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1、2 2 动物细胞工程 生产单克隆抗体等 动物细胞工程常用的技术 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 是其他动物细胞工程技术的基础 为什么要进行动物细胞培养 一 动物细胞培养 如何进行细胞培养 2 2 1动物细胞培养和核移植技术 从动物机体中取出相关组织 将它们分散成单个 细胞 然后放在适宜的培养基中 让这些细胞生长 和增殖 一 概念 实验材料 药性 毒性检测 提取细胞分泌物等实验材料 药性 毒性检测 提取细胞分泌物等 1 进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分 散细胞 说明细胞间的物质主要是什么成分 用胃蛋白酶行吗 P44旁栏 提示 用胰蛋白酶分散细胞 说明细胞间的物质主 要是蛋白质 胃蛋
2、白酶作用的适宜pH约为2 当pH 大于6时 胃蛋白酶就会失去活性 胰蛋白酶作用 的适宜环境pH为7 2 8 4 多数动物细胞培养的适 宜pH为7 2 7 4 胃蛋白酶在此环境中没有活性 而胰蛋白酶在此环境中活性较高 因此胰蛋白酶适 宜用于细胞培养时的消化 胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗 为什么 P44寻根问底 提示 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外 长 时间的作用也会消化细胞膜蛋白 对细胞有损伤作 用 因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间 二 动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬液 10代细胞 50代细胞 剪碎 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 洗涤 稀释 分离 原代培养 用胰蛋白酶分散 细胞
3、 说明细胞 间的物质主要是 蛋白质 动物细 胞培养适宜的PH 为7 2 7 4 此 环境下胃蛋白酶 2 0 没有活 性 而胰蛋白酶 7 2 8 4 的活 性较高 比老龄动 物的组织 细胞增殖 能力强 有丝分裂 旺盛 分 化程度越 低 繁殖 能力越强 越容易 培养 动物细胞培养 不能最终培养 成生物体 细胞增殖 缓慢 核 型可能变 化 动物组织细胞间隙中含有一 定量的弹性纤维等蛋白质 将细胞网络起来形成具有一 定弹性和韧性的组织和器官 贴壁生长 接触抑制 10代以内 保持正常二倍体核型 传代培养 动物组织块动物组织块 细胞悬液细胞悬液 原代培养原代培养 传代培养传代培养 胰蛋白酶处理分散成单个细
4、胞胰蛋白酶处理分散成单个细胞 幼龄动物的器官组织 动物胚胎幼龄动物的器官组织 动物胚胎 细胞贴壁细胞贴壁 接触抑制接触抑制 原代培养原代培养 传代培养传代培养 加入培养液加入培养液 用胰蛋白酶等用胰蛋白酶等 处理贴壁细胞处理贴壁细胞 适宜条件适宜条件 不死性细胞不死性细胞 细胞 悬浮 液 10代 细胞 50代 细胞 无限传 代 原代培养 一般 传代培养 原代培养和传代培养 细胞株和细胞系 多数组织细胞固定在表面 生长和分裂 叫做 随细胞增多 细胞就会停止分裂增殖 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中 根据你所学的内环境的知识 思考以下问题 1 体外培养细胞时需要提供哪些物质 2 体外培养的细
5、胞需要什么样的环境条件 P46讨 论 充足营养 糖 氨基酸 促生长因子 无机盐 微量元 素等合成成分及血清 血浆等天然成分 适宜温度 PH和气体环境 无菌无毒环境 三 动物细胞培养的条件P46 1 无菌 无毒环境 无菌处理 和添加抗生素目的 更换培养液 的好处 2 营养与体内相同 合成培养基 糖 氨基酸 促生长因子 无机盐 微量元素 等 通常需加入血清 血浆等一些天然成 分 3 温度和PH 36 37 7 2 7 4 4 气体环境95 空气 5 CO2 维持培养液PH 植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目植物组织培养动物细胞培养 原理细胞的全能性细胞增殖 培养基性质固体培养基液体培养基
