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1、1朝鲜族人群 DXS6854 基因座的遗传多态性研究【摘要】 目的探讨吉林省延边地区朝鲜族人群短串联重复序列(STR)基因座 DXS6854 的遗传多态性分布,获取相应多态位点的群体遗传学数据.方法采用 PCR 扩增技术及聚丙烯酰胺凝胶电泳方法, 分析 101 名朝鲜族女性和 160 名朝鲜族男性个体的 DXS6854 STR 基因座等位基因频率. 结果在女性样本 DXS6854 基因座中各检测出 6 种等位基因和 17 种不同的基因型,基因座多态性分布符合 HardyWeinberg 平衡定律，杂合度为 0.7723,多态信息含量为0.67,个人识别率为 0.857；在男性样本 DXS685
2、4 基因座中检测出6 种等位基因，单倍型多样性为 0.734.结论 DXS6854 基因座具有较高的个人识别力、杂合度及多态信息量,是较理想的遗传标记系统, 对朝鲜族群体的个人识别、亲子鉴定及民族遗传学研究具有重要意义. 【关键词】 串联重复序列 多态性 人种群ABSTRACT:OBJECTIVETo understand the genetic polymorphism at DXS6854 short tandem repeat (STR) locus in the KoreanChinese of Yanbian area, and to construct a correspondin
3、g database of population genetics.METHODSThe allele frequencies of the DXS6854 2locus in 101 of female and 160 of male with no sibship, in the KoreanChinese in Yanbian area were analyzed by PCR and polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE).RESULTSSix alleles and seventeen genotypes were observed at
4、DXS6854 locus in the female individuals, respectively, and met HardyWeinberg equilibrium. The statistical analysis of DXS6854 STR locus showed the heterozygosity was 0.7723, the polymorphic information contents (PIC) was 0.67; the power of discrimination (PD) was 0.857; and also six alleles were obs
5、erved at DXS6854 locus of the male individuals, the haplotype diversity reached 0.734. CONCLUSIONDXS6854 STR locus has relative high heterozygosity and PIC, and so it could provide useful markers for genetic purposes, can be used in forensic identification and paternity.Key words:tandem repeat seque
6、nces;polymorphism;ethnic groups短串联重复序列(short tandem repeat, STR)通常由长度为26bp 的核心序列串联重复而成 ,广泛存在于人类 DNA 编码区及非编码区,具有高度遗传多态性1,并遵循孟德尔遗传规律.目前，关于常染色体和 Y 染色体 STR 的研究较多，但 X 染色体 STR 多态3性研究报道少见.X 染色体 STR 遗传多态性对法医学个人识别和亲子鉴定等起重要的作用，如父女关系确定及缺少双亲的姐妹之间关系确定等2,3.本研究应用 PCR 扩增技术对吉林省延边地区朝鲜族人群 DXS6854 基因座多态性进行了实验研究，获得了群体遗传
7、多态性资料，为相关疾病的诊断、法医学个人识别及亲子鉴定提供依据.1 材料与方法1.1 样本 261 份无血缘关系的朝鲜族个体的抗凝血由延边大学临床医学院提供，其中女性为 101 份，男性为 160 份.1.2 基因组 DNA 的提取 用 chelex100 方法提取 EDTA 抗凝外周血 DNA 4.1.3 PCR 扩增 参照人类基因数据库（Human genome database）资料设计 PCR 引物序列，并由 Geno Tech 公司（韩国）提供. 反应体系总量为 20L，内含 100g/L 10缓冲液，0.5mol/L引物，50kU/L Taq 酶，DNA 2L（20 30mg/L）
