ml 容量瓶中，用 60%的2乙醇定容，作为供试品溶液。 1.2.2 总黄酮含量测定 1.2.2.1 标
3、准曲线的制作：精密称取芦丁对照品 10mg，置于100ml 的容量瓶中，加 60%乙醇至刻度，摇匀，即得芦丁储备液(0.10mg/ml)。分别精密吸取芦丁储备液(0.10mg/ml)0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml 于 25ml 容量瓶中，加60%乙醇补充至 6ml，分别加入 2ml(0.1mol/L)三氯化铝溶液，3ml(1mol/ml)醋酸钠溶液，用 60%乙醇稀释到刻度，摇匀，放置30min，以试剂作空白参比液，于 417nm 处测吸光度。测定结果用最小二乘法作线性回归，吸光度(A)与浓度(C)之间的回归方程A=0.0327C-0.0208(r=0.9999
4、)，线性范围为10.0050.00g/ml。 1.2.2.2 样品中总黄酮含量的测定：精密量取供试品溶液3ml，置 10ml 容量瓶中，自“加 60%乙醇补充至 6ml”起，按“1.2.2.1”项下操作，测定吸光度，由回归方程计算样品溶液的浓度及黄酮含量，结果见表 2。 1.2.3 正交试验设计与结果：主要对乙醇浓度(A)、乙醇用量(B)、提取时间(C)及提取次数(D)等 4 个因素进行四因素三水平L9(34)正交试验，考察因素和水平见表 1，结果见表 2。表 1 因素水平表水平因素 A/%B/倍 C/hD/次表 2 正交实验设计及结果由表2 中极差 R 值可知，在桑白皮总黄酮的提取工艺中，各
5、因素对提取效果的影响程度为 DABC。即提取次数乙醇浓度3乙醇用量提取时间。从表 2 中 K 值大小可看出，A2B2C1D3 为最佳工艺，即桑白皮加 10 倍 60%的乙醇，在 50回流提取三次，每次 1h。 1.2.4 最佳工艺的验证试验：为考察上述最佳工艺的稳定性，按该工艺条件进行重复试验 3 次，测得桑白皮总黄酮的平均提取率为 1.78mg/g。2 讨论 2.1 提取方法的选择黄酮类化合物一般采用极性较大的溶剂进行提取(如甲醇、乙醇、水等)4，故从节约时间、成本和可行性角度出发，通过预实验比较了水煎、回流和超声 3 种方法的提取效率，结果显示乙醇回流提取方法较好。 2.2 对照品的选择由
6、于芦丁亦为黄酮类化合物，且经显色后的吸收图谱在 417nm 左右出现最大吸收，故采用芦丁作为对照品测定桑白皮总黄酮的含量。实验表明，该测定方法稳定性好，精密度高。 2.3 通过正交试验，确定回流提取桑白皮总黄酮最佳工艺为：将 5g 桑白皮粉末，在 50 用 50ml60%的乙醇回流提取 1h，提取3 次。这时桑白皮总黄酮的得率为 1.78mg/g。 2.4 本次实验选择了对总黄酮提取影响较大的乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和提取次数为 4 个主要因素，其中提取次数影响最大，为最显著因子，其次为乙醇浓度和乙醇用量，提取时间影响最小。所以，实际生产中为可适当缩短提取时间，减少乙醇用量，以提高效率，节约成本。 4该提取工艺相对于其他工艺稳定性好，操作简便，成本低，为进一步开发提供了参考。 【参考文献】 1张明发,沈雅琴 .桑白皮的药理研究进展J.上海医药，2006,27(4)：164. 2张国刚，黎琼红，李乐道，等.桑白皮中总黄酮提取工艺研究J.中草药，2005，36(11)：1662. 3陈菁菁，李向荣.微波萃取法提取桑叶和桑白皮的黄酮类成分J.中药材，2006，29(10)：1090. 4姚新生.天然药物化学 M.第 3 版.北京: 人民卫生出版社.2002:178.