6、培养基特有成分蔗糖 植物激素葡萄糖 动物血清 培养结果植物体细胞株 细胞系 培养目的快速繁殖 培育 无病毒植株 获得细胞或细胞 分泌蛋白 对比 动物细胞培养 植物组织培养 植物组织培养技术植物组织培养技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术 原理原理 培养基培养基 结果结果 分散处理分散处理 脱分化脱分化 细胞全能性细胞全能性细胞有丝分裂细胞有丝分裂 固体固体 营养物质营养物质 激素激素液体液体 营养物质营养物质 血清血清等等 完整植株完整植株细胞群或细胞产物细胞群或细胞产物 无无有有 有有 无无 植物植物组织组织培养技术是植物细胞工程技术的基础 培养技术是植物细胞工程技术的基础 动物动物细胞细胞
7、培养技术是动物细胞工程技术的基础 培养技术是动物细胞工程技术的基础 复习复习植物细胞工程植物细胞工程和和动物细胞工程的部分内容动物细胞工程的部分内容 P47最上面 1 大规模的生产生物制品 2 培养的动物细胞作为基因工程的受体 细胞 3 检测判断物质的毒性 4 培养正常或各种病变的细胞 用于生 理 病理 药理等方面的研究 如用于 等 为 及其 他疾病提供理论依据 四 动物细胞培养技术的应用 筛选抗癌药物治疗和预防癌症 1 关于动物细胞培养的有关叙述中正确的是 A 细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的 过渡过程中 B 动物细胞培养液中通常含有葡萄糖 氨基 酸 无机盐 生长素和动物血清 C 动物细
8、胞培养的目的只是获得大量的细胞 分泌蛋白 D 动物细胞培养前和培养过程中都需要用胰 蛋白酶处理 相互接触 接触抑制 单层 胰蛋白酶 衰老或死亡 不死性 降低 减少 活细胞的膜具有 选择透过性 大分子染料不能进入细胞 故不染色 中 低温 新陈代谢 酶 抗原 二 动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核 移入一个已 经去掉细胞核的卵母细胞中 使其重组并 发育成为一个新的胚胎 这个新的胚胎最 终发育为动物个体 克隆动物 分 类 胚胎细胞核移植 体细胞核移植 细胞分化程度低 恢复全能性容易 细胞分化程度高 恢复全能性不容易 一 动物细胞核移植概念 二 体细胞核移植的过程 请看教材P48图2 2
9、1 思考 1 核移植的受体细胞是什么 处在什么时期 用此细 胞作为受体细胞有什么好处 2 通过什么手段激活受体细胞 构建重组胚胎 M 中期卵母细胞 诱导方法 物理或化学方法激活受体细胞 完成 细胞分裂和发育进程 卵母细胞体积大 便于操作 含有营养物质丰富 提供早期胚胎发育所需的营养 含有激活细胞核体 现全能性的物质 电激处理使供电激处理使供 体核进入受体体核进入受体 卵母细胞构建卵母细胞构建 重组胚胎重组胚胎 卵母细胞采集 培养卵母细胞采集 培养 MM 期期卵母细胞卵母细胞 供体牛供体牛 供体细胞注入供体细胞注入 去核卵母细胞去核卵母细胞 代孕母牛代孕母牛克隆牛克隆牛 体细胞培养体细胞培养 去
10、核卵母细胞去核卵母细胞 去核去核 胚胎胚胎 移植移植 体细胞核移植过程体细胞核移植过程 体细胞克隆动物 体细胞克隆动物 整个过程用了哪些技术 细胞培养 核移植 胚胎移植 新生牛的性别 基因 与供体相同 繁殖方式 无性繁殖 原理 动物细胞核的全能性 二 体细胞核移植的过程 母绵羊A 乳腺细胞 体细胞 母绵羊B 未受精的 卵细胞 母绵羊C 多莉 新的卵细胞发育成早期胚胎 去核卵细胞 提取细胞核 核移植 胚胎移植 体细胞核移植技术体细胞核移植技术 克隆羊克隆羊 步骤一 从一只6岁芬兰多塞特白面母绵羊 姑且称为A 的乳腺中取出乳腺细胞 将其放入低浓度的营养培养液 中 细胞逐渐停止分裂 此细胞称之为 供
11、体细胞 步骤二 从一头苏格兰黑面母绵羊 B 的卵巢中取出未 受精的卵细胞 并立即将细胞核除去 留下一个无核的卵 细胞 此细胞称之为 受体细胞 步骤三 利用电脉冲方法 使供体细胞和受体细胞融合 最后形成 融合细胞 电脉冲可以产生类似于自然受精过 程中的一系列反应 使融合细胞也能像受精卵一样进行细 胞分裂 分化 从而形成 胚胎细胞 步骤四 将胚胎细胞转移到另一只苏格兰黑面母绵羊 C 的子宫内 胚胎细胞进一步分化和发育 最后形成小绵 羊 多莉 换言之 多莉有3个母亲 基因母亲 提供基因组 线粒 体母亲 提供去核卵细胞 代孕母亲 将多莉生下来 有 意思的是虽然有三个母亲但多莉没有父亲 P49讨论 1