8、 ，最终用去离子水补充不足.将样品混匀后置入 Gene Amp PCR 2400 系统（PerkinElmer, CA）中进行扩增，其参数为 96 预变性3min，94变性 30s，61退火 30s，70延伸 30s，共循环 304次后于 72继续延伸 10min，产物置于 4条件下保存.1.4 电泳分型和银染显色1.4.1 电泳分型 取扩增产物 2.0L，与 2.0L 变性加样缓冲液混匀，95变性 2min 后立即置于冰浴，上样于 50g/L 聚丙烯酰胺凝胶上，进行电泳，恒定功率为 50W，电泳时间为 100min.1.4.2 银染显色 电泳完毕后，将凝胶用双蒸水冲洗 1 次，置于0.16m
9、ol/L 硝酸溶液中，轻摇反应 10min，双蒸水冲洗 1 次，置于10mmol/L 硝酸银溶液中，轻摇反应 20min，双蒸水冲洗 1 次，置于 0.28mol/L 硝酸钠溶液中，轻摇反应至可见清晰条带为止，加1.67mol/L 乙酸停止反应并固定.1.5 多态性分析及统计学分析1.5.1 多态性分析 对照等位基因分型标准物同步电泳，判读并记录基因型.1.5.2 统计学分析 通过 Power Stats Software 软件进行数据统计分析,得出等位基因及基因型频率（Frequency） 、基因型杂合度(heterozygosity observed)、个体识别力(power of dis
10、crimination, PD)及多态信息含量(polymorphism information 5content, PIC)进行单倍型多样性（haplotype diversity）分析5和 HardyWeinberg 平衡吻合度检验(Pvalue) 6.2 结果DXS6854 基因座中共检出 10，11，12，13，14 ，15 等位基因，其频率及计算出的群体遗传学指标由表 1 可见基因型频率符合Hardy Weinberg 平衡定律（P0.05）. 表 1 朝鲜族人群DXS6854 STR 位点等位基因频率及群体遗传学指标等位基因片段等位基因频率女性（101 名）男性（160 名）910
11、0.21780.2313110.45050.4313120.14850.1063130.08420.0875140.08420.1000150.01490.0438 观测杂合度 0.7723期望杂合度 0.7132多态信息含量 0.67 个人识别力 0.857单倍型多样性0.734P 值 0.7953 讨论由于 XSTR 具有特殊的遗传方式 性连锁性遗传，即 XSTR在男性的基因组中呈单倍型形式存在，且具有仅遗传给女儿而不遗6传给男儿的特点7 .利用 XSTR 基因座不仅可应用于性别鉴定，亦可应用于一些特殊的亲子鉴定，如单亲父女之间及姐妹之间的血缘关系鉴定.本研究为了探讨 XSTR 的多态性及
12、建立中国延边地区朝鲜族的 XSTR 基因座多态性数据库，故选择了 DXS6854 基因座.结果表明，延边地区朝鲜族群体 DXS6854 基因座的基因型分布符合HardyWeinberg 平衡定律，男性与女性之间无明显的分布差异；女性组个人识别率为 0.857，男性组单倍型多样性为 0.734，提示DXS6854 基因座具有遗传稳定性和较高的识别能力，适用于该群体的亲子鉴定和个人识别.将本研究结果与中国广东省汉族群体之间进行比较，发现汉族群体的 DXS6854 基因座中出现了第 9 等位基因8 ，提示其基因座在不同民族之间存在着一定的差异.总之，本研究从群体水平上对延边地区朝鲜族居民 DXS68
13、54 基因座的遗传结构和变化规律进行了分析，建立了 DXS6854 基因位点的群体遗传学数据库，为中国朝鲜族群体的亲子鉴定和个人识别提供了实验依据.【参考文献】 1 戚其威，张红岩，马守中,等. 青岛地区汉族群体短串连重复序列基因座 DIS549、D3S1754 和 D12S375 的遗传多态性J.中华医学遗传学杂志，2004，21(2)：184.2 崔弘，张永吉，许青松. 朝鲜族男性人群 DYS388 基因遗传7多态性分布研究J.延边大学医学学报，2006，29（3）：159.3 Butler JM. Short tandem repeat typing technologies used
14、in human identity testingJ.Biotechniques，2007,43(4):iiv.Review.4 萨姆布鲁克丁，弗里奇 EF，曼尼阿蒂 T.分子克隆实验指南M.金冬雁，黎孟枫译. 第 2 版.北京：科学出版社，1992.955.5 Nei M. Molecular Evolutionary GeneticsM. New York：Columbia University Press,1987.220.6 江三多，吕宝忠. 医学遗传数理统计方法M.北京：科学出版社，1998.11.7 Chakraborty R, Stivers DN. Paternity exclusion by DNA markers: effects of paternal mutationsJ .Forensic Sci,1996， 41(4):671.8 刘秋铃，吕德坚，崔崴.3 个 X 染色体短串联重复的复合扩散及其多态性J.中华医学遗传学杂志，2004，21（3）：233.