12、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之 前 为什么必须先去掉受体卵母细胞的核 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部 来自有重要利用价值的动物提供的体细胞 在 供体细胞的细胞核移至受体细胞之前 必须将 受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏 P49小资料 培养的动物细胞一般当传代至10 50代左 右时 部分细胞核型可能会发生变化 其细胞 遗传物质可能会发生突变 而10代以内的细胞 一般能保持正常的二倍体核型 因此 在体细 胞核移植中 为了保证供体细胞正常的遗传基 础 通常采用传代10代以内的细胞 2 用于核移植的供体细胞一般都选用传代10 代以内的细胞 想一想 这是为什么 3 你认为用上述体细胞核移植方
13、法生产的克隆动 物 是对体细胞供体动物进行了100 的复制吗 为什么 绝大部分DNA来自于供体细胞核 但其核外还有 少量的DNA 即线粒体中的DNA是来自于受体卵 母细胞 此外 即便动物的遗传基础完全相同 但动物的 一些行为 习性的形成与所处环境有很大关系 核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境 不会完全相同 其形成的行为 习性也不可能和 核供体动物完全相同 从这一角度看 克隆动物 不会是核供体动物100 的复制 三 体细胞核移植技术的应用前景 1 在畜牧业中 可以加速家畜遗 传改良的进程 2 保护濒危物种 3 医药卫生领 域生产医用蛋白 质及组织器官的 移植 4 了解胚胎发育和 衰老过程
14、 追踪研 究疾病的发展过程 和治疗疾病 阅读课本P50页 四 体细胞核移植技术存在的问题 思考与探究 1 幼龄与老龄动物的组织细胞比较 分化程度低的 与分化程度高的组织细胞比较 哪一种更易于培养 思考一下 这是什么道理 提示 细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的 关系 细胞的增殖能力与供体的年龄有关 幼龄 动物细胞增殖能力强 有丝分裂旺盛 老龄动物 则相反 所以 一般来说幼年动物的组织细胞比 老年动物的组织细胞易于培养 同样 组织细胞 的分化程度越低 则增殖能力越强 所以更容易 培养 思考与探究 2 动物细胞培养要经过脱分化的过程吗 为什么 动物细胞培养不需经过脱分化过程 因高 度分化的动物细
15、胞发育潜能变窄 失去了 发育成完整个体的能力 所以 动物细胞 也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱 分化过程了 要想使培养的动物细胞定向 分化 通常采用定向诱导动物干细胞 使 其分化成所需要的组织或器官 3 1997年 美国威斯康星州的一个奶牛场有一头 名叫卢辛达 Lucinda 的奶牛 年产奶量为 30 8 t 创造了世界奶牛产奶量最高新纪录 目 前世界各国高产奶牛场奶牛 年平均产奶量一般 为十几吨 而我国奶牛产奶量年平均水平仅为3 4 t 1 能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛 达吗 请说明理由 可以 卢辛达的产奶量很高 有高产奶的遗传基础 利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本
16、上全部来自该奶牛 其克隆牛具有高产的遗传基础 如果精心培育和饲养 有可能在世界范围内推广 克隆牛再与高产的公牛自然繁殖 可得到很多高 产的后代 从而加快奶牛改良进程 该克隆牛不能无限制地推广 其数量不宜过多 尤 其是在小范围内不能无限的繁殖 以避免奶牛群出 现近亲繁殖而引起种质衰退 2 如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交 给你 你将如何对它进行克隆 从卢辛达耳朵 也可用别的组织 器官 耳朵 在活体上容易取 上剪取一小块组织 在体外 培养获得该组织 如软骨组织 的细胞 从屠 宰场取废弃的牛卵巢 抽取卵母细胞体外培养 成熟 用显微针去除卵母细胞的核 再将耳细 胞注入卵母细胞 用电刺激方法使卵母细胞与 体细胞融合 这时供体核就进入了受体卵母细 胞 再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞 核的卵母细胞 使其完成细胞分裂和发育过程 核移植胚胎在体外短时间培养后 挑选正常 卵裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体 内 4 体细胞核移植技术在研究和应用上还存 在什么问题 请你查阅资料 了解这方面 的前沿动态 研究方面 克隆动物基因组重新编程的机制 尚不清楚 克隆技术效率低 克隆动物畸形 率高 死亡率高
